info@iramn.ru
com@iramn.ru
bbm.ktbm@gmail.com



КЛЕТОЧНЫЕ  ТЕХНОЛОГИИ  В  БИОЛОГИИ  И  МЕДИЦИНЕ

2018 г., № 1

 СОДЕРЖАНИЕ

Показатели функционирования физиологических систем лабораторных приматов после введения доксорубицина и трансплантации мезенхимных стволовых клеток
В.З.Агрба, Д.Д.Карал-оглы, С.Ш.Кальсина, А.Г.Коноплянников, Т.Е.Гвоздик, И.А.Гварамия, И.Н.Клоц, Е.И.Мухаметзянова, Ю.П.Чугуев, О.А.Шамсутдинова, Д.Э.Аравиашвили, В.А.Порханов, Б.А.Лапин – 3
ФГБНУ НИИ медицинской приматологии, Сочи, РФ
          Исследованы физиологические параметры обезьян макак-резусов после введения антибиотика антрациклинового ряда доксорубицина. Внутривенное введение препарата вызывало интоксикацию, выражающуюся в резком снижении массы тела, облысении, рвоте, эксикозе. Интоксикация у обезьян, связанная с повреждающим действием доксорубицина на органы и ткани, характеризуется также существенными изменениями со стороны крови: лейкопенией, тромбоцитопенией, нейтропенией, моноцитопенией, лимфоцитозом, резким снижением содержания CD20+ В-лимфоцитов. В крови значительно уменьшается содержание общего белка и альбуминов. Резкое повышение С-реактивного белка сопровождается также повышением активности провоспалительного цитокина ИЛ-6. Трансплантация мезенхимных стволовых клеток в части случаев способна значительно уменьшать повреждения органов, вызванных введением антибиотика, и сохранять нормальный клинический статус обезьян после двух введений препарата. Поздняя трансплантация стволовых клеток не оказывает защитного эффекта и не предохраняет животных от повреждающего действия доксорубицина. Защитный эффект мезенхимных стволовых клеток по результатам проведенных нами исследований зависит от дозы вводимого препарата, суммарного количества клеток и времени их трансплантации. Следует отметить, что мезенхимные стволовые клетки человека и обезьяны обладают сходными регенеративными эффектами, по крайней мере в модели доксорубициновой токсичности.
Ключевые слова: приматы, мезенхимные стволовые клетки, доксорубицин
Адрес для корреспонденции: agrba-vz@mail.ru. Агрба В.З.
Литература
1.         Агрба В.З., Лапин Б.А., Порханов В.А., Коноплянников А.Г., Кальсина С.Ш., Кара-оглы Д.Д., Агумава А.А., Леонтюк А.В., Игнатова И.Е. Культуры мезенхимальных стволовых клеток лабораторных приматов и перспективы их использования в экспериментальной медицине // Стволовые клетки и регенеративная медицина / Под ред. В.А.Ткачука. М., 2012. С. 23-29.
2.         Агрба В.З., Порханов В.А., Коноплянников А.Г., Кальсина С.Ш., Кара-оглы Д.Д., Игнатова И.Е., Гвоздик Т.Е., Агумава А.А., Леонтюк А.В., Лапин Б.А. Возможные аспекты использования культур стволовых клеток лабораторных приматов в экспериментальной медицине // Клет. технол. в биол. и мед. 2012. № 3. С. 139-142.
3.         Демьянов А.В., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике // Цитокины и воспаление. 2003. Т. 2, № 3. С. 20-35.
4.         Долгов В., Морозова В., Марцишевская Р., Мадрала А., Якубовский З., Кабата И., Калиновский Л., Щепанская-Конкель М., Ангельский С. Клинико-диагностическое значение лабораторных показателей. М., 1995.
5.         Иванов А.А. Перспективы применения стволовых клеток в медицине // Биология стволовых клеток и клеточных технологий. Том I / Под ред. М.А.Пальцева. М., 2009. С. 31-43.
6.         Лапин Б.А., Джикидзе Э.К., Фридман Э.П. Руководство по медицинской приматологии. М., 1987.
7.         Лапин Б.А., Джикидзе Э.К., Шевцова З.В., Стасилевич З.К. Моделирование инфекционных заболеваний человека на лабораторных приматах. Сочи, 2011, С. 225.
8.         Маклакова И.Ю., Гребнев Д.Ю., Ястребов А.П. Влияние экстремальных факторов на хоуминг мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток // Патол. физиол. и экспер. тер. 2015. № 4. С. 82-86.
9.         Романов Ю.А., Смирнов В.Н. Мезенхимальные стволовые клетки: биология и перспективы клинического применения // Биология стволовых клеток и клеточные технологии. Том I / Под ред. М.А.Пальцева М., 2009. С. 193-205.
10.       Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление.
2004. Т. 3, № 2. С. 16-22.
11.       Cruet-Hennequart S., Prendergast Á.M., Shaw G., Barry F.P., Carty M.P. Doxorubicin induces the DNA damage response in cultured human mesenchymal stem cells // Int. J. Hematol. 2012. Vol. 96, N 5. P. 649-656.
12.       Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F., Krause D., Deans R., Keating A., Prockop Dj, Horwitz E. Minimal criteria for defining multipotent masenchymal stromal cells. The International Society for cellular Therapy position statement // Cytotherapy. 2006. Vol. 8, N 4.
P. 315-317.

Влияние внутримышечного введения мезенхимных стволовых клеток и эритропоэтина на ангиогенез при критической ишемии нижних конечностей
А.П.Лыков, Н.А.Бондаренко, О.В.Повещенко, А.В.Кабаков, М.А.Суровцева, И.И.Ким, О.В.Казаков, А.Ф.Повещенко10
НИИКЭЛ — филиал Института цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, РФ
         
Исследовано влияние внутримышечного введения костномозговых мезенхимных стволовых клеток на параметры микроциркуляции в ишемизированной конечности крыс Вистар. Показано, что введение мезенхимных стволовых клеток без или в сочетании с эритропоэтином стимулирует ангиогенез в зоне ишемии. Существенная роль в процессе стимуляции ангиогенеза отводится цитокинам и ростовым факторам.
Ключевые слова: критическая ишемия нижних конечностей, мезенхимные стволовые клетки, эритропоэтин, цитокины, микроциркуляция
Адрес для корреспонденции: aplykov2@mail.ru. Лыков А.П.
Литература
1.         Лебедев С.В., Карасев А.В., Кунгурцев В.В., Лохонина А.В., Клейменова Е.Б. Клеточная терапия критической ишемии нижних конечностей (проблемы и перспективы) // Вестн. РАМН. 2013. № 3. С. 33-44.
2.         Лыков А.П., Кабаков А.В., Повещенко О.В., Бондаренко Н.А., Повещенко А.Ф., Казаков О.В., Никонорова Ю.В., Коненков В.И. Эффективность терапии клеточным продуктом острого инфаркта миокарда у крыс линии Wistar по данным биоэлектрической активности миокарда // Междунар. журн. приклад. и фундамент. исследований. 2014. № 8-4. С. 78-84.
3.         Повещенко О.В., Лыков А.П., Бондаренко Н.А., Ким И.И., Янкайте Е.В., Казаков О.В., Суровцева М.А., Бгатова Н.П., Карпенко А.А., Покушалов Е.А., Коненков В.И. Эффективность внутримышечного введения стволовых/прогениторных клеток в эксперименте на модели ишемии нижней конечности // Ангиол. и сосуд. хир. 2016. Т
. 22, № 4. С. 51-54.
4          Brenes R.A., Jadlowiec C.C., Bear M., Hashim P., Protack C.D., Li X., Lv W., Collins M.J., Dardik A. Toward a mouse model of hind limb ischemia to test therapeutic angiogenesis // J. Vasc. Surg. 2012. Vol. 56, N 6. P. 1669-1679.
5.         Horwitz E.M., Prather W.R. Cytokines as the major mechanism of mesenchymal stem cell clinical activity: expanding the spectrum of cell therapy // Isr. Med. Assoc. J. 2009. Vol. 11, N 4. P. 209-211.
6.         Kinnaird T., Stabile E., Burnett M.S., Shou M., Lee C.W., Barr S., Fuchs S., Epstein S.E. Local delivery of marrow-derived stromal cells augments collateral perfusion through paracrine mechanisms // Circulation. 2004. Vol. 109, N 12. P. 1543-1549.
7.         Liew A., O’Brien T. Therapeutic potential for mesenchymal stem cell transplantation in critical limb ischemia // Stem Cell Res. Ther. 2012. Vol. 3, N 4. P. 28. doi: 10.1186/scrt119.
8.         Lykov A.P., Bondarenko N.A., Poveshchenko O.V., Miller T.V., Poveshchenko A.F., Surovtseva M.A., Bgatova N.P., Konenkov V.I. Biomedical cellular product for wound healing // Integr. Obesty Diabetes. 2015. Vol. 2, N 1. P. 176-179. doi: 10.15761/IOD.1000139.
9.         Mikami S., Nakashima A., Nakagawa K., Maruhashi T., Iwamoto Y., Kajikawa M., Matsumoto T., Kihara Y., Chayama K., Noma K., Ochi M., Nishimura M., Tsuji K., Kato Y., Goto C., Higashi Y. Autologous bone-marrow mesenchymal stem cell implantation and endothelial function in a rabbit ischemic limb model // PLoS One. 2013.
Vol. 8, N 7. P. e67739. doi: 10.1371/journal.pone.0067739.

