info@iramn.ru
com@iramn.ru
bbm.ktbm@gmail.com



КЛЕТОЧНЫЕ  ТЕХНОЛОГИИ  В  БИОЛОГИИ  И  МЕДИЦИНЕ

2017 г., № 4

 СОДЕРЖАНИЕ

ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТА ОБКЛАДОЧНЫХ КЛЕТОК ИЗ ОБОНЯТЕЛЬНОЙ ВЫСТИЛКИ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТРАВМ СПИННОГО МОЗГА
А.Д.Воронова*,**, О.В.Степанова*, М.П.Валихов*, А.В.Чадин*, А.С.Дворников**, И.В.Решетов***, В.П.Чехонин*,** – 207
*Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ ФМИЦПН им. В.П.Сербского Минздрава России, Москва; **Кафедра медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультет ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, Москва; ***Университетская клиническая больница № 1 ФГАОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России, Москва
          Разработан оптимальный протокол для получения и культивирования обкладочных клеток из обонятельной выстилки носа человека. По разработанному протоколу была получена культура, обогащенная обкладоч­ными клетками обонятельной выстилки человека. Обкладочные клетки были охарактеризованы с помощью иммунофлюоресцентного анализа по одновременной экспрессии маркеров GFAP и p75NTR. Наибольшее процентное содержание обкладочных клеток наблюдается на 3-м (94%) и 4-м (89.5%) пассаже. Разработанный протокол рекомендован для получения аутологичного препарата обкладочных клеток человека для применения в клеточной терапии травм спинного мозга.
Ключевые слова: обкладочные клетки обонятельной выстилки человека, обонятельная выстилка человека, клеточная терапия, травмы спинного мозга
Адрес для корреспонденции: nastyanastyav@mail.ru. Воронова А.Д.
Литература
1.
            Брюховецкий А.С. Трансплантация нервных клеток и тканевая инженерия мозга при нерных болезнях. М., 2003.
2.
            Викторов И.В., Савченко Е.А., Чехонин В.П. Спонтанная нейральная дифференциация стволовых клеток в культуре обонятельного эпителия человека // Клет. технол. в биол. и мед. 2007. № 4. С. 183-188.
3.
            Воронова А.Д., Степанова О.В., Чадин А.В., Решетов И.В., Чехонин В.П. Клеточная терапия при травмах спинного мозга // Вестн. РАМН. 2016. Т. 71, № 6. С. 420-426.
4.            Aoki M., Kishima H., Yoshimura K., Ishihara M., Ueno M., Hata K., Yamashita T., Iwatsuki K., Yoshimine T. Limited functional recovery in rats with complete spinal cord injury after transplantation of whole-layer olfactory mucosa: laboratory investigation // J. Neurosurg. Spine. 2010. Vol. 12, N 2. P. 122-130.
5.            Au E., Richter M.W., Vincent A.J., Tetzlaff W., Aebersold R., Sage E.H., Roskams A.J. SPARC from olfactory ensheathing cells stimulates Schwann cells to promote neurite out­growth and enhances spinal cord repair // J. Neurosci. 2007. Vol. 27, N 27. P. 7208-7221.
6.            Barber P.C., Lindsay R.M. Schwann cells of the olfactory nerves contain glial fibrillary acidic protein and resemble astrocytes // Neuroscience. 1982. Vol. 7, N 12. P. 3077-3090.
7.            Barnett S.C., Riddell J.S. Olfactory ensheathing cell transplantation as a strategy for spinal cord repair — what can it achieve? // Nat. Clin. Pract. Neurol. 2007. Vol. 3, N 3. P. 152‑161.
8.            Basso D.M., Beattie M.S., Bresnahan J.C. A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats // J. Neurotrauma. 1995. Vol. 12, N 1. P. 1-21.
9.            Centenaro L.A., Jaeger Mda C., Ilha J., de Souza M.A., Kalil-Gaspar P.I., Cunha N.B., Marcuzzo S., Achaval M. Olfactory and respiratory lamina propria transplantation after spinal cord transection in rats: effects on functional recovery and axonal regeneration // Brain Res. 2011. Vol. 1426. P. 54-72.
10.          De Lorenzo A.J. Electron microscopic observations of the olfactory mucosa and olfactory nerve // J. Biophys. Biochem. Cytol. 1957. Vol. 3, N 6. P. 839-850.
