com@iramn.ru
 
bbm.ktbm@gmail.com



КЛЕТОЧНЫЕ  ТЕХНОЛОГИИ  В  БИОЛОГИИ  И  МЕДИЦИНЕ

2019 г., № 2

 СОДЕРЖАНИЕ

СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ОБКЛАДОЧНЫХ КЛЕТОК ОБОНЯТЕЛЬНОЙ ВЫСТИЛКИ ЧЕЛОВЕКА И КРЫС ПРИ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКИХ КИСТАХ СПИННОГО МОЗГА
А.Д.Воронова1,2, О.В.Степанова1,4, М.П.Валихов1,4, А.В.Чадин1, А.С.Семкина2, М.А.Абакумов2, И.В.Решетов3, В.П.Чехонин1,279
1Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ НМИЦ ПН им. В.П.Сербского Минздрава России, Москва; 2Кафедра медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультета ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, Москва; 3Университетская клиническая больница № 1 Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России, Москва
          Обкладочные клетки обонятельной выстилки носа в экспериментальных моделях и в ряде клинических испытаний оказывали положительное воздействие на регенерацию спинного мозга. Однако использование данных клеток не изучено при терапии посттравматических кист спинного мозга. По разработанным нами протоколам были получены культуры из обонятельной выстилки человека и крыс. Культуры 3-4-го пассажа наиболее обогащены обкладочными клетками и предпочтительны для трансплантации. В область сформированных кист проводили трансплантацию 750 тыс. обкладочных клеток. Терапевтический эффект обкладочных клеток человека был более выраженным. Положительная динамика восстановления двигательной активности задних конечностей крыс может свидетельствовать о регенеративных процессах в спинном мозге после трансплантации обкладочных клеток в область посттравматических кист.
Ключевые слова: обкладочные клетки, обонятельная выстилка, клеточная терапия, кисты спинного мозга, травма спинного мозга
Адрес для корреспонденции: nastyanastyav@mail.ru. Воронова А.Д.
Литература
1.         Воронова А.Д., Степанова О.В., Валихов М.П., Чадин А.В., Дворников А.С., Решетов И.В., Чехонин В.П. Получение препарата обкладочных клеток из обонятельной выстилки человека для лечения травм спинного мозга // Клет. технол. в биол. и мед. 2017. № 4. С. 207-212.
2.         Дедов И.И., Тюльпаков А.Н., Чехонин В.П., Баклаушев В.П., Арчаков А.И., Мошковский С.А. Персонализированная медицина: современное состояние и перспективы // Вестник РАМН. 2012. Т. 67, № 12. С. 4-12.
3.         Степанова О.В., Воронова А.Д., Чадин А.В., Валихов М.П., Абакумов М.А., Решетов И.В., Чехонин В.П. Получение обкладочных клеток обонятельной выстилки крыс и их использование в терапии посттравматических кист спинного мозга // Клет. технол. в биол. и мед. 2018. № 1. С. 20-24.
4.         Basso D.M., Beattie M.S., Bresnahan J.C. A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats // J. Neurotrauma. 1995. Vol. 12, N 1. P. 1-21.
5.         Bonfield C.M., Levi A.D., Arnold P.M., Okonkwo D.O. Surgical management of post-traumatic syringomyelia // Spine (Phila Pa 1976). 2010. Vol. 35, N 21, Suppl. P. S245-S258.
6.         Cooper D.K., Bottino R. Recent advances in understanding xenotransplantation: implications for the clinic // Exp. Rev. Clin. Immunol. 2015. Vol. 11, N 12. P. 1379-1390.
7.         Hodgetts S.I., Simmons P.J., Plant G.W. Human mesenchymal precursor cells (Stro-1+) from spinal cord injury patients improve functional recovery and tissue sparing in an acute spinal cord injury rat model // Cell Transplant. 2013. Vol. 22, N 3. P. 393-412.
8.         Hodgetts S.I., Simmons P.J., Plant G.W. A comparison of the behavioral and anatomical outcomes in sub-acute and chronic spinal cord injury models following treatment with human mesenchymal precursor cell transplantation and recombinant decorin // Exp. Neurol. 2013. Vol. 248. P. 343-359.
9.         Kocsis J.D., Lankford K.L., Sasaki M., Radtke C. Unique in vivo properties of olfactory ensheathing cells that may contribute to neural repair and protection following spinal cord injury // Neurosci. Lett. 2009. Vol. 456, N 3. P. 137-142.
10.       Kato T., Honmou O., Uede T., Hashi K., Kocsis J.D. Transplantation of human olfactory ensheathing cells elicits remyelination of demyelinated rat spinal cord // Glia. 2000. Vol. 30, N 3. P. 209-218.
11.       Li J., Lepski G. Cell transplantation for spinal cord injury: a systematic review // Biomed. Res. Int. 2013. Vol. 2013. ID 786475. doi: 10.1155/2013/786475
12.       Lu J., Féron F., Mackay-Sim A., Waite P.M. Olfactory ensheathing cells promote locomotor recovery after delayed transplantation into transected spinal cord // Brain. 2002. Vol. 125, Pt 1. P. 14-21.
13.       Schaan M., Jaksche H. Comparison of different operative modalities in post-traumatic syringomyelia: preliminary report // Eur. Spine J. 2001. Vol. 10, N 2. P. 135-140.
14.       Seki T., Fehlings M.G. Mechanistic insights into posttraumatic syringomyelia based on a novel in vivo animal model. Laboratory investigation // J. Neurosurg. Spine. 2008. Vol. 8, N 4. P. 365-375.
15.       Squier M.V., Lehr R.P. Post-traumatic syringomyelia // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1994. Vol. 57, N 9. P. 1095-1098.
16.       Tabakow P., Jarmundowicz W., Czapiga B., Fortuna W., Miedzybrodzki R., Czyz M., Huber J., Szarek D., Okurowski S., Szewczyk P., Gorski A., Raisman G. Transplantation of autologous olfactory ensheathing cells in complete human spinal cord injury // Cell Transplant. 2013. Vol. 22, N 9. P. 1591-1612.
17.       Yeo J., Cheng S., Hemley S., Lee B.B., Stoodley M, Bilston L. Characteristics of CSF velocity-time profile in posttraumatic syringomyelia // Am. J. Neuroradiol. 2017. Vol. 38, N 9. P. 1839-1844.
18.       Zadroga A., Jezierska-Woźniak K., Czarzasta J., Barczewska M., Wojtkiewicz J., Maksymowicz W. Therapeutic potential of olfactory ensheathing cells and mesenchymal stem cells in spinal cord injurie // Stem Cells Int. 2017. Vol. 2017. ID 3978595. doi: 10.1155/2017/3978595
19.       Zhang C., Morozova A.Y., Abakumov M.A., Gubsky I.L., Douglas P., Feng S., Bryukhovetskiy A.S., Chekhonin V.P. Precise delivery into chronic spinal cord injury syringomyelic cysts with magnetic nanoparticles MRI visualization // Med. Sci. Monit. 2015. Vol. 21. P. 3179-3185.
20.       Zhang S.X., Huang F., Gates M., White J., Holmberg E.G. Histological repair of damaged spinal cord tissue from chronic contusion injury of rat: a LM observation // Histol.
Histopathol. 2011. Vol. 26, N 1. P. 45-58.


ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ КЛЕТОК КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА С РАЗЛИЧНЫМ УРОВНЕМ ЭКСПРЕССИИ CD133
А.М.Гисина1, Я.С.Ким1, Д.М.Поташникова2, А.В.Творогова2, К.Н.Ярыгин1, А.Ю.Лупатов1 84
1ФГБНУ Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва, РФ; 2МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
          Исследовали пролиферативную активность клеток колоректального рака с разным уровнем экспрессии молекулы CD133, ассоциируемой с фенотипом раковых стволовых клеток. Анализ включения BrdU в клетки линий Caco-2 и HT-29 показал, что в популяции CD133+/high по сравнению с CD133—/low выше доля клеток в фазе синтеза ДНК. Кроме того, уровень экспрессии маркера пролиферации Ki-67, а также доля Ki-67+-клеток выше в популяции CD133+/high. Колориметрический анализ с применением кристаллического фиолетового показал, что количество клеток после 10 сут культивирования в обеих клеточных линиях было достоверно выше в популяции CD133+/high. Полученные данные позволяют заключить, что клетки с высоким уровнем экспрессии молекулы CD133 обладают более высокой пролиферативной активностью, которая может вносить вклад в опухолевую прогрессию.
Ключевые слова: CD133, пролиферация клеток, Caco-2, HT-29
Адрес для корреспонденции: alisa.gisina@gmail.com.
Гисина А.М.
Литература
1.         Суворов Р.Е., Ким Я.С., Гисина А.М., Chiang J.H., Ярыгин К.Н., Лупатов А.Ю. Поверхностные молекулярные маркеры раковых стволовых клеток: компьютерный анализ полных текстов научных публикаций // Клет. технол. в биол. и мед. 2018. № 3. С. 157-163.