Эндотелиальные клетки модулируют дифференцировочный потенциал и подвижность мезенхимных стромальных клеток
О.В.Жидкова, Е.Р.Андреева, Л.Б.Буравкова – 15
ГНЦ Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, РФ
         
Изучено влияние эндотелиальных клеток на миграционный и дифференцировочный потенциал мультипотентных мезенхимных стромальных клеток in vitro. В присутствии интактных и активированных ФНО-a эндотелиальных клеток в стромальных клетках снижалась экспрессия генов “стволовости” OCT4, SOX2, регулятора хондрогенной дифференцировки SOX9 и повышалась транскрипция гена RUNX2, ответственного за остеогенную дифференцировку, что указывает на увеличение коммитированности. Кондиционированная среда эндотелиальных клеток стимулировала миграционную активность стромальных клеток, причем скорость миграции достоверно возрастала в кондиционированной среде от активированных клеток по сравнению с неактивированными. Сделан вывод о том, что взаимодействие с эндотелиальными клетками модулирует функциональную активность стромальных клеток, при этом активированные эндотелиальные клетки оказывают более выраженный эффект на дифференцировочный потенциал и миграционную активность стромальных клеток как при прямом контакте, так и за счет паракринной регуляции.
Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, эндотелиальные клетки, сокультивирование, дифференцировка, миграция
Адрес для корреспонденции: olgavzhidkova@gmail.com. Жидкова О.В.
Литература
1.         Антонов А.С., Крушинский А.В., Николаева М.А. Фигель Х.Г., Репин В.С. Первичная культура эндотелиальных клеток из пупочной вены человека: идентификация и характеристика растущей и конфлуентной культуры // Цитология. 1981. Т. 23, № 10. С. 384-386.
2.         Буравкова Л.Б., Гринаковская О.С., Андреева Е.Р., Жамбалова А.П., Козионова М.П. Характеристика мезенхимных стромальных клеток из липоаспирата человека, культивируемых при пониженном содержании кислорода // Цитология. 2009. Т. 51, № 1. С. 5-11. 
3.         Соколова И.Б., Зинькова Н.Н., Шведова Е.В., Кругляков П.В., Полынцев Д.Г. Распределение мезенхимальных стволовых клеток в области тканевого воспаления при разных способах трансплантации клеточного материала // Клет. технол. в биол. и мед. 2007.
№ 1. С. 34-37.
4.         Bidarra S.J., Barrias C.C., Barbosa M.A., Soares R., Amédée J., Granja P.L. Phenotypic and proliferative modulation of human mesenchymal stem cells via crosstalk with endothelial cells // Stem Cell Res. 2011. Vol. 7, N 3. P. 186-197.
5.         Böhrnsen F., Schliephake H. Supportive angiogenic and osteogenic differentiation of mesenchymal stromal cells and endothelial cells in monolayer and co-cultures // Int. J. Oral Sci. 2016. Vol. 8, N 4. P. 223-230.
6.         Cheng A., Genever P.G. SOX9 determines RUNX2 transactivity by directing intracellular degradation // J. Bone Miner. Res. 2010. Vol. 25, N 12. P. 2680-2689.
7.         Danese S., Dejana E., Fiocchi C. Immune regulation by microvascular endothelial cells: directing innate and adaptive immunity, coagulation, and inflammation // J. Immunol. 2007. Vol. 178, N 10. P. 6017-6022.
8.         Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F., Krause D., Deans R., Keating A., Prockop Dj., Horwitz E. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells // The International Society for Cellular Therapy position statement // Cytotherapy. 2006. Vol. 8, N 4. P. 315-317.
9.         Glemžaitė M., Navakauskienė R. Osteogenic differentiation of human amniotic fluid mesenchymal stem cells is determined by epigenetic changes // Stem Cells Int. 2016. Vol. 2016. ID 6465307.
10.       Leibacher J., Henschler R. Biodistribution, migration and homing of systemically applied mesenchymal stem/stromal cells // Stem Cell Res Ther. 2016. Vol. 7. P. 7. doi: 10.1186/s13287-015-0271-2.
11.       Lin C.H., Lilly B. Endothelial cells direct mesenchymal stem cells toward a smooth muscle cell fate // Stem Cells Dev. 2014. Vol. 23, N 21. P. 2581-2590.
12.       Marino F., Schembri L., Rasini E., Pinoli M., Scanzano A., Luini A., Congiu T., Cosentino M. Characterization of human leukocyte-HUVEC adhesion: Effect of cell preparation methods // J. Immunol. Methods. 2017. Vol. 443. P. 55-63.
13.       Nitzsche F., Müller C., Lukomska B., Jolkkonen J., Deten A., Boltze J. Concise review: MSC adhesion cascade — insights into homing and transendothelial migration // Stem
Сells. 2017. Vol. 35, N 6. P. 1446-1460.
14.       Regulatory Networks in Stem Cells / Eds. V.K.Rajasekhar, M.C.Vemuri, N.Y. 2009.
15.       Ringe J., Strassburg S., Neumann K., Endres M., Notter M., Burmester G.R., Kaps C., Sittinger M. Towards in situ tissue repair: human mesenchymal stem cells express chemokine receptors CXCR1, CXCR2 and CCR2, and migrate upon stimulation with CXCL8 but not CCL2 // J. Cell. Biochem. 2007. Vol. 101, N 1. P. 135-146.
16.       Rustad K.C., Gurtner G.C. Mesenchymal stem cells home to sites of injury and inflammation // Adv Wound Care. (New Rochelle). 2012. Vol. 1, N. 4, P. 147-152.
17.       Saleh F.A., Whyte M., Genever P.G. Effects of endothelial cells on human mesenchymal stem cell activity in a three-dimensio­nal in vitro model // Eur. Cell Mater. 2011. Vol. 22. P. 242‑257.
18.       Sohni A., Verfaillie C.M. Mesenchymal stem cells migration homing and tracking // Stem Cells Int. 2013. Vol. 2013. ID 130763. doi: 10.1155/2013/130763.
19.       Stich S., Loch A., Leinhase I., Neumann K., Kaps C., Sittinger M., Ringe J. Human periosteum-derived progenitor cells express distinct chemokine receptors and migrate upon stimulation with CCL2, CCL25, CXCL8, CXCL12, and CXCL13 // Eur. J. Cell Biol. 2008. Vol. 87, N 6. P. 365-376.
20.       Teo G.S., Ankrum J.A., Martinelli R., Boetto S.E., Simms K., Sciuto T.E., Dvorak A.M., Karp J.M., Carman C.V. Mesenchymal stem cells transmigrate between and directly through tumor necrosis factor-a-activated endothelial cells via both leukocyte-like and novel mechanisms // Stem Cells. 2012. Vol. 30, N 11. P. 2472-2486.
21.       Tsai C.C., Su P.F., Huang Y.F., Yew T.L., Hung S.C. Oct4 and Nanog directly regulate Dnmt1 to maintain self-renewal and undifferentiated state in mesenchymal stem cells // Mol. Cell. 2012. Vol. 47, N 2. P. 169-182.
22.       Via A.G., Frizziero A., Oliva F. Biological properties of mesenchymal Stem Cells from different sources // Muscles Ligaments Tendons J. Vol. 2, N 3. P. 154-162.
23.       Xue Y., Xing Z., Bolstad A.I., Van Dyke T.E., Mustafa K. Co-culture of human bone marrow stromal cells with endothelial cells alters gene expression profiles // Int. J. Artif. Organs
. 2013. Vol. 36, N 9, P. 650-662.