11.          Feron F., Mackay-Sim A. Olfactory ensheathing cells isolated from the lamina propria. Patent WO 2001030982 A1, 03.05.2001.
12.          Féron F., Perry C., Cochrane J., Licina P., Nowitzke A., Urquhart S., Geraghty T., Mackay-Sim A. Autologous olfactory ensheathing cell transplantation in human spinal cord injury // Brain. 2005. Vol. 128, Pt 12. P. 2951-2960.
13.          Gasser H.S. Olfactory nerve fibres // J. Gen. Physiol. 1956. Vol. 39, N 4. P. 473-496.
14.          Higginson J.R., Barnett S.C. The culture of olfactory ensheathing cells (OECs) — a distinct glial cell type // Exp. Neurol. 2011. Vol. 229, N 1. P. 2-9.
15.          Jarmundowicz W. Methods of the obtaining of olfactory ensheathing cells and their application. Patent WO 2007069927 A2, 21.06.2007.
16.          Kocsis J.D., Lankford K.L., Sasaki M., Radtke C. Unique in vivo properties of olfactory ensheathing cells that may contribute to neural repair and protection following spinal cord injury // Neurosci Lett. 2009. Vol. 456, N 3. P. 137-142.
17.          Li J., Lepski G. Cell transplantation for spinal cord injury: a systematic review // Biomed. Res. Int. 2013. Vol. 2013. ID 786475. doi: 10.1155/2013/786475.
18.          Lima C., Pratas-Vital J., Escada P., Hasse-Ferreira A., Capucho C., Peduzzi J.D. Olfactory mucosa autografts in human spinal cord injury: a pilot clinical study // J. Spinal Cord Med. 2006. Vol. 29, N 3. P. 191-203.
19.          Lindsay S.L., Toft A., Griffin J., M M Emraja A., Barnett S.C., Riddell J.S. Human olfactory mesenchymal stromal cell transplants promote remyelination and earlier improvement in gait co-ordination after spinal cord injury // Glia. 2017. Vol. 65, N 4. P. 639-656.
20.          Mackay-Sim A., Féron F., Cochrane J., Bassingthwaighte L., Bayliss C., Davies W., Fronek P., Gray C., Kerr G., Licina P., Nowitzke A., Perry C., Silburn P.A., Urquhart S., Geraghty T. Autologous olfactory ensheathing cell transplantation in human paraplegia: a 3-year clinical trial // Brain. 2008. Vol. 131, Pt 9. P. 2376-2386.
21.          Mackay-Sim A., St John J.A. Olfactory ensheathing cells from the nose: clinical application in human spinal cord injuries // Exp. Neurol. 2011. Vol. 229, N 1. P. 174-180.
22.          Nori S., Nakamura M., Okano H. Plasticity and regeneration in the injured spinal cord after cell transplantation therapy // Prog. Brain Res. 2017. Vol. 231. P. 33-56.
23.          Novikova L.N., Lobov S., Wiberg M., Novikov L.N. Efficacy of olfactory ensheathing cells to support regeneration after spinal cord injury is influenced by method of culture preparation // Exp. Neurol. 2011. Vol. 229, N 1. P. 132-142.
24.          Richter M.W., Fletcher P.A., Liu J., Tetzlaff W., Roskams A.J. Lamina propria and olfactory bulb ensheathing cells exhibit differential integration and migration and promote differential axon sprouting in the lesioned spinal cord // J. Neurosci. 2005. Vol. 25, N 46. P. 10 700-10 711.
25.          Singh N., Gopal S.C., Srivastava R.N., Chandra T., Agarwal S.P., Singh S.K., Gupta D.K., Balapure A.K. In vitro maintenance of olfactory mucosa with enriched olfactory ensheathing cells // J. Stem Cell Res. Ther. 2013. Vol. 3. P. 132. doi:10.4172/2157-7633.1000132.
26.          Schwob J.E. Neural regeneration and the peripheral olfactory system // Anat. Rec. 2002. Vol. 269, N 1. P. 33-49.
27.          Tabakow P., Jarmundowicz W., Czapiga B., Fortuna W., Miedzybrodzki R., Czyz M., Huber J., Szarek D., Okurowski S., Szewczyk P., Gorski A., Raisman G. Transplantation of autologous olfactory ensheathing cells in complete human spinal cord injury // Cell Transplant. 2013. Vol. 22, N 9. P. 1591‑1612.