2.         Batlle E., Clevers H. Cancer stem cells revisited // Nat. Med. 2017. Vol. 23, N 10. P. 1124-1134.
3.         Chang P.H., Sekine K., Chao H.M., Hsu S.H., Chern E. Chitosan promotes cancer progression and stem cell properties in association with Wnt signaling in colon and hepatocellular carcinoma cells // Sci. Rep. 2017. Vol. 8. ID 45751. doi: 10.1038/srep45751
4.         Corbeil D., Röper K., Fargeas C.A., Joester A., Huttner W.B. Prominin: a story of cholesterol, plasma membrane protrusions and human pathology // Traffic. 2001. Vol. 2, N 2, P. 82-91.
5.         Glumac P.M., LeBeau A.M. The role of CD133 in cancer: a concise review // Clin. Transl. Med. 2018. Vol. 7, N 1. P. 18. doi: 10.1186/s40169-018-0198-1
6.         Jang J.W., Song Y., Kim S.H., Kim J., Seo H.R. Potential mechanisms of CD133 in cancer stem cells // Life Sci. 2017. Vol. 184. P. 25-29.
7.         Kim Y.S., Kaidina A.M., Chiang J.H., Yarygin K.N., Lupatov A.Y. Cancer stem cell molecular markers verified in vivo // Biomed. Khim. 2016. Vol. 62, N 3. P. 228-238.
8.         Mak A.B., Nixon A.M., Kittanakom S., Stewart J.M., Chen G.I., Curak J., Gingras A.C., Mazitschek R., Neel B.G., Stagljar I., Moffat J. Regulation of CD133 by HDAC6 promotes
b-catenin signaling to suppress cancer cell differentiation // Cell Rep. 2012. Vol. 2, N 4. P. 951-963.
9.         Röper K., Corbeil D., Huttner W.B. Retention of prominin in microvilli reveals distinct cholesterol-based lipid micro-domains in the apical plasma membrane // Nat. Cell Biol. 2000. Vol. 2, N 9. P. 582-592.
10.       Zacchigna S., Oh H., Wilsch-Bräuninger M., Missol-Kolka E., Jászai J., Jansen S., Tanimoto N., Tonagel F., Seeliger M., Huttner W.B., Corbeil D., Dewerchin M., Vinckier S., Moons L., Carmeliet P. Loss of the cholesterol-binding protein prominin‑1/CD133 causes disk dysmorphogenesis and photoreceptor degeneration // J. Neurosci.
2009. Vol. 29, N 7. P. 2297-2308.


ХИМИЧЕСКОЕ РЕПРОГРАММИРОВАНИЕ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК В НЕЙРОНАЛЬНОМ НАПРАВЛЕНИИ: МИФ ИЛИ РЕАЛЬНОСТЬ?
Е.М.Самойлова1, В.А.Ревкова1, О.И.Бровкина1, В.А.Кальсин1, П.А.Мельников1,2, М.А.Коноплянников1,3, К.Р.Галимов1, А.Г.Никитин1, А.В.Троицкий1, В.П.Баклаушев1 90
1Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи ФМБА России, Москва; 2Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ НМИЦ ПН им. В.П.Сербского Минздрава России, Москва; 3Институт регенеративной медицины ФГБОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (Сеченовский Университет), Москва, РФ
          В экспериментах in vitro на культурах мультипотентных стволовых клеток костного мозга и дентальной пульпы человека исследовали прямое репрограммирование в нейроглиальном направлении с помощью коктейля малых молекул. Репрограммирование как с помощью ранее опубликованного протокола (коктейль, содержащий b-меркаптоэтанол, LIF, VPA, CHIR99021 и RepSox), так и с помощью оптимизированного нами протокола (VPA, RG108, А83-01, дорзоморфин, тиазовивин, CHIR99021, аскорбиновая кислота, форсколин, Isx9) позволяет получить клетки, имеющие определенные иммунофенотипические и генетические признаки нейральных стволовых клеток. Однако ни в том, ни в другом случае не удалось получить способные к адекватной терминальной дифференцировке нейральные прогениторы ни из мезенхимных стволовых клеток костного мозга, ни из нестин-положительных мезенхимных стволовых клеток — производных нервного гребня. ПЦР в реальном времени показала экспрессию отдельных маркеров нейрогенеза, однако характерного для нейральных стволовых клеток паттерна экспрессии обнаружено не было. Полученные результаты позволяют заключить, что репрограммирование с помощью малых молекул без дополнительных способов модификации экспрессии генов не позволяет воспроизводимо получать подобные нейральным стволовым клеткам нейрональные предшественники человека, пригодные в качестве источника клеток нервной ткани для регенеративной терапии.
Ключевые слова: химическое репрограммирование, малые молекулы, CHIR99021, Isx9, нейральные стволовые клетки
Адрес для корреспонденции: samoyket@gmail.com. Самойлова Е.М.
Литература
1.         Bettio L.E.B., Gil-Mohapel J., Patten A.R., O'Rourke N.F., Hanley R.P., Gopalakrishnan K., Wulff J.E., Christie B.R. Effects of Isx-9 and stress on adult hippocampal neurogenesis: Experimental considerations and future perspectives // Neurogenesis (Austin). 2017. Vol. 4, N 1. ID e1317692. doi: 10.1080/23262133.2017.1317692
2.         Blanchard J.W., Eade K.T., Szücs A., Lo Sardo V., Tsunemoto R.K., Williams D., Sanna P.P., Baldwin K.K. Selective conversion of fibroblasts into peripheral sensory neurons // Nat. Neurosci. 2015. Vol. 18, N 1. P. 25-35.
3.         BiswasD., Jiang P. Chemically induced reprogramming of somatic cells to pluripotent stem cells and neural cells // Int. J. Mol. Sci. 2016. Vol. 17, N 2. ID 226. doi: 10.3390/ijms17020226
4.         Caiazzo M., Dell'Anno M.T., Dvoretskova E., Lazarevic D., Taverna S., Leo D., Sotnikova T.D., Menegon A., Roncaglia P., Colciago G., Russo G., Carninci P., Pezzoli G., Gainetdinov R.R., Gustincich S., Dityatev A., Broccoli V. Direct generation of functional dopaminergic neurons from mouse and human fibroblasts // Nature. 2011. Vol. 476. P. 224-227.
5.         Cheng L., Hu W., Qiu B., Zhao J., Yu Y., Guan W., Wang M., Yang W., Pei G. Generation of neural progenitor cells by chemical cocktails and hypoxia // Cell Res. 2014. Vol. 24, N 6. P. 665-679.
6.         Fu Y., Huang C., Xu X., Gu H., Ye Y., Jiang C., Qiu Z., Xie X. Direct reprogramming of mouse fibroblasts into cardiomyocytes with chemical cocktails // Cell Res. 2015. Vol. 25, N 9. P. 1013-1024.
7.         Fusaki N., Ban H., Nishiyama A., Saeki K., Hasegawa M. Efficient induction of transgene-free human pluripotent stem cells using a vector based on Sendai virus, an RNA virus that does not integrate into the host genome // Proc. Jpn. Acad. Ser. B Phys. Biol. Sci. 2009. Vol. 85, N 8. P. 348-362.
8.         Hou P., Li Y., Zhang X., Liu C., Guan J., Li H., Zhao T., Ye J., Yang W., Liu K., Ge J., Xu J., Zhang Q., Zhao Y., Deng H. Pluripotent stem cells induced from mouse somatic cells by small-molecule compounds // Science. 2013. Vol. 341. P. 651-654.
9.         Kelaini S., Cochrane A., Margariti A. Direct reprogramming of adult cells: avoiding the pluripotent state // Stem Cells Cloning. 2014. Vol. 7. P. 19-29.
10.       Kim S.M., Flaßkamp H., Hermann A., Araúzo-Bravo M.J., Lee S.C., Lee S.H., Seo E.H., Lee S.H., Storch A., Lee H.T., Schöler H.R., Tapia N., Han D.W. Direct conversion of mouse fibroblasts into induced neural stem cells // Nat. Protoc. 2014. Vol. 9, N 4. P. 871-881.
11.       Li H., Radford J.C., Ragusa M.J., Shea K.L., McKercher S.R., Zaremba J.D., Soussou W., Nie Z., Kang Y.J., Nakanishi N., Okamoto S., Roberts A.J., Schwarz J.J., Lipton S.A. Transcription factor MEF2C influences neural stem/progenitor cell differentiation and maturation in vivo // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2008. Vol. 105, N 27. P. 9397-9402.
12.       Li X., Zuo X., Jing J., Ma Y., Wang J., Liu D., Zhu J., Du X., Xiong L., Du Y., Xu J., Xiao X., Wang J., Chai Z., Zhao Y., Deng H. Small-molecule-driven direct reprogramming of mouse fibroblasts into functional neuros // Cell Stem Cell. 2015. Vol. 17, N 2. P. 195-203.
13.       Liu J.A., Cheung M. Neural crest stem cells and their potential therapeutic applications // Dev. Biol. 2016. Vol. 419, N 2. P. 199-216.
14.       Meraviglia V., Zanon A., Lavdas A.A., Schwienbacher C., Si­lipigni R., Di Segni M., Chen H.S., Pramstaller P.P., Hicks A.A., Rossini A. Generation of induced pluripotent stem cells from frozen buffy coats using non-integrating episomal plasmids // J. Vis. Exp. 2015. N 100. ID e52885. doi: 10.3791/52885
15.       Nagoshi N., Khazaei M., Ahlfors J.E., Ahuja C.S., Nori S., Wang J., Shibata S., Fehlings M.G. Human spinal oligodendrogenic neural progenitor cells promote functional recovery after spinal cord injury by axonal remyelination and tissue sparing // Stem Cells Transl. Med. 2018. Vol. 7, N 11. P. 806-818.