Получение обкладочных клеток обонятельной выстилки крыс и их использование в терапии посттравматических кист спинного мозга
О.В.Степанова*, А.Д.Воронова*,**, А.В.Чадин*, М.П.Валихов*, М.А.Абакумов**, И.В.Решетов***, В.П.Чехонин*,** – 20
*Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ НМИЦПН им. В.П.Сербского Минздрава России, Москва; **Кафедра медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультета РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, Москва; ***Университетская клиническая больница № 1 Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России, Москва
          
Оценивали эффективность применения обкладочных клеток обонятельной выстилки крыс в терапии экспериментальных кист спинного мозга. Показано улучшение двигательной активности задних конечностей крыс после трансплантации обкладочных клеток в посттравматические кисты спинного мозга. Также установлено необходимое количество клеток для трансплантации, при этом выявлен нейропротективный эффект данного количества клеток. Для дальнейших клинических исследований необходимо создание аутологичного, тканеспецифичного клеточного препарата обкладочных клеток обонятельной выстилки. Его комбинированное применение с хирургическими и медикаментозными методами позволит в будущем существенно улучшить качество жизни пациентов с посттравматическими кистами спинного мозга.
Ключевые слова: обкладочные клетки обонятельной выстилки, обонятельная выстилка, клеточная терапия, кисты спинного мозга
Адрес для корреспонденции: sms-34@yandex.ru. Степанова О.В.
Литература
1.         Воронова А.Д., Степанова О.В., Чадин А.В., Бирюкова Г.К., Решетов И.В., Чехонин В.П. Получение клеток обонятельной выстилки человека, предполагаемых для использования в клеточной терапии посттравматических кист спинного мозга // Мед. акад. журн. 2016. Т. 16, № 4. С. 208-209.
2.         Дедов И.И., Тюльпаков А.Н., Чехонин В.П., Баклаушев В.П., Арчаков А.И., Мошковский С.А. Персонализированная медицина: современное состояние и перспективы // Вестник РАМН. 2012.
№ 12. С. 4-12.
3.         Basso D.M., Beattie M.S., Bresnahan J.C. A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats // J. Neurotrauma. 1995. Vol. 12, N 1. P. 1-21.
4.         Biyani A., el Masry W.S. Post-traumatic syringomyelia: a review of the literature // Paraplegia. 1994. Vol. 32, N 11. P. 723-731.
5.         Borgmann-Winter K., Willard S.L., Sinclair D., Mirza N., Turetsky B., Berretta S., Hahn C.G. Translational potential of olfactory mucosa for the study of neuropsychiatric illness // Transl. Psychiatry. 2015. Vol. 5. P. e527. doi: 10.1038/tp.2014.141.
6.         Féron F., Perry C., Cochrane J., Licina P., Nowitzke A., Urquhart S., Geraghty T., Mackay-Sim A. Autologous olfactory ensheathing cell transplantation in human spinal cord injury // Brain. 2005. Vol. 128, Pt 12. P. 2951-2960.
7.         Lim P.A., Tow A.M. Recovery and regeneration after spinal cord injury: a review and summary of recent literature // Ann. Acad. Med. Singapore. 2007. Vol. 36, N 1. P. 49-57.
8.         Mackay-Sim A., St John J.A. Olfactory ensheathing cells from the nose: clinical application in human spinal cord injuries // Exp. Neurol. 2011. Vol. 229, N 1. P. 174-180.
9.         Nori S., Nakamura M., Okano H. Plasticity and regeneration in the injured spinal cord after cell transplantation therapy // Prog. Brain Res. 2017. Vol. 231. P. 33-56.
10.       Richter M.W., Fletcher P.A., Liu J., Tetzlaff W., Roskams A.J. Lamina propria and olfactory bulb ensheathing cells exhibit differential integration and migra- tion and promote differential axon sprouting in the lesioned spinal cord // J. Neurosci. 2005. Vol. 25, N 46. P. 10 700-10 711.
11.       Tabakow P., Jarmundowicz W., Czapiga B., Fortuna W., Miedzybrodzki R., Czyz M., Huber J., Szarek D., Okurowski S., Szewczyk P., Gorski A., Raisman G. Transplantation of autologous olfactory ensheathing cells in complete human spinal cord injury // Cell Transplant. 2013. Vol. 22, N 9. P. 1591-1612.
12.       Yamamoto M., Raisman G., Li D., Li Y. Transplanted olfactory mucosal cells restore paw reaching function without regeneration of severed corticospinal tract fibres across the lesion // Brain Res. 2009. Vol. 1303. P. 26-31.
13.       Young W. Spinal cord regeneration // Cell Transplant. 2014. Vol. 23, N 4-5. P. 573-611.
14.       Zadroga A., Jezierska-Woźniak K., Czarzasta J., Barczewska M., Wojtkiewicz J., Maksymowicz W. Therapeutic potential of olfactory ensheathing cells and mesenchymal stem cells in spinal cord injurie // Stem Cells Int. 2017. Vol. 2017. ID 9438310. doi: 10.1155/2017/9438310.
15.       Zhang C., Morozova A.Y., Abakumov M.A., Gubsky I.L., Douglas P., Feng S., Bryukhovetskiy A.S., Chekhonin V.P. Precise delivery into chronic spinal cord injury syringomyelic cysts with magnetic nanoparticles MRI visualization // Med. Sci. Monit. 2015. Vol. 21. P. 3179-3185.

Динамика экспрессии генов цитокинов и количества макрофагов в легких и почках после субтотальной резекции печени у крыс
А.В.Ельчанинов*,****, Т.Х.Фатхудинов*,****, И.В.Арутюнян*, А.В.Макаров*,***, Н.Ю.Усман*, Л.П.Михайлова**, А.В.Лохонина*, В.М.Ботчей****, В.В.Глинкина***, Г.Б.Большакова** – 25
*
ФГБУ НМИЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад.
В.И.Кулакова Минздрава России, Москва; **ФГБНУ Научно-исследовательский институт морфологии человека, Москва, РФ; ***ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, Москва; ****ФГБНУ Российский университет дружбы народов, Москва, РФ
         
На модели восстановления массы печени после субтотальной резекции изучена роль легких и почек в регенерации печени. Установлено, что в легких и почках происходит увеличение синтеза гепатоцитарного фактора роста (HGF), а также повышается экспрессия генов цитокинов il1b, il6, il10, tnfa. При изучении динамики популяции макрофагов обнаружено, что накопление HGF и увеличение экспрессии генов цитокинов в легких сопровождается увеличением количества CD68+-клеток, что указывает на ведущую роль макрофагов в активации синтеза HGF в легких. В почках увеличения доли макрофагов у животных после субтотальной резекции печени не обнаружено.
Ключевые слова: печень, регенерация, субтотальная резекция, почки, легкие
Адрес для корреспонденции: fatkhudinov@gmail.com. Фатхудинов Т.Х.
Литература
1.         Ельчанинов А.В., Фатхудинов Т.Х., Усман Н.Ю., Арутюнян И.В., Макаров А.В., Кананыхина Е.Ю., Глинкина В.В., Большакова Г.Б., Сухих Г.Т. Экспрессия генов цитокинов и факторов роста в легких и почках крыс после субтотальной резекции печени // Бюл. экспер. биол.
2016. Т. 161, № 3. С. 373-377.
2.         Coudriet G.M., He J., Trucco M., Mars W.M., Piganelli J.D. Hepatocyte growth factor modulates interleukin-6 production in bone marrow derived macrophages: implications for inflammatory mediated diseases // PLoS One. 2010. Vol. 5, N 11. P. e15384. doi: 10.1371/journal.pone.0015384.
3.         Elchaninov A., Fatkhudinov T., Usman N., Kananykhina E., Arutyunyan I., Makarov A., Bolshakova G., Goldshtein D., Sukhikh G. Molecular survey of cell source usage during subtotal hepatectomy-induced liver regeneration in rats // PLoS One. 2016. Vol. 11, N 9. P. e0162613. doi: 10.1371/journal.pone.0162613.
4.         Fausto N., Campbell J.S., Riehle K.J. Liver regeneration // Hepatology. 2006. Vol. 43, N 2, Suppl. 1. P. S45-S53.
5.         Kono S., Nagaike M., Matsumoto K., Nakamura T. Marked induction of hepatocyte growth factor mRNA in intact kidney and spleen in response to injury of distant organs // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. Vol. 186, N 2. P. 991-998.
6.         Michalopoulos G.K. Advances in liver regeneration // Expert Rev. Gastroenterol. Hepatol. 2014. Vol. 8, N 8. P. 897-907.
7.         Ninomiya M., Shirabe K., Terashi T., Ijichi H., Yonemura Y., Harada N., Soejima Y., Taketomi A., Shimada M., Maehara Y. Deceleration of regenerative response improves the outcome of rat with massive hepatectomy // Am. J. Transplant. 2010. Vol. 10, N 7. P. 1580-1587.
8.         Pfaffl M.W. A new mathematical model for relative quanti­fication in real-time RT-PCR // Nucleic Acids Res. 2001. Vol. 29, N 9. P. e45.
9.         Sowa J.P., Best J., Benko T., Bockhorn M., Gu Y., Niehues E.M., Bucchi A., Benedetto-Castro E.M., Gerken G., Rauen U., Schlaak J.F. Extent of liver resection modulates the activation of transcription factors and the production of cytokines involved in liver regeneration // World J. Gastroenterol. 2008. Vol. 14, N 46. P.7093-7100.
10.       Vandesompele J., De Preter K., Pattyn F., Poppe B., Van Roy N., De Paepe A., Speleman F. Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes // Genome Biol. 2002 Vol. 3, N 7. P. RESEARCH0034.
11.       Yanagita K., Nagaike M., Ishibashi H., Niho Y., Matsumoto K., Nakamura T. Lung may have an endocrine function producing hepatocyte growth factor in response to injury of distal organs // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. Vol. 182, N 2. P. 802-809.