28.          Toft A., Scott D.T., Barnett S.C., Riddell J.S. Electrophysiological evidence that olfactory cell transplants improve function after spinal cord injury // Brain. 2007. Vol. 130, Pt 4. P. 970-984.
29.          Zadroga A., Jezierska-Woźniak K., Czarzasta J., Barczewska M., Wojtkiewicz J., Maksymowicz W. Therapeutic potential of olfactory ensheathing cells and mesenchymal stem cells in spinal cord injurie // Stem Cells Int. 2017. Vol. 2017. ID 3978595. doi: 10.1155/2017/3978595.
30.          Zhang S.X., Huang F., Gates M., White J., Holmberg E.G. Histological repair of damaged spinal cord tissue from chronic contusion injury of rat: a LM observation // Histol.
Histopathol. 2011. Vol. 26, N 1. P. 45-58.

Измерение сил адгезии в системе “клетка—клетка” на основе технологий атомно-силовой микроскопии
М.Ю.Скоркина, Е.А.Шамрай, Е.А.Сладкова – 213
ФГАОУ ВО Белгородский государственный национальный исследовательский университет, Белгород, РФ
          Предложен и апробирован способ изготовления биосенсорного чипа, сконструированного на основе нативного лимфоцита цельной крови человека и титанового типлесса, который может быть использован для измерения межмолекулярных сил адгезии в системе “клетка—клетка” в режиме атомно-силовой спектроскопии. С использованием разработанного биосенсорного чипа измерена сила адгезии между лимфоцитом и гранулоцитом, лимфоцитом и эритроцитом в норме и при развитии острого лимфобластного лейкоза (до лечения, во время стандартного лечения и на стадии рецидива болезни). Установлено увеличение силы адгезии между лимфоцитами и гранулоцитами, лимфоцитами и эритроцитами практически в 2 раза на стадии рецидива болезни, что является важным диагностическим признаком ранних цитологических нарушений, начинающихся при прогрессии лейкоза.
Ключевые слова: биосенсорный чип, атомно-силовая микроскопия, клетки крови, адгезия
Адрес для корреспонденции: skorkina@bsu.edu.ru. Скоркина М.Ю.
Литература
1.            Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Патогенетическое значение лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии // Мед. иммунол. 2006. Т. 8, № 5-6. С. 745-753.
2.            Луцик М.М., Ященко А.М., Ковалишин В.И., Придатко О.Е., Стойка Р.С., Луцик М.Д. Гетерогенность популяции клеток лимфомы Nk/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов // Цитология и генетика. 2011. № 2. С. 3-9.
3.            Молчанова Л.В. Системный воспалительный ответ и молекулы адгезии // Общая реаниматология. 2005. Т. 1, № 1. С. 54-59.
4.            Патент РФ № 98248. Влажная камера для исследования нативных клеток крови / М.Ю. Скоркина, М.З. Федорова, С.Д. Чернявских // Бюл. № 28. Опубликовано
10.10.2010.
5.            Benoit M., Gaub H.E. Measuring cell adhesion forces with the atomic force microscope at the molecular level // Cell Tissues Organs. 2002. Vol. 172, N 3. P. 174-189.
6.            Friedl P., Wolf K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms // Nat.
Rev. Cancer. 2003. Vol. 3, N 5. P. 362-374.

КриоБластТМ — новая технология сверхбыстрой криоконсервации клеток и тканей: 1. Термодинамические аспекты и перспективы применения в репродуктивной и регенеративной медицине
И.И.Катков*,**, В.Ф.Болюх**, Г.Т.Сухих*** – 216
*ФГАОУ ВО Белгородский государственный национальный исследовательский университет, Белгород, РФ; **CELLTRONIX, San Diego, California, USA; ***ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России, Москва
          Кинетическая (динамическая) витрификация является перспективным направлением в криоконсервации биологических материалов, поскольку позволяет избежать образования летального внутриклеточного льда и сводит к минимуму вредное воздействие высокотоксичных проникающих криопротекторов. При этом практически для любого типа клеток может быть использован единый протокол охлаждения и соответствующая аппаратура. В существующих технологиях скорость охлаждения существенно ограничена эффектом Лейденфроста. Описана новая платформа для кинетической витрификации биологических материалов КриоБластTM, реализующая сверхбыстрое криогенное охлаждение, которая позволяет практически полностью устранить эффект Лейденфроста. Это открывает перспективы создания новой технологии криоконсервации клеток в первую очередь для нужд репродуктивной и регенеративной медицины.