16.       Potthoff M.J., Olson E.N. MEF2: a central regulator of diverse developmental programs // Development. 2007. Vol. 134, N 23. P. 4131-4140.
17.       Poulos J. The limited application of stem cells in medicine: a review // Stem Cell Res. Ther. 2018. Vol. 9, N 1. doi: 10.1186/s13287-017-0735-7
18.       Qin H., Zhao A., Fu X. Small molecules for reprogramming and transdifferentiation // Cell Mol. Life Sci. 2017 Vol. 74, N 19. P. 3553-3575.
19.       Rikhtegar R., Pezeshkian M., Dolati S., Safaie N., Afrasiabi Rad A., Mahdipour M., Nouri M., Jodati A.R., Yousefi M. Stem cells as therapy for heart disease: iPSCs, ESCs, CSCs, and skeletal myoblasts // Biomed. Pharmacother. 2018. Vol. 109. P. 304-313.
20.       Samoilova E.M., Kalsin V.A., Kushnir N.M., Chistyakov D.A., Troitskiy A.V., Baklaushev V.P. Adult neural stem cells: basic research and production strategies for neurorestorative therapy // Stem Cells Int. 2018. Vol. 2018. ID 4835491. doi: 10.1155/2018/4835491
21.       Son E.Y., Ichida J.K., Wainger B.J., Toma J.S., Rafuse V.F., Woolf C.J., Eggan K. Conversion of mouse and human fibroblasts into functional spinal motor neurons // Cell Stem Cell. 2011. Vol. 9, N 3. P. 205-218.
22.       Takahashi K., Tanabe K., Ohnuki M., Narita M., Ichisaka T., Tomoda K., Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors // Cell. 2007. Vol. 131, N 5. P. 861-872.
23.       Vierbuchen T., Wernig M. Molecular roadblocks for cellular reprogramming // Mol. Cell. 2012. Vol. 47, N 6. P. 827-838.
24.       Warren L., Ni Y., Wang J., Guo X. Feeder-free derivation of human induced pluripotent stem cells with messenger RNA // Sci. Rep. 2012. Vol. 2. ID 657. doi: 10.1038/srep00657
25.       Yamamoto A., Sakai K., Matsubara K., Kano F., Ueda M. Multifaceted neuro-regenerative activities of human dental pulp stem cells for functional recovery after spinal cord injury // Neurosci. Res. 2014. Vol. 78. P. 16-20.
26.       Zhou H., Wu S., Joo J.Y., Zhu S., Han D.W., Lin T., Trauger S., Bien G., Yao S., Zhu Y., Siuzdak G., Schöler H.R., Duan L., Ding S. Generation of induced pluripotent stem cells using recombinant proteins // Cell Stem Cell. 2009.
Vol. 4, N 5. P. 381-384.


ИЗМЕНЕНИЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ КОНТАКТОВ И НАРУШЕНИЕ МИТОТИЧЕСКОГО ЦИКЛА КЛЕТОК АЛЛОТРАНСПЛАНТАТОВ ЭМБРИОНАЛЬНОГО НЕОКОРТЕКСА КРЫСЫ
Е.С.Петрова, Е.А.Колос – 101
Лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы (рук. — проф. РАН Д.Э.Коржевский) Отдела общей и частной морфологии ФГБНУ Института экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, РФ
          Иммуногистохимическими методами исследовали морфологические изменения, происходящие в аллотрансплантатах стенки переднего мозгового пузыря крысы в ранние сроки после пересадки в нерв взрослой крысы. С помощью иммуногистохимической реакции к бромдезоксиуридину установлено, что задержка митотического деления нейральных стволовых/прогениторных клеток в трансплантатах происходит в периоде S/G2. В трансплантатах эмбрионального неокортекса крысы (Е13) через 3 ч после пересадки в нерв изменение клеточного цикла нейральных стволовых/прогениторных клеток коррелирует с нарушением распределения адгезивных клеточных контактов и интеркинетической миграции ядер.
Ключевые слова: нейральные стволовые/прогениторные клетки, нейротрансплантация, адгезивные клеточные контакты, кадгерин, бромдезоксиуридин
Адрес для корреспонденции: iemmorphol@yandex.ru. Петрова Е.С.
Литература
1.         Григорьев И.П., Коржевский Д.Э. Современные технологии фиксации биологического материала, применяемые при проведении иммуногистохимических исследований (обзор) // Соврем. технол. в медицине. 2018. Т. 10, № 2. С. 156-165.
2.         Лосева Е.В. Cтволовые клетки для коррекции нейродегенеративных расстройств // Нейрокомпьютеры: разработка, применение. 2013. № 7. С. 32-44.
3.         Петрова Е.С. Изучение гистогенетических и нейродегенеративных процессов в нервной системе с помощью гетеротопической нейротрансплантации// Морфология. 2009. Т. 136, № 6. С. 8-19.
4.         Петрова Е.С., Отеллин В.А. Изучение митотической активности и дегенерации клеток дорсолатеральной стенки переднего мозгового пузыря эмбрионов крыс на модели эктопической нейротрансплантации // Бюл. экспер. биол. 2006. Т. 142, № 8. С. 237-240.
5.         Calegari F., Huttner W.B. An inhibition of cyclin-dependent kinases that lengthens, but does not arrest, neuroepithelial cell cycle induces premature neurogenesis // J. Cell Sci. 2003. Vol. 116, Pt 24. P. 4947-4955.
6.         Hatakeyama J., Wakamatsu Y., Nagafuchi A., Kageyama R., Shigemoto R., Shimamura K. Cadherin-based adhesions in the apical endfoot are required for active Notch signaling to control neurogenesis in vertebrates // Development. 2014. Vol. 141, N 8. P. 1671-1682.
7.         Petrova E.S. Astrogliogenesis in heterotopic allotransplants of rat embryonic neocortex // Bull. Exp. Biol. Med. 2012. Vol. 152, N 4. P. 504-508.
8.         Pilaz L.J., Patti D., Marcy G., Ollier E., Pfister S., Douglas R.J., Betizeau M., Gautier E., Cortay V., Doerflinger N., Kennedy H., Dehay C. Forced G1-phase reduction alters mode of division, neuron number, and laminar phenotype in the cerebral cortex // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2009. Vol. 106, N 51. P. 21 924‑21 929.
9.         Schmid M.T., Weinandy F., Wilsch-Bräuninger M., Huttner W.B., Cappello S., Götz M. The role of
a-E-catenin in cerebral cortex development: radial glia specific effect on neuronal migra­tion // Front. Cell. Neurosci. 2014. Vol. 8. ID 215. doi: 10.3389/fncel.2014.00215
10.       Smirnov E.B., Bystròn I.P., Puchkov V.F., Otellin V.A. Mitotic activity and rosette formation in the neuroepithelium of the human embryo neocortex in vitro // Neurosci. Behav. Physiol. 1998.Vol. 28, N 5. P. 473-477.
11.       Spear P.C., Erickson C.A. Interkinetic nuclear migration: a mysterious process in search of a function // Dev. Growth Differ. 2012. Vol. 54, N 3.
Р. 306-316.
12.       Strzyz P.J., Lee H.O., Sidhaye J., Weber I.P., Leung L.C., Norden C. Interkinetic nuclear migration is centrosome independent and ensures apical cell division to maintain tissue integrity // Dev. Cell. 2015. Vol. 32, N 2. P. 203-219.
13.       Sukhinich K.K., Kosykh A.V., Aleksandrova M.A. Differentiation and cell-cell interactions of neural progenitor cells transplanted into intact adult brain // Bull. Exp. Biol. Med. 2015. Vol. 160, N 1. P. 115-122.
14.       Sukhinich K.K., Podgorny
э O.V., Aleksandrova M.A. Immunohistochemical analysis of development of suspension and tissue neurotransplants // Izv. Akad. Nauk Ser. Biol. 2011. N 6. P. 659-669.
15.       Willardsen M.I., Link B.A. Cell biological regulation of division fate in vertebrate neuroepithelial cells // Dev. Dyn. 2011. Vol. 240, N 8. P. 1865-1879.
16.       Zhuravleva Z.N., Hutsyan S.S., Zhuravlev G.I. Phenotypic differentiation of neurons in intraocular transplants // Ontogenez.