Армированные гибридные губки на основе коллагена для тканеинженерных конструкций
К.Н.Бардакова*,**, Е.А.Гребеник**, Е.В.Истранова**, Л.П.Истранов**, Ю.В.Герасимов***, А.Г.Грошева***, Т.М.Жарикова**, Н.В.Минаев*, Б.С.Шавкута*,**, Д.С.Дудова*, С.В.Костюк****, Н.Н.Воробьева*, В.Н.Баграташвили*, П.С.Тимашев*,**, Р.К.Чайлахян*,*** – 31
*
Институт фотонных технологий ФНИЦКристаллография и Фотоника РАН, Москва, РФ; **Институт регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первого МГМУ им.
И.М.Сеченова Минздрава России, Москва; ***ФГБУ Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. почетного акад. Н.Ф.Гамалеи Минздрава России, Москва; ****Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Белорусского государственного университета, Минск, Республика Беларусь
          
Создан анизотропный материал на основе коллагеновой губки и реакционноспособного полилактида, структурированного методом лазерной фотополимеризации. Комбинация коллагена с реакционноспособным полилактидом должна повысить устойчивость к биодеградации сформированных матриксов по сравнению с одно­компонентной коллагеновой губкой, а наличие на матриксе участков с различными механическими характеристиками и сродством клеток к субстрату — обеспечить направленный рост клеток при их культивировании. Показано, что армирование коллагеновых губок приводит к 7-кратному увеличению локального значения мо­дуля Юнга для гибридного матрикса и не влияет на его цитотоксичность. Разработанный матрикс обеспечи­вает адгезию и пролиферацию клеток по направлениям армирования и может быть использован при создании тканеинженерных конструкций.
Ключевые слова: коллагеновый матрикс, лазерная фотополимеризация, направленный рост клеток, разветвленный полилактид, мультипотентные стромальные клетки
Адрес для корреспонденции: rubenchail@yandex.ru. Чайлахян Р.К.
Литература
1.         Глыбочко П.В., Аляев Ю.Г., Шехтер А.Б., Винаров А.З., Истранов Л.П., Истранова Е.В., Абоянц Р.К., Люндуп А.В., Крашенинников М.Е., Гуллер А.Е., Бутнару Д.В., Марисов Л.В., Кантимеров Д.Ф., Курков А.В., Сафронова Е.И., Воробьева Е.А., Ирицян М.М. Экспериментальное обоснование создания гибридной матрицы и тканеинженерной конструкции на основе сетки из полилактогликолида и реконструированного коллагена с целью последующей заместительной уретропластики // Урология. 2015. № 6. С. 5-13.
2.         Тимашев П.С., Бардакова К.Н., Демина Т.С., Пудовкина Г.И., Новиков М.М., Марков М.А., Асютин Д.С., Пименова Л.Ф., Свидченко Е.А., Ермаков А.М., Селезнева И.И., Попов В.К., Коновалов Н.А., Акопова Т.А., Соловьева А.Б., Панченко В.Я., Баграташвили В.Н. Новый биосовместимый материал на основе модифицированного твердофазным методом хитозана для лазерной стереолитографии // Соврем. технол. в медицине. 2015. Т. 7, № 3. С. 20-31.
3.         Шехтер А.Б., Гуллер А.Е., Истранов Л.П., Истранова Е.В., Бутнару Д.В., Винаров А.З., Захаркина О.Л., Курков А.В., Кантимеров Д.Ф., Антонов Е.Н., Марисов Л.В., Глыбочко П.В. Морфология коллагеновых матриксов для тканевой инженерии (биосовместимость, биодеградация, тканевая реакция) // Арх. патол.
2015. Т. 77, № 6. С. 29‑38.
4.         Cao X., Wang J., Liu M., Chen Y., Cao Y., Yu X. Chitosan-collagen/organomontmorillonite scaffold for bone tissue engineering // Front. Mater. Sci. 2015. Vol. 9, N 4. P. 405-412.
5.         Chan E.C., Kuo S.M., Kong A.M., Morrison W.A., Dusting G.J., Mitchell G.M., Lim S.Y., Liu G.S. Three dimensional collagen scaffold promotes intrinsic vascularisation for tissue engineering applications // PLoS One. 2016. Vol. 11, N 2. P. e0149799.  doi: 10.1371/journal.pone.0149799.
6.         Dong C., Lv Y. Application of
сollagen scaffold in tissue engineering: recent advances and new perspectives // Polymers. 2016. Vol. 8, N 2. P. 42. doi: 10.3390/polym8020042.
7.         Grover C.N., Cameron R.E., Best S.M. Investigating the morphological, mechanical and degradation properties of scaffolds comprising collagen, gelatin and elastin for use in soft tissue engineering // J. Mech. Behav. Biomed. Mater. 2012. Vol. 10. P. 62-74.
8.         Kane R.J., Roeder R.K. Effects of hydroxyapatite reinforcement on the architecture and mechanical properties of freeze-dried collagen scaffolds // J. Mech. Behav. Biomed. Mater. 2012. Vol. 7. P. 41-49.
9.         Lee H., Ahn S.H., Kim G.H. Three-dimensional collagen/alginate hybrid scaffolds functionalized with a drug delivery system (DDS) for bone tissue regeneration // Chem. Mater. 2011. Vol. 24, N 5. P. 881-891.
10.       Liu X., Huang C., Feng Y., Liang J., Fan Y., Gu Z., Zhang X. Reinforcement of a porous collagen scaffold with surface-activated PLA fibers // J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 2010. Vol. 21, N 6-7. P. 963-977.
11.       Lu H., Oh H.H., Kawazoe N., Yamagishi K., Chen G. PLLA-collagen and PLLA-gelatin hybrid scaffolds with funnel-like porous structure for skin tissue engineering // Sci. Technol. Adv. Mater. 2012. Vol. 13, N 6. ID 064210.
12.       Timashev P., Kuznetsova D., Koroleva A., Prodanets N., Deiwick A., Piskun Y., Bardakova K., Dzhoyashvili N., Kostjuk S., Zagaynova E., Rochev Y., Chichkov B., Bagratashvili V. Novel biodegradable star-shaped polylactide scaffolds for bone regeneration fabricated by two-photon polymerization // Nanomedicine (Lond). 2016. Vol. 11, N 9. P. 1041-1053.
13.       Velasco M.A., Narváez-Tovar C.A., Garzón-Alvarado D.A. Design, materials, and mechanobiology of biodegradable scaffolds for bone tissue engineering // Biomed. Res. Int. 2015. Vol. 2015. ID 729076. doi: 10.1155/2015/729076.
14.       Vilay V., Todo M. Tensile deformation behavior of collagen/PCL hybrid scaffolds for ligament tissue engineering // J. Solid Mech. Mater. Eng. 2013. Vol. 7, N 3. P. 463-472.