Ключевые слова: криоконсервация, криобанки, кинетическая витрификация; эффект Лейденфроста; репродуктивная и регенеративная медицина
Адрес для корреспонденции: prodvincell@hotmail.com. Катков И.И.
Литература
1.            Архаров А.М., Марфенина И.В., Микулин Е.И. Теория и вычислительные методы для криогенных систем. М., 1978. С. 389-400.
2.            Бернштейн А.Д., Петропавловский В.В. Влияние неэлектролитов на переживаемость сперматозоидов (сообщение III) // Бюл. экспер. биол. 1937. Т. 3, № 1. С. 41-43.
3.            Граевский Е.Ю. Стеклообразное состояние протоплазмы в условиях глубокого холода // Успехи соврем. биол. 1948. Т. 14, № 4. С. 186-202.
4.            Смирнов И.В. Консервация семени домашних животных путем глобоко охлаждения // Советская зоотехния.
1949. № 4. С. 63-65.
5.            Fahy G.M., MacFarlane D.R., Angell C.A., Meryman H.T. Vitrification as an approach to cryopreservation // Cryobiology. 1984. Vol. 21, N 4. P. 407-426.
6.            Isachenko E., Isachenko V., Katkov I.I., Dessole S., Nawroth F. Vitrification of mammalian spermatozoa in the absence of cryoprotectants: from past practical difficulties to present success // Reprod. Biomed. Online. 2003. Vol. 6, N 2. P. 191‑200.
7.            Katkov I.I., Bolyukh A.F., Chernetsov O.A., Dudin P.I., Grigoriev A.Y., Isachenko V., Isachenko E., Lulat A.G.-M., Moskovtsev S.I., Petrushko M.P., Pinyaev V.I., Sushko A.B., Sokol K.M., Sokol Y.I., Yakhnenko I. Kinetic vitrification of spermatozoa of vertebrates: what can we learn from nature? // Current frontiers in cryobiology / Ed. I.I.Katkov. InTech Open Access Books, 2012. Ch. 1. P. 3-40. URL: http://www.intechopen. com/books/current-frontiers-in-cryobiology.
8.            Katkov I.I., Bolyukh V.F., Lupikov V.S. Method and device for hyper-fast cooling of small samples // US Patent 9,557,090. 2017, Assignee: CELLTRONIX, priority April 6, 2011.
9.            Katkov I.I., Isachenko V., Isachenko E. Vitrification in small quenched volumes with a minimal amount of, or without vitrificants: basic biophysics and thermodynamics // Vitrification in assisted reproduction: a user’s manual and troubleshooting guide // Eds. M.J.Tucker, J.Liebermann. London, 2007. P. 21-32.
10.          Katkov I.I., Kan N.G., Cimadamore F., Nelson B., Snyder E.Y., Terskikh A.V. DMSO-free programmed cryopreservation of fully dissociated and adherent human induced pluripotent stem cells // Stem Cells Int. 2011. Vol. 2011. ID 981606. doi: 10.4061/2011/981606.
11.          Luyet B.E. The vitrification of organic colloids and of protoplasm // Biodynamica. 1937. Vol. 1. P. 1-14.
12.          Luyet B., Hodapp A. Revival of frog’s spermatozoa vitrified in liquid air // Proc. Meet Soc. Exp. Biol. 1938. Vol. 39. P. 433‑434.
13.          Mazur P. Cryobiology: the freezing of biological systems // Science. 1970. Vol. 168. P. 939-949.
14.          Mazur P. Freezing of living cells: mechanisms and implications // Am. J. Physiol. 1984. Vol. 247, N 3, Pt 1. P. C125-C142.
15.          Mazur P., Leibo S.P., Chu E.H. A two-factor hypothesis of freezing injury: evidence from chinese hamster tissue-culture cells // Exp. Cell Res. 1972. Vol. 71, N 2. P. 345-355.
16.          Mazur P., Leibo S.P., Seidel G.E.Jr. Cryopreservation of the germplasm of animals used in biological and medical research: importance, impact, status, and future directions // Biol. Reprod. 2008. Vol. 78, N 1. P. 2-12.