2016. Vol. 47, N 3. P. 181-188.


ПРОНИКНОВЕНИЕ ЛАКТОФЕРРИНА ЧЕЛОВЕКА В МОЗГ МЫШИ: ПУТИ ВВЕДЕНИЯ И РАСПРЕДЕЛЕНИЕ
М.Ю.Копаева1, А.Б.Черепов1, И.Ю.Зарайская1, М.В.Нестеренко2 106
1НИЦ Курчатовский институт, Москва, РФ; 2ООО “Лактобио”, Москва, РФ
          Изучали пути транспортировки человеческого лактоферрина в головной мозг мышей линии С57BL/6 при разных способах введения раствора этого белка. Исследовали его распределение в мозге и определяли фенотип клеток, включающих этот белок. Колокализацию человеческого лактоферрина и маркеров разного типа клеток оценивали с помощью флюоресцентного иммуногистохимического анализа. Установлено, что человеческий лактоферрин присутствовал в срезах мозга мышей после введения белка интраназально, подъязычно и внутрибрюшинно. При конъюнктивальном введении белок в анализируемых образцах не наблюдался. После интраназального введения лактоферрин быстро проникал в головной мозг и накапливался в цитоплазме эндотелиальных клеток сосудов в отдельных областях неокортекса, стриатуме, гиппокампе и таламусе. После нанесения раствора белка на фиксированные плавающие срезы было выявлено высокоспецифичное его связывание в ядрах нейронов, астроцитов и клеток микроглии, но не в ядрах эндотелиальных клеток в мозге мыши.
Ключевые слова: человеческий лактоферрин, нейроны, астроциты, микроглия, клетки эндотелия
Адрес для корреспонденции: kopaeva_my@nrcki.ru. Копаева М.Ю.
Литература
1.         Bi C., Wang A., Chu Y., Liu S., Mu H., Liu W., Wu Z., Sun K., Li Y. Intranasal delivery of rotigotine to the brain with lactoferrin-modified PEG-PLGA nanoparticles for Parkinson's disease treatment // Int. J. Nanomedicine. 2016. Vol. 11. P. 6547-6559.
2.         Conneely O.M. Antiinflammatory activities of lactoferrin // J. Am. Coll. Nutr. 2001. Vol. 20, N 5, Suppl. P. 389S-395S.
3.         Elfinger M., Maucksch C., Rudolph C. Characterization of lactoferrin as a targeting ligand for nonviral gene delivery to airway epithelial cells // Biomaterials. 2007. Vol. 28, N 23. P. 3448-3455.
4.         Faraji N., Zhang Y., Ray A.K. Determination of adsorption isotherm parameters for minor whey proteins by gradient elution preparative liquid chromatography // J. Chromatogr. A. 2015. Vol. 1412. P. 67-74.
5.         Fillebeen C., Descamps L., Dehouck M.P., Fenart L., Bena
пssa M., Spik G., Cecchelli R., Pierce A. Receptor-mediated transcytosis of lactoferrin through the blood-brain barrier // J. Biol. Chem. 1999. Vol. 274, N 11. P. 7011-7017.
6.         Fischer R., Debbabi H., Blais A., Dubarry M., Rautureau M., Boyaka P.N., Tome D. Uptake of ingested bovine lactoferrin and its accumulation in adult mouse tissues // Int. Immunopharmacol. 2007. Vol. 7, N 10. P. 1387-1393.
7.         García-Montoya I.A., Cendón T.S., Arévalo-Gallegos S., Rascón-Cruz Q. Lactoferrin a multiple bioactive protein: an overview // Biochim. Biophys. Acta. 2012. Vol. 1820, N 3. P. 226-236.
8.         Hayashi T., To M., Saruta J., Sato C., Yamamoto Y., Kondo Y., Shimizu T., Kamata Y., Tsukinoki K. Salivary lactoferrin is transferred into the brain via the sublingual route // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2017. Vol. 81, N 7. P. 1300-1304.
9.         Hu K., Li J., Shen Y., Lu W., Gao X., Zhang Q., Jiang X. Lactoferrin-conjugated PEG-PLA nanoparticles with improved brain delivery: in vitro and in vivo evaluations // J. Control. Release. 2009. Vol. 134, N 1. P. 55-61.
10.       Johnson E.E., Wessling-Resnick M. Iron metabolism and the innate immune response to infection // Microbes Infect. 2012. Vol. 14, N 3. P. 207-216.
11.       Kamemori N., Takeuchi T., Sugiyama A., Miyabayashi M., Kitagawa H., Shimizu H., Ando K., Harada E. Trans-endothelial and trans-epithelial transfer of lactoferrin into the brain through BBB and BCSFB in adult rats // J. Vet. Med. Sci. 2008. Vol. 70, N 3. P. 313-315.
12.       Kumar V., Hassan M.I., Kashav T., Singh T.P., Yadav S. Heparin-binding proteins of human seminal plasma: purification and characterization // Mol. Reprod. Dev. 2008. Vol. 75, N 12. P. 1767-1774.
13.       Kumari S., Ahsan S.M., Kumar J.M., Kondapi A.K., Rao N.M. Overcoming blood brain barrier with a dual purpose temozolomide loaded lactoferrin nanoparticles for combating glioma (SERP-17-12433) // Sci. Rep. 2017. Vol. 7, N 1. ID 6602. doi: 10.1038/s41598-017-06888-4
14.       Orsi N. The antimicrobial activity of lactoferrin: current status and perspectives // Biometals. 2004. Vol. 17, N 3. P. 189-196.
15.       Qian Z.M., Wang Q. Expression of iron transport proteins and excessive iron accumulation in the brain in neurodegenerative disorders // Brain Res. Brain Res. Rev. 1998. Vol. 27, N 3. P. 257-267.
16.       Rosa L., Cutone A., Lepanto M.S., Scotti M.J., Conte M.P., Paesano R., Valenti P. Physico-chemical properties influence the functions and efficacy of commercial bovine lactoferrins // Biometals. 2018. Vol. 31, N 3. P. 301-312.
17.       Suzuki Y.A., Lopez V., Lönnerdal B. Mammalian lactoferrin receptors: structure and function // Cell. Mol. Life Sci. 2005. Vol. 62, N 22. P. 2560-2575.
18.       Thorne R.G., Lakkaraju A., Rodriguez-Boulan E., Nicholson C. In vivo diffusion of lactoferrin in brain extracellular space is regulated by interactions with heparan sulfate // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2008. Vol. 105, N 24. P. 8416-8421.
19.       Tuccari G., Barresi G. Lactoferrin in human tumours: immunohistochemical investigations during more than 25 years // Biometals. 2011. Vol. 24, N 5. P. 775-784.
20.       Ward P.P., Conneely O.M. Lactoferrin: role in iron homeostasis and host defense against microbial infection // Biometals. 2004. Vol. 17, N 3. P. 203-208.
21.       Yan X., Xu L., Bi C., Duan D., Chu L., Yu X., Wu Z., Wang A., Sun K. Lactoferrin-modified rotigotine nanoparticles for enhanced nose-to-brain delivery: LESA-MS/MS-based drug biodistribution, pharmacodynamics, and neuroprotective effects // Int. J. Nanomedicine. 2018. Vol. 13. P. 273-281.
22.       Zhang Y., Lou F., Wu W., Dong X., Ren J., Shen Q. Determination of bovine lactoferrin in food by HPLC with a heparin affinity column for sample preparation // J. AOAC Int. 2017.
Vol. 100, N 1. P. 133-138.


РОЛЬ ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА OCT4 В ПОСТНАТАЛЬНОМ РАЗВИТИИ И ФУНКЦИОНИРОВАНИИ КОРКОВОГО ВЕЩЕСТВА НАДПОЧЕЧНИКОВ
Н.В.Яглова, С.С.Обернихин, С.В.Назимова, В.В.Яглов – 114
Лаборатория развития эндокринной системы (зав. — д-р мед. наук Н.В.Яглова) ФГБНУ НИИ морфологии человека, Москва, РФ
          Изучена экспрессия транскрипционного фактора Oct4 в корковом веществе надпочечников крыс в постнатальном онтогенезе. Установлено, что Oct4 экспрессируется типичными кортикостероцитами клубочковой, пучковой и сетчатой зоны в пубертатном и постпубертатном периоде. Наибольшая численность Oct4+-клеток наблюдается в клубочковой зоне. Выявлена обратная корреляция между числом Oct4+-клеток в клубочковой зоне и уровнем альдостерона в сыворотке крови в пубертатном и постпубертатном периоде и прямая корреляция между числом Oct4+ и Ki-67+ клеток в постпубертатном периоде. Полученные данные позволяют выдвинуть гипотезу о роли Oct4 в постнатальном морфогенезе, физиологической регенерации и функционировании коркового вещества надпочечников.
Ключевые слова: Oct4, плюрипотентность, надпочечник, пролиферация, постнатальное развитие
Адрес для корреспонденции: yaglova@mail.ru. Яглова Н.В.
Литература
1.         Bruder E.D., Nagler A.K., Raff H. Oxygen-dependence of ACTH-stimulated aldosterone and corticosterone synthesis in the rat adrenal cortex: developmental aspects // J. Endocrinol. 2002. Vol. 172, N 3. P. 595-604.
2.         Cheng L., Sung M.T., Cossu-Rocca P., Jones T.D., MacLennan G.T., De Jong J., Lopez-Beltran A., Montironi R., Looijenga L.H. OCT4: biological functions and clinical applications as a marker of germ cell neoplasia // J. Pathol. 2007. Vol. 211, N 1. P. 1-9.
3.         Freedman B.D., Kempna P.B., Carlone D.L., Shah M., Guagliardo N.A., Barrett P.Q., Gomez-Sanchez C.E., Majzoub J.A., Breault D.T. Adrenocortical zonation results from lineage conversion of differentiated zona glomerulosa cells // Dev. Cell. 2013. Vol. 26, N 6. P. 666-673.