Создание клеточных культур ретинобластомы и оценка их лекарственной устойчивости
С.В.Саакян, А.Ю.Цыганков, Н.И.Моисеева*, А.Ф.Карамышева*, М.Г.Жильцова, С.С.Тадевосян38
ФГБУ МНИИ глазных болезней им.
Гельмгольца Минздрава России, Москва; *ФГБУ НМИЦ им. Н.Н.Блохина Минздрава России, Москва
         
Получена первичная клеточная культура ретинобластомы и проведена оценка лекарственной устойчивости к химиопрепаратам. В исследование вошли 19 пациентов в возрасте 6-64 мес (27.9±17.4 мес); 6 (31.6%) пациентов с билатеральным поражением, 13 (68.4%) — с монолатеральным. У 18 (94.7%) пациентов выявлена ретинобластома группы E. Во всех случаях выполнена энуклеация, при этом в 94.7% случаев определена низкодифференцированная ретинобластома. Взяты образцы опухолевой ткани для получения клеточной культуры с последующим исследованием лекарственной устойчивости и метаболической активности клеток (МТТ-тест). В 4 случаях удалось получить переживающие адгезивные первичные культуры ретинобластомы. Проведена цитологическая верификация полученных культур. При билатеральном поражении первичные культуры получали в 4 из 6 случаев, тогда как при монолатеральном поражении клетки не приживались (р=0.003). Статистически значимой взаимосвязи с возрастом пациентов (р=0.33) и наличием кальцинатов в опухоли (р=0.26) не выявлено. МТТ-тест показал отсутствие различий в чувствительности клеточных культур к иринотекану и ифосфамиду. Выраженные различия в устойчивости культур получены для оксалиплатина и аскорбиновой кислоты. Проведение МТТ-теста с оценкой лекарственной устойчивости может быть использовано как в клинической практике для уточнения режима химиотерапии препаратами, так и для разработки новых подходов к лечению ретинобластомы при оценке резистентности опухолевых клеток in vivo на животных моделях.
Ключевые слова: ретинобластома, химиотерапия, клеточная культура, МТТ-тест, клеточная линия
Адрес для корреспонденции: alextsygankov1986@yandex.ru. Цыганков А.Ю.
Литература
1.         Герасимова Г.К., Сидорова Т.А., Хорошева Е.В., Штиль А.А. Эффективность каталитической системы терафтал+аскорбиновая кислота в отношении опухолевых клеток с фенотипом множественной лекарственной устойчивости // Рос. биотер. журн. 2009. Т. 8, № 3. С. 20.
2.         Саакян С.В., Цыганков А.Ю., Иванова О.А., Захарова Г.П., Исаева Р.Т., Моисеева Н.И., Карамышева А.Ф. Злокачественная медуллоэпителиома, симулирующая ретинобластому — клинико-гистологический анализ случая и опыт получения клеточной культуры // Вестник офтальмологии.
2016. Т. 132, № 6. С. 64-69.
3.         Antoneli C.B., Ribeiro K.B., Rodriguez-Galindo C., Soares F.A., Arias V.A., Novaes P.E., Chojniak M.M., Malogolowkin M. The addition of ifosfamide/etoposide to cisplatin/teniposide improves the survival of children with retinoblastoma and orbital involvement // J. Pediatr. Hematol. Oncol. 2007. Vol. 29, N 10. P. 700-704.
4.         Antoneli C.B., Steinhorst F., de Cássia Braga Ribeiro K., Novaes P.E., Chojniak M.M., Arias V., de Camargo B. Extraocular retinoblastoma: a 13-year experience // Cancer. 2003. Vol. 98, N 6. P. 1292-1298.
5.         Busch M., Philippeit C., Weise A., Dünker N. Re-characterization of established human retinoblastoma cell lines // Histochem. Cell. Biol. 2015. Vol. 143, N 3. P. 325-338.
6.         Chévez-Barrios P., Hurwitz M.Y., Louie K., Marcus K.T., Holcombe V.N., Schafer P., Aguilar-Cordova C.E., Hurwitz R.L. Metastatic and nonmetastatic models of retinoblastoma // Am. J. Pathol. 2000. Vol. 157, N 4. P. 1405-1412.
7.         Cozza R., De Ioris M.A., Ilari I., Devito R., Fidani P., De Sio L., Demelas F., Romanzo A., Donfrancesco A. Metastatic retinoblastoma: single institution experience over two decades // Br. J. Ophthalmol. 2009. Vol. 93, N 9. P. 1163-1166.
8.         Dimaras H., Kimani K., Dimba E.A., Gronsdahl P., White A., Chan H.S., Gallie B.L. Retinoblastoma // Lancet. 2012. Vol. 379. P. 1436-1446.
9.         Eagle R.C.Jr. High-risk features and tumor differentiation in retinoblastoma: a retrospective histopathologic study // Arch. Pathol. Lab. Med. 2009. Vol. 133, N 8. P.1203-1209.
10.       Fazili N., Balagholi S., Amizadeh Y., Hosseini S.B., Kanavi M.R. Cultivation of retinoblastoma cells: correlation between in vitro growth pattern and histopathology // J. Ophthalmic Vis. Res. 2016. Vol. 11, N 4. P. 379-384.
11.       Griegel S., Hong C., Frötschl R., Hülser D.F., Greger V., Horsthemke B., Rajewsky M.F. Newly established human retinoblastoma cell lines exhibit an “immortalized” but not an invasive phenotype in vitro // Int. J. Cancer. 1990. Vol. 46, N 1. P. 125-132.
12.       Kaliki S., Shields C.L. Retinoblastoma: achieving new standards with methods of chemotherapy // Indian J. Ophthalmol. 2015. Vol. 63, N 2. P. 103-109.
13.       Kim J.H., Kim J.H., Yu Y.S., Kim D.H., Kim C.J., Kim K.W. Establishment and characterization of a novel, spontaneously immortalized retinoblastoma cell line with adherent growth // Int. J. Oncol. 2007. Vol. 31, N 3. P. 585-592.
14.       Laurie N., Mohan A., McEvoy J., Reed D., Zhang J., Schweers B., Ajioka I., Valentine V., Johnson D., Ellison D., Dyer M.A. Changes in retinoblastoma cell adhesion associated with optic nerve invasion // Mol. Cell. Biol. 2009. Vol. 29, N 23. P. 6268-62282.
15.       Lauricella M., Giuliano M., Emanuele S., Vento R., Tesoriere G. Apoptotic effects of different drugs on cultured retinoblastoma Y79 cells // Tumour Biol. 1998. Vol. 19, N 5. P. 356-363.
16.       Lee E.Y., Bookstein R., Young L.J., Lin C.J., Rosenfeld M.G., Lee W.H. Molecular mechanism of retinoblastoma gene inactivation in retinoblastoma cell line Y79 // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1988. Vol. 85, N 16. P. 6017-6021.
17.       Liu Q., Wang Y., Wang H., Liu Y., Liu T., Kunda P.E. Tandem therapy for retinoblastoma: immunotherapy and chemotherapy enhance cytotoxicity on retinoblastoma by increasing apoptosis // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2013. Vol. 139, N 8. P. 1357-1372.
18.       Madhavan J., Ganesh A., Roy J., Biswas J., Kumaramanickavel G. The relationship between tumor cell differentiation and age at diagnosis in retinoblastoma // J. Pediatr. Ophthalmol. Strabismus. 2008. Vol. 45, N 1. P. 22-25.
19.       Madreperla S.A., Bookstein R., Jones O.W., Lee W.H. Retinoblastoma cell lines Y79, RB355 and WERI-Rb27 are genetically related // Ophthalmic Paediatr. Genet. 1991. Vol. 12, N 1. P. 49-56.
20.       McFall R.C., Sery T.W., Makadon M. Characterization of a new continuous cell line derived from a human retinoblastoma // Cancer Res. 1977. Vol. 37, N 4. P. 1003-1010.
21.       Medina M.A., Garc
нa de Veas R., Schweigerer L. Ascorbic acid is cytotoxic for pediatric tumor cells cultured in vitro // Biochem. Mol. Biol. Int. 1994. Vol. 34, N 5. P. 871-874.
22.       Pichi F., Lembo A., De Luca M., Hadjistilianou T., Nucci P. Bilateral retinoblastoma: clinical presentation, management and treatment // Int. Ophthalmol. 2013. Vol. 33, N 5. P. 589-593.
23.       Roomi M.W., Roomi N., Bhanap B., Niedzwiecki A., Rath M. Antineoplastic activity of a nutrient mixture in Y-79 malignant retinoblastoma cells // Oncol. Rep. 2013. Vol. 29, N 1. P. 29‑33.
24.       Ruggiero A., Trombatore G., Triarico S., Arena R., Ferrara P., Scalzone M., Pierri F., Riccardi R. Platinum compounds in children with cancer: toxicity and clinical management // Anticancer Drugs. 2013. Vol. 24, N 10. P. 1007-1019.
25.       Schouten-van Meeteren A.Y., van der Valk P., van der Linden H.C., Moll A.C., Imhof S.M., Huismans D.R., Loonen A.H., Veerman A.J. Histopathologic features of retinoblastoma and its relation with in vitro drug resistance measured by means of the MTT assay // Cancer. 2001. Vol. 92, N 11. P. 2933-2940.
26.       Wang C., Lv H., Yang W., Li T., Fang T., Lv G., Han Q., Dong L., Jiang T., Jiang B., Yang G., Wang H. SVCT-2 determines the sensitivity to ascorbate-induced cell death in cholangiocarcinoma cell lines and patient derived xenografts // Cancer Lett. 2017. Vol. 398. P. 1-11.

Особенности действия молекулярных механизмов, участвующих в изменении структурно-функциональной организации генома клетки
И.П.Шабалкин, Е.Ю.Григорьева, М.В.Гудкова, Ю.В.Стукалов – 45
ФГБУ НМИЦ онкологии им. Н.Н.Блохина Минздрава России, Москва
         
В рамках ранее предложенной модели структурной организации ДНК (дополняющей модель Уотсона—Крика), построенной в соответствии с математической закономерностью — числовым рядом Фибоначчи, предполагается, что существуют нуклеотиды, не имеющие азотистого основания. Эти нуклеотиды обозначены как линкеры, связывающие две субъединицы ДНК.
Ключевые слова: структура ДНК, линкер, димер, азотистое основание, гликозидная связь
Адрес для корреспонденции: grig-elen11@mail.ru. Григорьева Е.Ю.
Литература
1.         Ашмаран И.П. Молекулярная биология. Л., 1977.
2.         Везер Д.В., Клейтон Ф.К. Макромолекулы на основе фосфора // Неорганические полимеры. М., 1965. С. 31‑83.
3.         Збарский И.Б. Организация клеточного ядра. М., 1988.
4.         Ленинджер А. Биохимия. М., 1976.
5.         Финеан Дж. Биологические ультраструктуры. М., 1970.
6.         Шабалкин И.П., Шабалкин П.И. Теоретические и экспериментальные подходы к анализу биологических систем. М., 2012.
7.         Шабалкин П.И. Фундаментальные и прикладные аспекты биомедицинских исследований. М., 2013.
8.         Crick F.H., Barnett L., Brenner S., Watts-Tobin R.J. General nature of the genetic code for proteins // Nature. 1961. Vol. 192. P. 1227-1232.
9.         Smith I., Smith M.J., Dore C.F. Model for macromolecules nucleic acids and proteins // Chromatogr. Electrophoretic Techniques. 1976. Vol. 16, N 2. P. 409-453.

Регистрация в реальном времени адгезии тромбоцитов на иммобилизованном на оптической подложке фибриногеновом покрытии в условиях потока
Ю.Н.Автаева*,**, И.С.Мельников**, З.А.Габбасов** – 48
*ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, Москва; **Лаборатория стволовых клеток человека ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва
         
В работе представлена тест-система, позволяющая в реальном времени регистрировать кинетику адгезии тромбоцитов на иммобилизованном на оптической подложке фибриногеновом покрытии в условиях потока. Тест-система состояла из оптической проточной камеры, полупроводникового лазера, системы из двух фотоприемников, аналого-цифрового преобразователя, компьютера и перистальтического насоса. Взаимодействие тромбоцитов с оптической подложкой регистрировалось двумя фотоприемниками по интенсивности рассеянного и отраженного в результате полного внутреннего отражения лазерного светового потока, которое происходило на границе контакта образца крови и поверхности оптической подложки, покрытой фибриногеном. Исследовали зависимость кинетики адгезии тромбоцитов от скорости сдвига и концентрации тромбоцитов. Специфичность взаимодействия тромбоцитов с белковой поверхностью проточной камеры проверяли блокированием гликопротеинового комплекса IIb/IIIa тромбоцитов Fab2-фрагментами моноклональных антител.
Ключевые слова: кровь, тромбоциты, адгезия, фибриноген, поток
Адрес для корреспонденции: julia_94fs@mail.ru. Автаева Ю.Н.
Литература
1.         Ciciliano J.C., Tran R., Sakurai Y., Lam W.A. The platelet and the biophysical microenvironment: lessons from cellular mechanics // Thromb.
Res. 2014. Vol. 133, N 4. P. 532-537.
2.         De Zanet D., Battiston M., Lombardi E., Specogna R., Trevisan F., De Marco L., Affanni A., Mazzucato M. Impedance biosensor for real-time monitoring and prediction of thrombotic individual profile in flowing blood // PLoS One. 2017. Vol. 12, N 9. P. e0184941. doi: 10.1371/journal.pone.0184941.
3.         Grunkemeier J.M., Tsai W.B., McFarland C.D., Horbett T.A. The effect of adsorbed fibrinogen, fibronectin, von Willebrand factor and vitronectin on the procoagulant state of adherent platelets // Biomaterials. 2000. Vol. 21, N 22. P. 2243-2252.
4.         Guha Thakurta S., Miller R., Subramanian A. Adherence of platelets to in situ albumin-binding surfaces under flow conditions: role of surface-adsorbed albumin // Biomed. Mater. 2012. Vol. 7, N 4. P. 045007. doi: 10.1088/1748-6041/7/4/045007.
5.         Kroll M.H., Hellums J.D., McIntire L.V., Schafer A.I., Moake J.L. Platelets and shear stress // Blood. 1996. Vol. 88, N 5. P. 1525‑1541.
6.         Lopez-Alonso A., Jose B., Somers M., Egan K., Foley D.P., Ricco A.J., Ramström S., Basabe-Desmonts L., Kenny D. Individual platelet adhesion assay: measuring platelet function and antiplatelet therapies in whole blood via digital quantification of cell adhesion // Anal. Chem. 2013. Vol. 85, N 13. P. 6497-6504.
7.         Tsai W.B., Grunkemeier J.M., McFarland C.D., Horbett T.A. Platelet adhesion to polystyrene-based surfaces preadsorbed with plasmas selectively depleted in fibrinogen, fibronectin, vitronectin, or von Willebrand’s factor // J. Biomed.
Mater. Res. 2002. Vol. 60, N 3. P. 348-359.

Васкуляризация поврежденного нерва крысы после применения экспериментальной клеточной терапии
Е.С.Петрова, Е.Н.Исаева, Е.А.Колос, Д.Э.Коржевский – 53
Лаборатория функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы (рук. — докт. мед. наук Д.Э.Коржевский) отдела общей и частной морфологии ФГБНУ НИИ экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, РФ
         