4.         Ishimoto H., Jaffe R.B. Development and function of the human fetal adrenal cortex: a key component in the feto-placental unit // Endocr. Rev. 2011. Vol. 32, N 3. P. 317-355.
5.         Liedtke S., Stephan M., Kögler G. Oct4 expression revisited: potential pitfalls for data misinterpretation in stem cell research // Biol. Chem. 2008. Vol. 389, N 7. P. 845-850.
6.         Liu X., Huang J., Chen T., Wang Y., Xin S., Li J., Pei G., Kang J. Yamanaka factors critically regulate the developmental signaling network in mouse embryonic stem cells // Cell Res. 2008. Vol. 18, N 12. P. 1177-1189.
7.         Looijenga L.H., Stoop H., de Leeuw H.P., de Gouveia Brazao C.A., Gillis A.J., van Roozendaal K.E., van Zoelen E.J., Weber R.F., Wolffenbuttel K.P., van Dekken H., Honecker F., Bokemeyer C., Perlman E.J., Schneider D.T., Kononen J., Sauter G., Oosterhuis J.W. POU5F1 (OCT3/4) identifies cells with pluripotent potential in human germ cell tumors // Cancer Res. 2003. Vol. 63, N 9. P. 2244-2250.
8.         Lorente M., Mirapeix R.M., Miguel M., Longmei W., Volk D., Cervós-Navarro J. Chronic hypoxia induced ultrastructural changes in the rat adrenal zona glomerulosa // Histol. Histopathol. 2002. Vol. 17, N 1. P. 185-190.
9.         Mazroa S., Asker S. Ultrastructural changes in zona fasiculata cells of suprarenal cortex in adult male albino rats after short exposure to high ambient temperature and the effect of fish oil administration // Egypt. J. Histol. 2010. Vol. 33, N 1. P. 23‑31.
10.       Mitani F. Functional zonation of the rat adrenal cortex: the development and maintenance // Proc. Jpn. Acad. Ser. B Phys. Biol. Sci. 2014. Vol. 90, N 5. P. 163-183.
11.       Mitani F., Mukai K., Miyamoto H., Suematsu M., Ishimura Y. The undifferentiated cell zone is a stem cell zone in adult rat adrenal cortex // Biochim. Biophys. Acta. 2003. Vol. 1619, N 3. P. 317-324.
12.       Niwa H., Miyazaki J., Smith A.G. Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells // Nat. Genet. 2000. Vol. 24, N 4. P. 372‑376.
13.       Olariu V., Lövkvist C., Sneppen K. Nanog, Oct4 and Tet1 interplay in establishing pluripotency // Sci. Rep. 2016. Vol. 6. ID 25438. doi: 10.1038/srep25438
14.       Pignatelli D., Xiao F., Gouveia A.M., Ferreira J.G., Vinson G.P. Adrenarche in the rat // J. Endocrinol. 2006. Vol. 191, N 1. P. 301-308.
15.       Rizzino A., Wuebben E.L. Sox2/Oct4: a delicately balanced partnership in pluripotent stem cells and embryogenesis // Biochim. Biophys. Acta. 2016. Vol. 1859, N 6. P. 780-791.
16.       Simandi Z., Horvath A., Wright L.C., Cuaranta-Monroy I., De Luca I., Karolyi K., Sauer S., Deleuze J.F., Gudas L.J., Cowley S.M., Nagy L. OCT4 acts as an integrator of pluripotency and signal-induced differentiation // Mol. Cell. 2016. Vol. 63, N 4. P. 647-661.
17.       Takahashi K., Tanabe K., Ohnuki M., Narita M., Ichisaka T., Tomoda K., Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors // Cell. 2007. Vol. 131, N 5. P. 861-872.
18.       Takahashi K., Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors // Cell. 2006. Vol. 126, N 4. P. 663-676.
19.       Vierbuchen T., Ostermeier A., Pang Z.P., Kokubu Y., Südhof T.C., Wernig M. Direct conversion of fibroblasts to functional neurons by defined factors // Nature. 2010. Vol. 463. P. 1035‑1041.
20.       Yaglova N.V., Tsomartova D.A., Yaglov V.V. Differences in production of adrenal steroid hormones in pubertal rats exposed to low doses of the endocrine disruptor DDT during prenatal and postnatal development // Biochemistry (Mosc). Suppl. Series B: Biomed. Chem. 2018. Vol. 12, N 1.
Р.  80‑86.
21.       Yu J., Vodyanik M.A., Smuga-Otto K., Antosiewicz-Bourget J., Frane J.L., Tian S., Nie J., Jonsdottir G.A., Ruotti V., Stewart R., Slukvin I.I., Thomson J.A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells // Science.
2007. Vol. 318. P. 1917-1920.


РОЛЬ НЕЙРОТРОФИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ BDNF И GDNF В АДАПТАЦИИ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ К ДЕЙСТВИЮ ФАКТОРОВ ИШЕМИИ
Е.В.Митрошина, Т.А.Мищенко, Т.В.Шишкина, М.В.Ведунова – 121
ФГАОУ ВО Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Нижний Новгород, РФ
          Разработана комплексная модель ишемического повреждения in vitro. Исследование жизнеспособности клеток первичных культур гиппокампа после моделирования различных стресс-факторов выявило особенности действия компонентов ишемии. Применение нейротрофических  факторов BDNF и GDNF оказывает выраженное нейропротективное действие при моделировании как комплексного ишемического повреждения, так и отдельных его патофизиологических компонентов. Наиболее выраженным защитным действием обладает глиальный нейротрофический фактор.
Ключевые слова: ишемия, нейротрофический фактор головного мозга, глиальный нейротрофический фактор, первичные культуры нервных клеток, нейропротекция
Адрес для корреспонденции: Helenmitroshina@gmail.com. Митрошина Е.В.
Литература
1.         Ведунова М.В., Коротченко С.А., Балашова А.Н., Исакова А.О., Хаспеков Л.Г., Казанцев В.Б., Мухина И.В. Влияние кратковременной глюкозной депривации на функционирование нейронной сети первичной культуры гиппокампа на мультиэлектродной матрице // Соврем. технол. в медицине. 2011. № 2. С. 7-13.
2.         Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М., 2001.
3.         Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Свободнорадикальное окисление липидов и антиоксидантная защита при патологии головного мозга. М., 2000.
4.         Лукьянова Л.Д., Кирова Ю.И., Сукоян Г.В. Сигнальные механизмы адаптации к гипоксии и их роль в системной регуляции // Биол. мембраны. 2012. Т. 29,№ 4. С. 238-252.
5.         Маркин С.П. Современный подход к диагностике и лечению хронической ишемии мозга // РМЖ. 2010. Т. 18, № 8. С. 445-450.
6.         Мищенко Т.А., Митрошина Е.В., Шишкина Т.В., Ведунова М.В. Антиоксидантные свойства глиального нейротрофического фактора головного мозга // Бюл. экспер. биол. 2018. Т. 166, № 8. С. 257-260.
7.         Скворцова В.И., Евзельман М.А. Ишемический инсульт. Орел, 2006.
8.         Широкова О.М., Фрумкина Л.Е., Ведунова М.В., Митрошина Е.В., Захаров Ю.Н., Хаспеков Л.Г., Мухина И.В. Морфофункциональные закономерности развития нейронных сетей диссоциированных культур гиппокампа in vitro // Соврем. технол. в медицине. 2013. Т. 5, № 2. С. 6‑13.
9.         Budni J., Bellettini-Santos T., Mina F., Garcez M.L., Zugno A.I. The involvement of BDNF, NGF and GDNF in aging and Alzheimer’s disease // Aging Dis. 2015. Vol. 6, N 5. P. 331-341.
10.       Chiang P.L., Chen H.L., Lu C.H., Chen Y.S., Chou K.H., Hsu T.W., Chen M.H., Tsai N.W., Li S.H., Lin W.C. Interaction of systemic oxidative stress and mesial temporal network degeneration in Parkinson’s disease with and without cognitive impairment // J. Neuroinflammation. 2018. Vol. 15, N 1. ID 281. doi: 10.1186/s12974-018-1317-z
11.       Han D., Chen S., Fang S., Liu S., Jin M., Guo Z., Yuan Y., Wang Y., Liu C., Mei X. The neuroprotective effects of muscle-derived stem cells via Brain-Derived Neurotrophic Factor in spinal cord injury model // Biomed. Res. Int. 2017. Vol. 2017. ID 1972608. doi: 10.1155/2017/1972608
12.       Hertz L. Bioenergetics of cerebral ischemia: a cellular perspective // Neuropharmacology. 2008. Vol. 55, N 3. P. 289-309.
13.       Hwang I.C., Kim J.Y., Kim J.H., Lee J.E., Seo J.Y., Lee J.W., Park J., Yang H.M., Kim S.H., Cho H.J., Kim H.S. Therapeutic potential of a novel necrosis inhibitor, 7-amino-indole, in myocardial ischemia-reperfusion injury // Hypertension. 2018. Vol. 71, N 6. P. 1143-1155.