С помощью иммуногистохимического выявления фактора фон Виллебранда, маркера эндотелиальных клеток кровеносных сосудов, был проведен количественный анализ кровеносных сосудов дистального сегмента седалищного нерва крысы после передавливания (лигатура, 40 с) и субпериневрального введения мезенхимных стволовых клеток или диссоциированных клеток эмбрионального спинного мозга крысы. Установлено, что через 21 сут после повреждения и введения мезенхимных стволовых клеток число кровеносных сосудов на единицу площади нервного ствола возрастает более чем в 1.5 раза по сравнению с контролем (поврежденным нервом). При введении диссоциированных клеток эмбрионального спинного мозга такого эффекта не наблюдается. Предполагается, что мезенхимные стволовые клетки оказывают стимулирующее действие на рост сосудов поврежденного нерва путем выработки ангиогенных факторов.
Ключевые слова: регенерация нерва, васкуляризация, мезенхимные стволовые клетки, фактор Виллебранда, иммуногистохимия
Адрес для корреспонденции: iemmorphol@yandex.ru. Петрова Е.С.
Литература
1.         Александрова М.А., Подгорный О.В., Марей М.В., Полтавцева Р.А., Цитрин Е.Б., Гуляев Д.В., Черкасова Л.В., Ревищин А.В., Корочкин Л.И., Хрущов Н.Г., Сухих Г.Т. Характеристика нейральных стволовых клеток человека in vitro и при трансплантации в мозг крыс // Клет. технол. в биол. и мед. 2005. № 1. С. 13-19.
2.         Берснев В.П., Яковенко И.В., Семенютин В.Б., Кокин Г.С. Хирургическое лечение поврежденных нервов с учетом их кровотока и данных интраоперационной диагностики. Л., 1991.
3.         Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Сухорукова Е.Г., Алексеева О.С., Шайдаков Е.В. Фактор Виллебранда эндотелиоцитов кровеносных сосудов и его использование в иммуноморфологических исследованиях // Мед. акад. журн. 2017. Т. 17, № 1. С. 34-40.
4.         Лосева Е.В., Подгорный О.В., Полтавцева Р.А., Марей М.В., Логинова Н.А., Курская О.В., Сухих Г.Т., Чайлахян Р.К., Александрова М.А. Эффекты нейротрансплантации культивируемых нейральных и мезенхимальных стволовых клеток человека на обучение и состояние мозга крыс после гипоксии // Рос. физиол. журн. 2011. Т. 97, № 2. С. 155-168.
5.         Николаев С.И., Галлямов А.Р., Челышев Ю.А. Локальная доставка генов VEGF и FGF2, стимулирующая регенерацию нерва // Астраханск. мед. журн. 2013. Т. 8, № 1. С.
170-174.
6.         Ноздрачев А.Д., Чумасов Е.И. Периферическая нервная система. СПб., 1990.
7.         Парфенова Е. В., Ткачук В. А. Терапевтический ангиогенез: достижения, проблемы, перспективы // Кардиол. вестник. 2007. Т. 2, № 2. С. 5-15.
8.         Петрова Е.С., Исаева Е.Н. Изучение влияния аллотрансплантатов эмбриональных закладок спинного мозга крыс на рост регенерирующих волокон нерва реципиента // Изв. РАН. Сер. биол. 2014. № 6. С. 549-557.
9.         Рубина К.А., Калинина Н.И., Ефименко А.Ю., Лопати­на Т.В., Мелихова В.С., Цоколаева З.И., Сысоева В.Ю., Ткачук В.А., Парфенова Е.В. Механизм стимуляции ангиогенеза в ишемизированном миокарде с помощью стромальных клеток жировой ткани // Кардиология. 2010. Т. 50, № 2. С. 51-61.
10.       Соколова И.Б., Полынцев Д.Г. Эффективность применения мезенхимных стволовых клеток для улучшения микроциркуляции в коре головного мозга спонтанно гипертензивных крыс // Цитология. 2017. Т. 59, № 4. С. 279-284.
11.       Щаницын И.Н., Иванов А.Н., Бажанов С.П., Нинель В.Г., Пучиньян Д.М., Норкин И.А. Cтимуляция регенерации периферического нерва: современное состояние, проб­лемы и перспективы // Успехи физиол. наук. 2017. Т. 48, № 3. С. 92-112.
12.       Ярыгин К.Н., Ярыгин В.Н. Нейрогенез в центральной нервной системе и перспективы регенеративной неврологии // Журн. неврол. и психиатр. 2012. Т. 112, № 1. С. 4-13.
13.       Baez J.C., Gajavelli S., Thomas C.K., Grumbles R.M., Aparicio B., Byer D., Tsoulfas P. Embryonic cerebral cortex cells retain CNS phenotypes after transplantation into peripheral nerve // Exp. Neurol. 2004. Vol. 189, N 2. P. 422-425.
14.       Bell M.A., Weddell A.G. A morphometric study of intrafascicular vessels of mammalian sciatic nerve // Muscle Nerve. 1984. Vol. 7, N 7. P. 524-534.
15.       Fairbairn N.G., Meppelink A.M., Ng-Glazier J., Randolph M.A., Winograd J.M. Augmenting peripheral nerve regeneration using stem cells: a review of current opinion // World J. Stem Cells. 2015. Vol. 7, N 1. Р. 11-26.
16.       Kakinoki R., Nishijima N., Ueba Y., Oka M., Yamamuro T. Relationship between axonal regeneration and vascularity in tubulation — an experimental study in rats // Neurosci. Res. 1995. Vol. 23, N 1. P. 35-45.
17.       Kalinina N., Kharlampieva D., Loguinova M., Butenko I., Pobeguts O., Efimenko A., Ageeva L., Sharonov G., Ischenko D., Alekseev D., Grigorieva O., Sysoeva V., Rubina K., Lazarev V., Govorun V. Characterization of secretomes provides evidence for adipose-derived mesenchymal stromal cells subtypes // Stem Cell Res.
Ther. 2015 Vol. 6. P. 221. doi: 10.1186/s13287-015-0209-8.
18.       Karagyaur M., Dyikanov D., Makarevich P., Semina E., Stambolsky D., Plekhanova O., Kalinina N., Tkachuk V. Non-viral transfer of BDNF and uPA stimulates peripheral nerve regeneration // Biomed. Pharmacother. 2015. Vol. 74. P. 63‑70.
19.       Kingham P.J., Kolar M.K., Novikova L.N., Novikov L.N., Wiberg M. Stimulating the neurotrophic and angiogenic properties of human adipose-derived stem cells enhances nerve repair // Stem Cells Dev. 2014.
Vol. 23, N 7. P. 741-754.
20.       Lopatina T., Kalinina N., Karagyaur M., Stambolsky D., Rubina K., Revischin A., Pavlova G., Parfyonova Y., Tkachuk V. Adipose-derived stem cells stimulate regeneration of peripheral nerves: BDNF secreted by these cells promotes nerve healing and axon growth de novo // PLoS One. 2011. Vol. 6, N 3. P. e17899. doi: 10.1371/journal.pone.0017899.
21.       Lu P., Jones L.L., Snyder E.Y., Tuszynski M.H. Neural stem cells constitutively secrete neurotrophic factors and promote extensive host axonal growth after spinal cord injury // Exp. Neurol. 2003. Vol. 181, N 2. Р. 115-129.
22.       Masgutov R.F., Masgutova G.A., Zhuravleva M.N., Salafutdinov I.I., Mukhametshina R.T., Mukhamedshina Y.O., Lima L.M., Reis H.J., Kiyasov A.P., Palotás A., Rizvanov A.A. Human adipose-derived stem cells stimulate neuroregeneration // Clin. Exp. Med. 2016. Vol. 16, N 3. P. 451-461.
23.       Murakami T., Fujimoto Y., Yasunaga Y., Ishida O., Tanaka N., Ikuta Y., Ochi M. Transplanted neuronal progenitor cells in a peripheral nerve gap promote nerve repair // Brain Res. 2003. Vol. 974, N 1-2. P. 17-24.
24.       Okano H., Sawamoto K. Neural stem cells: involvement in adult neurogenesis and CNS repair // Philos.Trans. R Soc.
Lond .B Biol. Sci. 2008 . Vol. 363, N 1500. P. 2111-2122.
25.       Podhajsky R.J., Myers R.R. The vascular response to nerverush: relationship to Wallerian degenerationand regeneration // Brain Res. 1993. Vol. 623, N 1. P. 117-123.
26.       Santos P.M., Winterowd J.G., Allen G.G., Bothwell M.A., Rubel E.W. Nerve growth factor: increased angiogenesis without improved nerve regeneration // Otolaryngol. Head Neck Surg. 1991. Vol. 105, N 1. Р. 12-25.
27.       Shevchenko E.K., Makarevich P.I., Tsokolaeva Z.I., Boldyreva M.A., Sysoeva V.Y., Tkachuk V.A., Parfyonova Y.V. Transplantation of modified human adipose derived stromal cells expressing VEGF165 results in more efficient angiogenic response in ischemic skeletal muscle // J. Transl. Med. 2013. Vol. 11. P. 138. doi: 10.1186/1479-5876-11-138.
28.       Tang Y., Wang J., Lin X., Wang L., Shao B., Jin K., Wang Y., Yang G.Y. Neural stem cell protects aged rat brain from ischemia-reperfusion injurythrough neurogenesis and angiogenesis // J. Cereb. Blood Flow. Metab. 2014. Vol. 34, N 7. P. 1138-1147.
29.       Walsh S., Midha R. Use of stem cells to augment nerve injury repair // Neurosurgery. 2009. Vol. 65, N 4. P. 80-86.
30.       Zochodne D.W. Neurobiology of peripheral nerve regeneration. N.Y., 2008.