14.       Kirkman M.A., Smith M. Brain oxygenation monitoring // Anesthesiol Clin. 2016. Vol. 34, N 3. P. 537-556.
15.       Konishi Y., Yang L.B., He P., Lindholm K., Lu B., Li R., Shen Y. Deficiency of GDNF receptor GFRa1 in Alzheimer's neurons results in neuronal death // J. Neurosci. 2014. Vol. 34, N 39. P. 13 127-13 138.
16.       Kowiański P., Lietzau G., Czuba E., Waśkow M., Steliga A., Moryś J. BDNF: a key factor with multipotent impact on brain signaling and synaptic plasticity // Cell Mol. Neurobiol. 2018. Vol. 38, N 3. P. 579-593.
17.       Lorigados Pedre L., Gallardo J.M., Morales Chacón L.M., Vega Garí
нa A., Flores-Mendoza M., Neri-Gómez T., Estupiñán Díaz B., Cruz-Xenes R.M., Pavón Fuentes N., Orozco-Suárez S. Oxidative stress in patients with drug resistant partial complex seizure // Behav. Sci. (Basel). 2018. Vol. 8, N 6. pii: E59. doi: 10.3390/bs8060059
18.       Mercado N.M., Collier T.J., Sortwell C.E., Steece-Collier K. BDNF in the aged brain: translational implications for Parkinson's disease // Austin Neurol. Neurosci. 2017. Vol. 2, N 2. pii: 1021.
19.       Olmez I., Ozyurt H. Reactive oxygen species and ischemic cerebrovascular disease // Neurochem. Int. 2012. Vol. 60, N 2. P. 208-212.
20.       Shen T., You Y., Joseph C., Mirzaei M., Klistorner A., Graham S.L., Gupta V. BDNF polymorphism: a review of its diagnostic and clinical relevance in neurodegenerative disorders // Aging Dis. 2018. Vol. 9, N 3. P. 523-536.
21.       Tupurani M.A., Padala C., Puranam K., Galimudi R.K., Kupsal K., Shyamala N., Gantala S., Kummari R., Chinta S.K., Hanumanth S.R. Association of CYBA gene (-930 A/G and 242 C/T) polymorphisms with oxidative stress in breast cancer: a case-control study // PeerJ. 2018. Vol. 6. ID e5509. doi: 10.7717/peerj.5509
22.       Vedunova M.V., Mishchenko T.A., Mitroshina E.V., Mukhina I.V. TrkB-mediated neuroprotective and antihypoxic properties of Brain-Derived Neurotrophic Factor // Oxid. Med. Cell. Longev. 2015. Vol. 2015. ID 453901. doi: 10.1155/2015/453901
23.       Vedunova M., Sakharnova T., Mitroshina E., Perminova M., Pimashkin A., Zakharov Y., Dityatev A., Mukhina I. Seizure-like activity in hyaluronidase-treated dissociated hippocampal cultures // Front. Cell. Neurosci. 2013. Vol. 7. ID 149. doi: 10.3389/fncel.2013.00149
24.       Walker M., Xu X.M. History of Glial Cell Line-Derived Neurotrophic Factor (GDNF) and its use for spinal cord injury repair // Brain Sci. 2018. Vol. 8, N 6. pii: E109. doi: 10.3390/brainsci8060109
25.       Wurzelmann M., Romeika J., Sun D. Therapeutic potential of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and a small molecular mimics of BDNF for traumatic brain injury // Neural Regen.
Res. 2017. Vol. 12, N 1. P. 7-12.


МУЛЬТИПОТЕНТНЫЕ МЕЗЕНХИМНЫЕ СТРОМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ ПЕРЕД ОТМЕНОЙ ТЕРАПИИ ИНГИБИТОРАМИ ТИРОЗИНОВЫХ КИНАЗ
Н.А.Петинати, А.Н.Петрова, Е.Ю.Челышева, О.А.Шухов, А.В.Быкова, И.С.Немченко, Н.В.Сац, А.Г.Туркина, Н.И.Дризе – 128
ФГБУ НМИЦ гематологии Минздрава России, Москва
          Анализировали изменения в мультипотентных мезенхимных стромальных клетках пациентов с хроническим миелоидным лейкозом перед отменой ингибиторов тирозиновых киназ. Синдром отмены достоверно чаще возникал у больных, которые более длительное время принимали ингибиторы тирозиновых киназ. Это пациенты более пожилого возраста и с меньшей массой тела, чем пациенты, у которых не наблюдалось синдрома отмены. Суммарная клеточная продукция мезенхимных стромальных клеток и экспрессия генов FGFR2 и MMP2 в них у больных с синдромом отмены была достоверно ниже, чем без него. У больных с синдромом отмены достоверно реже утрачивался глубокий молекулярный ответ. При этом в стромальных клетках больных с синдромом отмены и утратой глубокого молекулярного ответа была существенно ниже экспрессия важных для поддержания стволовых клеток генов (SOX9, PDGFRa, LIF). Выявлена взаимосвязь между развитием синдрома отмены и утратой глубокого молекулярного ответа. Снижение уровня экспрессии генов FGFR2 и MMP2 в мезенхимных стромальных клетках больных хроническим миелоидным лейкозом перед отменой лечения может быть предиктором возникновения синдрома отмены, а одновременное снижение уровня экспрессии SOX9, PDGFRa и LIF в стромальных клетках этих больных свидетельствует о нежелательности отмены лечения в настоящий момент.
Ключевые слова: хронический миелоидный лейкоз, синдром отмены, молекулярный рецидив, мультипотентные мезенхимные стромальные клетки, относительный уровень экспрессии генов
Адрес для корреспонденции: loel@mail.ru. Дризе Н.И.
Литература
1.         Aggoune D., Sorel N., Bonnet M.L., Goujon J.M., Tarte K., Hérault O., Domenech J., Réa D., Legros L., Johnson-Ansa H., Rousselot P., Cayssials E., Guerci-Bresler A., Bennaceur-Griscelli A., Chomel J.C., Turhan A.G. Bone marrow mesenchymal stromal cell (MSC) gene profiling in chronic myeloid leukemia (CML) patients at diagnosis and in deep molecular response induced by tyrosine kinase inhibitors (TKIs) // Leuk. Res. 2017. Vol. 60. P. 94-102.
2.         Arrigoni E., Del Re M., Galimberti S., Restante G., Rofi E., Crucitta S., Baraté C., Petrini M., Danesi R., Di Paolo A. Concise review: chronic myeloid leukemia: stem cell niche and response to pharmacologic treatment // Stem Cells Transl. Med. 2018. Vol. 7, N 3. P. 305-314.
3.         Asano M., Umezu T., Katagiri S., Kobayashi C., Tauchi T., Gotoh M., Ando K., Okabe S., Ohyashiki J.H., Ohyashiki K. Up-regulated exosomal miRNA-140-3p in CML patients with musculoskeletal pain associated with discontinuation of tyrosine kinase inhibitors // Int. J. Hematol. 2017. Vol. 105, N 4. P. 419-422.
4.         Camacho V., McClearn V., Patel S., Welner R.S. Regulation of normal and leukemic stem cells through cytokine signaling and the microenvironment // Int. J. Hematol. 2017. Vol. 105, N 5. P. 566-577.
5.         Efficace F., Baccarani M., Breccia M., Alimena G., Rosti G., Cottone F., Deliliers G.L., Baraté C., Rossi A.R., Fioritoni G., Luciano L., Turri D., Martino B., Di Raimondo F., Dabusti M., Bergamaschi M., Leoni P., Simula M.P., Levato L., Ulisciani S., Veneri D., Sica S., Rambaldi A., Vignetti M., Mandelli F.; GIMEMA. Health-related quality of life in chronic myeloid leukemia patients receiving long-term therapy with imatinib compared with the general population // Blood. 2011. Vol. 118, N 17. P. 4554-4560.
6.         Iqbal N., Iqbal N. Imatinib: a breakthrough of targeted therapy in cancer // Chemother. Res. Pract. 2014. Vol. 2014. ID 357027. doi: 10.1155/2014/357027
7.         Katagiri S., Tauchi T., Ando K., Okabe S., Gotoh M., Ohyashiki K. Low body weight and body mass index may be associated with musculoskeletal pain following imatinib discontinuation in chronic myeloid leukemia // Leuk. Res. Rep. 2017. Vol. 7. P. 33-35.
8.         Kenyon J.D., Sergeeva O., Somoza R.A., Li M., Caplan A.I., Khalil A.M., Lee Z. Analysis of -5p and -3p strands of miR-145 and miR-140 during mesenchymal stem cell chondrogenic differentiation // Tissue Eng. Part A. 2018. Vol. 25, N 1-2. P. 80-90.
9.         Kim T.D., Rea D., Schwarz M., Grille P., Nicolini F.E., Rosti G., Levato L., Giles F.J., Dombret H., Mirault T., Labussi
ѐre H., Lindhorst R., Haverkamp W., Buschmann I., Dörken B., le Coutre P.D. Peripheral artery occlusive disease in chronic phase chronic myeloid leukemia patients treated with nilotinib or imatinib // Leukemia. 2013. Vol. 27, N 6. P. 1316-1321.
10.       Laneuville P. When to stop tyrosine kinase inhibitors for the treatment of chronic myeloid leukemia // Curr. Treat. Options in Oncol. 2018. Vol. 19, N 3. ID 15. doi: 10.1007/s11864-018-0532-2
11.       Lee S.E., Choi S.Y., Song H.Y., Kim S.H., Choi M.Y., Park J.S., Kim H.J., Kim S.H., Zang D.Y., Oh S., Kim H., Do Y.R., Kwak J.Y., Kim J.A., Kim D.Y., Mun Y.C., Lee W.S., Chang M.H., Park J., Kwon J.H., Kim D.W. Imatinib withdrawal syndrome and longer duration of imatinib have a close association with a lower molecular relapse after treatment discontinuation: the KID study // Haematologica. 2016. Vol. 101, N 6. P. 717‑723.
12.       Martignetti J.A., Aqeel A.A., Sewairi W.A., Boumah C.E., Kambouris M., Mayouf S.A., Sheth K.V., Eid W.A., Dowling O., Harris J., Glucksman M.J., Bahabri S., Meyer B.F., Desnick R.J. Mutation of the matrix metalloproteinase 2 gene (MMP2) causes a multicentric osteolysis and arthritis syndrome // Nat. Genet. 2001. Vol. 28, N 3. P. 261-265.
13.       Rea D., Mahon F.X. How I manage relapse of chronic myeloid leukaemia after stopping tyrosine kinase inhibitor therapy // Br. J. Haematol. 2018. Vol. 180, N 1. P. 24-32.
14.       Richter J., Söderlund S., Lübking A., Dreimane A., Lotfi K., Markevärn B., Själander A., Saussele S., Olsson-Strömberg U., Stenke L. Musculoskeletal pain in patients with chronic myeloid leukemia after discontinuation of imatinib: a tyrosine kinase inhibitor withdrawal syndrome? // J. Clin. Oncol. 2014. Vol. 32, N 25. P. 2821-2823.
15.       Saußele S., Richter J., Hochhaus A., Mahon F.X. The concept of treatment-free remission in chronic myeloid leukemia // Leukemia.
2016. Vol. 30, N 8. P. 1638-1647.


СОЗДАНИЕ МОДЕЛИ СОКУЛЬТИВИРОВАНИЯ СЕРТОЛИ-ПОДОБНЫХ КЛЕТОК МЫШИ СО СПЕРМАТОГОНИАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ
Е.А.Малолина, А.Ю.Кулибин – 133
Институт биологии развития им. Н.К.Кольцова РАН, Москва, РФ
          Сертоли-подобные клетки — популяция клеток в семенниках взрослых мышей, способная к росту в культуре и экспрессирующая многие гены, характерные для клеток Сертоли, поддерживающих развитие половых клеток в гонаде. Разработана методика сокультивирования Сертоли-подобных клеток со сперматогониальными клетками, позволяющая поддерживать рост и жизнеспособность половых клеток и индуцировать их дифференцировку. Эта методика может стать основой для получения полной дифференцировки половых клеток в культуре с использованием Сертоли-подобных клеток в качестве поддерживающих соматических клеток.
Ключевые слова: клетки Сертоли, сперматогониальные клетки, сперматогенез in vitro
Адрес для корреспонденции: kulibin.a.bkrj@gmail.com. Кулибин А.Ю.
Литература
1.         Кулибин А.Ю., Малолина Е.А. Комплекс низкомолекулярных ингибиторов YAC увеличивает уровень экспрессии Dmrt1 в клетках Сертоли транзиторной зоны семенника мыши в культуре // Гены и клетки. 2018. Т. 8, № 3. С. 75-81.
2.         Малолина Е.А., Кулибин А.Ю. Изучение области сети семенника и прилегающих к ней семенных канальцев в постэмбриональном развитии мыши // Онтогенез. 2017. Т. 48, № 6. С. 450-458.
3.         Falciatori I., Lillard-Wetherell K., Wu Z., Hamra F.K., Garbers D.L. Deriving mouse spermatogonial stem cell lines // Methods Mol. Biol. 2008. Vol. 450. P. 181-192.
4.         Kubota H., Avarbock M.R., Brinster R.L. Growth factors essential for self-renewal and expansion of mouse spermatogonial stem cells // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2004. Vol. 101, N 47. P. 16 489-16 494.
5.         Kulibin A.Y., Malolina E.A. Only a small population of adult Sertoli cells actively proliferates in culture // Reproduction. 2016. Vol. 152, N 4. P. 271-281.
6.         Matson C.K., Murphy M.W., Sarver A.L., Griswold M.D., Bardwell V.J., Zarkower D. DMRT1 prevents female reprogramming in the postnatal mammalian testis // Nature. 2011. Vol. 476. P. 101-104.
7.         Medrano J.V., Vilanova-Pérez T., Fornés-Ferrer V., Navarro-Gomezlechon A., Martínez-Triguero M.L., García S., Gómez-Chacón J., Povo I., Pellicer A., Andrés M.M., Novella-Maestre E. Influence of temperature, serum, and gonadotropin supplementation in short- and long-term organotypic culture of human immature testicular tissue // Fertil. Steril. 2018. Vol. 110, N 6. P. 1045-1057.
8.         Meng X., Lindahl M., Hyvönen M.E., Parvinen M., de Rooij D.G., Hess M.W., Raatikainen-Ahokas A., Sainio K., Rauvala H., Lakso M., Pichel J.G., Westphal H., Saarma M., Sariola H. Regulation of cell fate decision of undifferentiated spermatogonia by GDNF // Science. 2000. Vol. 287. P. 1489-1493.
9.         Muratori M., Baldi E. Effects of FSH on sperm DNA fragmentation: review of clinical studies and possible mechanisms of action // Front.
Endocrinol. (Lausanne). 2018. Vol. 9. ID 734. doi: 10.3389/fendo.2018.00734
10.       Raymond C.S., Murphy M.W., O’Sullivan M.G., Bardwell V.J., Zarkower D. Dmrt1, a gene related to worm and fly sexual regulators, is required for mammalian testis differentiation // Genes Dev. 2000. Vol. 14, N 20. P. 2587-2595.
11.       Saitou M., Miyauchi H. Gametogenesis from pluripotent stem cells // Cell Stem Cell. 2016. Vol. 18, N 6. P. 721-735.
12.       Sariola H., Immonen T. GDNF maintains mouse spermatogonial stem cells in vivo and in vitro // Methods Mol. Biol. 2008. Vol. 450. P. 127-135.
13.       Sato T., Katagiri K., Kubota Y., Ogawa T. In vitro sperm production from mouse spermatogonial stem cell lines using an organ culture method // Nat. Protoc. 2013. Vol. 8, N 11. P. 2098-2104.
14.       Sofikitis N., Pappas E., Kawatani A., Baltogiannis D., Loutradis D., Kanakas N., Giannakis D., Dimitriadis F., Tsoukanelis K., Georgiou I., Makrydimas G., Mio Y., Tarlatzis V., Melekos M., Miyagawa I. Efforts to create an artificial testis: culture systems of male germ cells under biochemical conditions resembling the seminiferous tubular biochemical environment // Hum. Reprod. Update. 2005. Vol. 11, N 3. P. 229-259.
15.       Zarkower D. DMRT genes in vertebrate gametogenesis // Curr. Top Dev. Biol. 2013. Vol. 102. P. 327-356.
16.       Zhang J., Hatakeyama J., Eto K., Abe S. Reconstruction of a seminiferous tubule-like structure in a 3 dimensional culture system of re-aggregated mouse neonatal testicular cells within a collagen matrix // Gen. Comp. Endocrinol. 2014. Vol. 205. P. 121-132.
17.       Zhou Q., Wang M., Yuan Y., Wang X., Fu R., Wan H., Xie M., Liu M., Guo X., Zheng Y., Feng G., Shi Q., Zhao X.Y., Sha J., Zhou Q. Complete meiosis from embryonic stem cell-derived germ cells in vitro // Cell Stem Cell. 2016. Vol. 18, N 3. P. 330‑340.


ПОВЕДЕНИЕ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК В ПОРИСТЫХ ГИДРОГЕЛЯХ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ВВЕДЕНИЯ И ДЕЙСТВИИ ДОКСОРУБИЦИНА
М.Х.Зухайб, Д.Т.Луонг, З.Ю.Сираева, А.А.Ергешов, Т.И.Салихова, С.В.Кузнецова, Р.Г.Киямова, Т.И.Абдуллин – 139
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Республика Татарстан, РФ
На примере гидрогелей желатина исследовали влияние пористости на диффузионные характеристики матриксов и инвазионную способность опухолевых клеток линий MCF-7 и PC-3. По данным MTS-теста эффективность заселения макропористого криогеля клетками повышалась в ряду: миграция из монослоя<поверхностная адгезия<<инъекция. Опухолевые клетки в составе криогеля различались по миграционной и агрегационной активности; инъецированные клетки имели более равномерное и плотное заселение. В культуре на ос­нове криогеля по сравнению с монослойной культурой доксорубицин проявил в 3 раза меньшую цитотоксичность, что объясняется поддерживающим эффектом матрикса на рост и кластеризацию клеток. Результаты представляют интерес для создания моделей и графтов опухолей с контролируемыми свойствами.