Сравнительный анализ экспрессии генов глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы в сперматозоидах человека при криоконсервации
Н.П.Макарова, А.Ю.Романов, Н.В.Долгушина, М.М.Паркер, А.М.Красный – 58
ФГБУ НМИЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России, Москва
         
Оценивали влияние криоконсервации на уровень экспрессии генов глутатионпероксидазы (GPX1) и глутатионредуктазы (GSR) в сперматозоидах человека (в 15 образцах спермы фертильных доноров, 10 образцах спермы бесплодных мужчин). Относительную экспрессию генов GPX1 и GSR определяли с помощью ПЦР в реальном времени. Уровень восстановления подвижных форм сперматозоидов после криоконсервации был в 2.1 раза выше в группе фертильных доноров. Выявлено значимое повышение уровня экспрессии гена GPX1, но не GSR у пациентов с бесплодием. Уровень экспрессии гена GPX1 в группе пациентов с бесплодием значимо снижался после криоконсервации-оттаивания, у фертильных доноров — возрастал, достигая того же уровня, что и у пациентов с бесплодием. Выявлена положительная корреляционная связь между уровнем экспрессии гена GPX1 и криотолерантностью сперматозоидов.
Ключевые слова: криоконсервация, окислительный стресс, вспомогательные репродуктивные технологии, сперматозоиды, криотолерантность
Адрес для корреспонденции: romanov1553@yandex.ru. Романов А.Ю.
Литература
1.         Aitken R.J., Baker M.A., Nixon B. Are sperm capacitation and apoptosis the opposite ends of a continuum driven by oxidative stress? // Asian J. Androl.
2015. Vol. 17, N 4. P. 633-639.
2.         Aitken R.J., Curry B.J. Redox regulation of human sperm function: from the physiological control of sperm capacitation to the etiology of infertility and DNA damage in the germ line // Antioxid. Redox Signal. 2011. Vol. 14, N 3. P. 367-381.
3.         Alvarez J.G., Storey B.T. Role of glutathione peroxidase in protecting mammalian spermatozoa from loss of motility caused by spontaneous lipid peroxidation // Gamete Res. 1989. Vol. 23, N 1. P. 77-90.
4.         Braga D.P., Setti A.S., Figueira R.C., Iaconelli A.Jr, Borges E.Jr. The negative influence of sperm cryopreservation on the quality and development of the embryo depends on the morphology of the oocyte // Andrology. 2015. Vol. 3, N 4. P. 723-728.
5.         Cho C., Jung-Ha H., Willis W.D., Goulding E.H., Stein P., Xu Z., Schultz R.M., Hecht N.B., Eddy E.M. Protamine 2 deficiency leads to sperm DNA damage and embryo death in mice // Biol. Reprod. 2003. Vol. 69, N 1. P. 211-217.
6.         Cowan D.B., Weisel R.D., Williams W.G., Mickle D.A. The regulation of glutathione peroxidase gene expression by oxygen tension in cultured human cardiomyocytes // J. Mol. Cell. Cardiol. 1992. Vol. 24, N 4. P. 423-433.
7.         Cowan D.B., Weisel R.D., Williams W.G., Mickle D.A. Identification of oxygen responsive elements in the 5'-flanking region of the human glutathione peroxidase gene // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268, N 36. P. 26 904-26 910.
8.         Gandini L., Lombardo F., Lenzi A., Spanò M., Dondero F. Cryopreservation and sperm DNA integrity // Cell Tissue Bank. 2006. Vol. 7, N 2. P. 91-98.
9.         Irvine D.S., Twigg J.P., Gordon E.L., Fulton N., Milne P.A., Aitken R.J. DNA integrity in human spermatozoa: relationships with semen quality // J. Androl. 2000. Vol. 21, N 1. P. 33‑44.
10.       Jornot L., Junod A.F. Differential regulation of glutathione peroxidase by selenomethionine and hyperoxia in endothelial cells // Biochem. J. 1995. Vol. 306, Pt 2. P. 581-587.
11.       Jornot L., Junod A.F. Hyperoxia, unlike phorbol ester, induces glutathione peroxidase through a protein kinase C-independent mechanism // Biochem J. 1997. Vol. 326, Pt 1. P. 117‑123.
12.       Linfor J.J., Meyers S.A. Detection of DNA damage in response to cooling injury in equine spermatozoa using single-cell gel electrophoresis // J. Androl. 2002. Vol. 23, N 1. P. 107-113.
13.       Lobascio A.M., De Felici M., Anibaldi M., Greco P., Minasi M.G., Greco E. Involvement of seminal leukocytes, reactive oxygen species, and sperm mitochondrial membrane potential in the DNA damage of the human spermatozoa // Andrology. 2015. Vol. 3, N 2. P. 265-270.
14.       McCarthy M.J., Baumber J., Kass P.H., Meyers S.A. Osmotic stress induces oxidative cell damage to rhesus macaque spermatozoa // Biol. Reprod. 2010. Vol. 82, N 3. P. 644-651.
15.       McCarthy M.J., Meyers S.A. Antioxidant treatment in the absence of exogenous lipids and proteins protects rhesus macaque sperm from cryopreservation-induced cell membrane damage // Theriogenology. 2011. Vol. 76, N 1. P. 168-176.
16.       Meseguer M., Garrido N., Sim
уn C., Pellicer A., Remohí J. Concentration of glutathione and expression of glutathione peroxidases 1 and 4 in fresh sperm provide a forecast of the outcome of cryopreservation of human spermatozoa // J. Androl. 2004. Vol. 25, N 5. P. 773-780.
17.       Sridharan T.B., Vickram A.S. Evolving trends in cryopreservation and parameters influencing semen extender preparation — a prospective review // Cryo Lett. 2016. Vol. 37, N 3. P. 196-205.
18.       Wehbi E., Meriano J., Laskin C., Jarvi K.A., Lo K.C. Adverse IVF/ICSI outcomes associated with higher levels of sperm dna fragmentation // J. Urol. 2009. Vol. 181, N 4, Suppl. P. 688.
19.       World Health Organization, Department of Reproductive Health and Research.
WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. WHO, 2010.

КриоБластТМ — новая технология сверхбыстрой криоконсервации клеток и тканей: 2. Кинетическая витрификация плюрипотентных стволовых клеток и сперматозоидов человека
И.И.Катков*,**, В.Ф.Болюх**, Г.Т.Сухих*** – 63
*ФГАОУ ВО Белгородский государственный национальный исследовательский университет, Белгород, РФ; **CELLTRONIX, San Diego, California, USA; ***ФГБУ НМИЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России, Москва
          Пилотные эксперименты по кинетической витрификации плюрипотентных стволовых клеток и сперматозоидов человека на полуавтоматической установке КриоБластТМ-2 без применения проникающих криопротекторов показали хорошую выживаемость клеток, в обоих случаях составившую 75-85%.
Ключевые слова: криоконсервация, кинетическая витрификация, эффект Лейденфроста, репродуктивная медицина, регенеративная медицина
Адрес для корреспонденции: prodvincell@hotmail.com. Катков И.И.
Литература
1.         Катков И.И., Болюх В.Ф., Сухих Г.Т. КриоБластТМ — новая технология сверхбыстрой криоконсервации клеток и тканей: 1. Термодинамические аспекты и перспективы применения в репродуктивной и регенеративной медицине // Клет. технол. в биол. и мед. 2017. № 4. С.  216‑221.
2.         Патент РФ № 2624963. Устройство сверхбыстрого охлаждения биологических образцов до криогенных температур / И.И.Катков, В.Ф.Болюх // Бюл. № 20. Опубликовано 11.07.2017.
3.         Isachenko E., Isachenko V., Katkov I.I. // Vitrification in assisted reproduction: a user’s manual and troubleshooting guide / Eds. M.J.Tucker, J.Liebermann. Oxon, 2007. P. 87‑105.
4.         Isachenko E., Isachenko V., Katkov I.I., Dessole S., Nawroth F. Vitrification of mammalian spermatozoa in the absence of cryoprotectants: from past practical difficulties to present success // Reprod.
Biomed. Online. 2003. Vol. 6, N 2. P.191‑200.
5.         Isachenko E., Isachenko V., Sanchez R.,Katkov I.I., Kreienberg R. Cryopreservation of spermatozoa: old routine and new perspective // Principles and practice of fertility preservation / Eds J.Donnez, S.S.Kim. Cambridge, 2011. P. 177-199.
6.         Katkov I.I. Race for the pace: is the universal cryoprotocol a dream or reality? // Cryobiology. 2010. Vol. 61. P. 374-375.
7.         Katkov I.I., Bolyukh V.F. Method and scalable devices for hyper-fast cooling and warming // US Patent 9,638,452 B2, 2017, Assignee: CELLTRONIX, priority September 9, 2012.

8.         Katkov I.I., Bolyukh A.F., Chernetsov O.A., Dudin P.I., Grigoriev A.Y., Isachenko V., Isachenko E., Lulat A.G.-M., Moskovtsev S.I., Petrushko M.P., Pinyaev V.I., Sushko A.B., Sokol K.M., Sokol Y.I., Yakhnenko I. Kinetic vitrification of spermatozoa of vertebrates: what can we learn from nature? // Current frontiers in cryobiology / Ed. I.I.Katkov. InTech Open Access Books, 2012. Ch. 1. P. 3-40. URL: http://www.intechopen. com/books/current-frontiers-in-cryobiology.
9.         Warkentin M., Stanislavskaia V., Hammes K. Thorne R.E. Crystallography in capillaries: critical glycerol concentrations and cooling rates // J. Appl. Cryst. 2008. Vol. 41. P. 791‑797.