Ключевые слова: трехмерные модели опухолей, пористые гидрогели, опухолевые клетки, заселение и анализ матриксов, устойчивость к доксорубицину
Адрес для корреспонденции: tabdulli@gmail.com. Абдуллин Т.И.
Литература
1.         Ергешов А.А., Сираева З.Ю., Казакова Р.Р., Муллин Р.И., Давлиев Д.М., Закирова А.А., Салихова Т.И., Кузнецова Е.В., Луонг Д.Т., Савина И.Н., Абдуллин Т.И. Влияние криогеля желатина на пролиферацию и синтетическую активность фибробластов в модели эксцизионной раны кожи // Гены и клетки. 2015. Т. 10, № 4. С. 29-33.
2.         Asghar W., El Assal R., Shafiee H., Pitteri S., Paulmurugan R., Demirci U. Engineering cancer microenvironments for in vitro 3-D tumor models // Mater.Today (Kidlington). 2015. Vol. 18, N 10. P. 539-553.
3.         Campbell J.J., Husmann A., Hume R.D., Watson C.J., Cameron R.E. Development of three-dimensional collagen scaffolds with controlled architecture for cell migration studies using breast cancer cell lines // Biomaterials. 2017. Vol. 114. P. 34-43.
4.         Cavo M., Fato M., Peñuela L., Beltrame F., Raiteri R., Scaglione S. Microenvironment complexity and matrix stiffness regulate breast cancer cell activity in a 3D in vitro model // Sci.
Rep. 2016. Vol. 6. ID 35367. doi: 10.1038/srep35367
5.         Chen L., Xiao Z., Meng Y., Zhao Y., Han J., Su G., Chen B., Dai J. The enhancement of cancer stem cell properties of MCF-7 cells in 3D collagen scaffolds for modeling of cancer and anti-cancer drugs // Biomaterials. 2012. Vol. 33, N 5. P. 1437‑1444.
6.         Cruz-Acuña R., García A.J. Synthetic hydrogels mimicking basement membrane matrices to promote cell-matrix interactions // Matrix Biol. 2017. Vol. 57-58, P. 324-333.
7.         David L., Dulong V., Le Cerf D., Cazin L., Lamacz M., Vannier J.P. Hyaluronan hydrogel: an appropriate three-dimensional model for evaluation of anticancer drug sensitivity // Acta Biomater. 2008. Vol. 4, N 2. P. 256-263.
8.         Del Bufalo F., Manzo T., Hoyos V., Yagyu S., Caruana I., Jacot J., Benavides O., Rosen D., Brenner M.K. 3D modeling of human cancer: A PEG-fibrin hydrogel system to study the role of tumor microenvironment and recapitulate the in vivo effect of oncolytic adenovirus // Biomaterials. 2016. Vol. 84. P. 76-85.
9.         Dunne L.W., Huang Z., Meng W., Fan X., Zhang N., Zhang Q., An Z. Human decellularized adipose tissue scaffold as a model for breast cancer cell growth and drug treatments // Biomaterials. 2014. Vol. 35, N 18. P. 4940-4949.
10.       Fisher S.A., Anandakumaran P.N., Owen S.C., Shoichet M.S. Tuning the microenvironment: click-crosslinked hyaluronic acid-based hydrogels provide a platform for studying breast cancer cell invasion // Adv. Funct. Mater. 2015. Vol. 25, N 46. P. 7163-7172.
11.       Gun’ko V.M., Savina I.N., Mikhalovsky S.V. Cryogels: morphological, structural and adsorption characterisation // Adv.
Colloid Interface Sci. 2013. Vol. 187-188. P. 1-46.
12.       Hinderer S., Layland S.L., Schenke-Layland K. ECM and ECM-like materials — biomaterials for applications in regenerative medicine and cancer therapy // Adv. Drug Deliv. Rev. 2016. Vol. 97. P. 260-269.
13.       Imamura Y., Mukohara T., Shimono Y., Funakoshi Y., Chayahara N., Toyoda M., Kiyota N., Takao S., Kono S., Nakatsura T., Minami H. Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer // Oncol. Rep. 2015. Vol. 33, N 4. P. 1837-1843.
14.       Kwon S., Lee S.S., Sivashanmugam A., Kwon J., Kim S.H.L., Noh M.Y., Kwon S.K., Jayakumar R., Hwang N.S. Bioglass-incorporated methacrylated gelatin cryogel for regeneration of bone defects // Polymers (Basel). 2018. Vol. 10, N 8. pii: E914. doi: 10.3390/polym10080914
15.       Leddy H.A., Awad H.A., Guilak F. Molecular diffusion in tissue-engineered cartilage constructs: effects of scaffold material, time, and culture conditions // J. Biomed. Mater. Res. B Appl. Biomater. 2004. Vol. 70, N 2. P. 397-406.
16.       Luo L.J., Lai J.Y., Chou S.F., Hsueh Y.J., Ma D.H. Development of gelatin/ascorbic acid cryogels for potential use in corneal stromal tissue engineering // Acta Biomater. 2018. Vol. 65. P. 123-136.
17.       Petrenko Y.A., Ivanov R.V., Lozinsky V.I., Petrenko A.Y. Comparison of the methods for seeding human bone marrow mesenchymal stem cells to macroporous alginate cryogel carriers // Bull. Exp. Biol. Med. 2011. Vol. 150, N 4. P. 543‑546.
18.       Petrenko Y.A., Petrenko A.Y., Damshkaln L.G., Volkova N.A., Lozinsky V.I. Growth and adipogenic differentiation of mesenchymal stromal bone marrow cells during culturing in 3D macroporous agarose cryogel sponges // Bull. Exp. Biol. Med. 2008. Vol. 146, N 1. P. 129-132.
19.       Roh J.D., Nelson G.N., Udelsman B.V., Brennan M.P., Lockhart B., Fong P.M., Lopez-Soler R.I., Saltzman W.M., Breuer C.K. Centrifugal seeding increases seeding efficiency and cellular distribution of bone marrow stromal cells in porous biodegradable scaffolds // Tissue Eng. 2007. Vol. 13, N 11. P. 2743-2749.
20.       Savina I.N., Gun'Ko V.M., Phillips G.J., Mikhalovsky S.V., Turov V.V., Dainiak M., Galaev I.Y. Porous structure and water state in cross-linked polymer and protein cryo-hydrogels // Soft Matter. 2011. Vol. 7, N 9. P. 4276-4283.
21.       Sieh S., Lubik A.A., Clements J.A., Nelson C.C., Hutmacher D.W. Interactions between human osteoblasts and prostate cancer cells in a novel 3D in vitro model // Organogenesis. 2010. Vol. 6, N 3. P. 181-188.
22.       Szot C.S., Buchanan C.F., Freeman J.W., Rylander M.N. 3D in vitro bioengineered tumors based on collagen I hydrogels // Biomaterials. 2011. Vol. 32, N 31. P. 7905-7912.
23.       Tam R.Y., Fisher S.A., Baker A.E.G., Shoichet M.S. Transparent porous polysaccharide cryogels provide biochemically defined, biomimetic matrices for tunable 3D cell culture // Chem. Mater. 2016. Vol. 28, N 11. P. 3762-3770.
24.       Taubenberger A.V., Bray L.J., Haller B., Shaposhnykov A., Binner M., Freudenberg U., Guck J., Werner C. 3D extracellular matrix interactions modulate tumour cell growth, invasion and angiogenesis in engineered tumour microenvironments // Acta Biomater. 2016. Vol. 36. P. 73-85.
25.       Wu Y., Puperi D.S., Grande-Allen K.J., West J.L. Ascorbic acid promotes extracellular matrix deposition while preserving valve interstitial cell quiescence within 3D hydrogel scaffolds // J. Tissue Eng.
Regen. Med. 2017. Vol. 11, N 7.  P. 1963‑1973.
26.       Yang Z., Zhao X. A 3D model of ovarian cancer cell lines on peptide nanofiber scaffold to explore the cell-scaffold interaction and chemotherapeutic resistance of anticancer drugs // Int. J. Nanomedicine. 2011. Vol. 6. P. 303-310.
27.       You F., Wu X., Zhu N., Lei M., Eames B.F., Chen X. 3D printing of porous cell-laden hydrogel constructs for potential applications in cartilage tissue engineering // ACS Biomater.
Sci. Eng. 2016. Vol. 2, N 7. P. 1200-1210.
28.       Zhang X., Fournier M.V., Ware J.L., Bissell M.J., Yacoub A., Zehner Z.E. Inhibition of vimentin or beta1 integrin reverts morphology of prostate tumor cells grown in laminin-rich extracellular matrix gels and reduces tumor growth in vivo // Mol. Cancer Ther. 2009. Vol. 8, N 3. P. 499-508.
29.       Zheng L., Hu X., Huang Y., Xu G., Yang J., Li L. In vivo bioengineered ovarian tumors based on collagen, matrigel, alginate and agarose hydrogels: a comparative study // Biomed. Mater. 2015. Vol. 10, N 1. ID 015016. doi: 10.1088/1748-6041/10/1/015016
30.       Zhu W., Holmes B., Glazer R.I., Zhang L.G. 3D printed nanocomposite matrix for the study of breast cancer bone metastasis // Nanomedicine. 2016. Vol. 12, N 1. P. 69-79.