17.          Parkes A.S. Preservation of spermatozoa at low temperatures // Br. Med. J. 1945. Vol. 2. P. 212-213.
18.          Polge C., Smith A.U., Parkes A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperatures // Nature. 1949. Vol. 164. P. 666.
19.          Rall W.F., Fahy G.M. Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification // Nature. 1985. Vol. 313. P. 573-575.
20.          Saragusty J., Arav A. Current progress in oocyte and embryo cryopreservation by slow freezing and vitrification // Reproduction. 2011. Vol. 141, N 1. P. 1-19.
21.          Warkentin M., Stanislavskaia V., Hammes K., Thorne R.E. Cryocrystallography in capillaries: critical glycerol concentrations and cooling rates // J. Appl.
Crystallogr. 2008. Vol. 41, Pt 4. P. 791-797.

Получение и исследование характеристик культуры миобластов человека in vitro для обеспечения технологий клеточной и генетической терапии патологических состояний скелетных мышц
В.Ю.Табаков, О.Е.Зиновьева*, О.Н.Воскресенская*, М.Ю.Скоблов – 222
ФГБНУ Медико-генетический научный центр, Москва, РФ; *Кафедра нервных болезней ФГАОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России, Москва
          Исследовали культуры 5 независимых линий миобластов из тканей скелетных мышц человека. Показано, что количество десминпозитивных клеток в культурах ранних пассажей превышает 90%. Определены характерные морфофункциональные признаки нарушения миогенной дифференцировки и их динамика. Выявлены признаки альтернативной дифференцировки клеток в адипогенном и хондрогенном направлении. На основании полученных данных оценены ограничения по использованию культур линий миобластов определенных пассажей для проведения биомедицинских исследований и клеточной терапии.
Ключевые слова: сателлитные клетки, миобласты, культивирование, дифференцировка
Адрес для корреспонденции: vyutab@yandex.ru. Табаков В.Ю.
Литература
1.           
Bisson A., Le Corre S., Joly-Helas G., Chambon P., Demoulins L., Jean L., Adriouch S., Drouot L., Giverne C., Roussel F., Jacquot S., Doucet C., Michot F., Lamacz M., Frébourg T., Flaman J.M., Boyer O. Chromosomal instability but lack of transformation in human myoblast preparations // Cell Transplant. 2014. Vol. 23, N 12. P. 1475-1487.
2.            Cai R., Nakamoto T., Hoshiba T., Kawazoe N., Chen G. Control of simultaneous osteogenic and adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells // Stem Cell Res. Ther. 2014. Vol. 4. P. 223. doi: 10.4172/2157-7633.1000223.
3.            Edom-Vovard F., Mouly V., Barbet J.P., Butler-Browne G.S. The four populations of myoblasts involved in human limb muscleformation are present from the onset of primary myotube formation // J. Cell Sci. 1999. Vol. 112, Pt 2. P. 191-199.
4.            Harafuji N., Schneiderat P., Walter M.C., Chen YW. miR-411 is up-regulated in FSHD myoblasts and suppresses myogenic factors // Orphanet. J. Rare Dis. 2013. Vol. 8. P. 55. doi: 10.1186/1750-1172-8-55.
5.            Hosoyama T., Van Dyke J., Suzuki M. Applications of skeletal muscle progenitor cells for neuromuscular diseases // Am. J. Stem Cells. 2012. Vol. 1, N 3. P. 253-263.
6.            Malatesta M., Giagnacovo M., Cardani R., Meola G., Pellicciari C. Human myoblasts from skeletal muscle biopsies: in vitro culture preparations for morphological and cytochemical analyses at light andelectron microscopy // Methods Mol. Biol. 2013. Vol. 976. P. 67-79.
7.            McGeachie J.K., Grounds M.D. The timing between skeletal muscle myoblast replication and fusion into myotubes, and the stability of regenerated dystrophic myofibres: an autoradiographic study in mdx mice // J. Anat. 1999. Vol. 194, Pt 2. P. 287-295.
8.            Musarò A. The basis of muscle regeneration // Adv. Biol. 2014. Vol. 2014. ID 612471. doi: 10.1155/2014/612471.
9.            Nesmith A.P., Wagner M.A., Pasqualini F.S., O'Connor B.B., Pincus M.J., August P.R., Parker K.K. A human in vitro model of Duchenne muscular dystrophy muscle formation and contractility // J. Cell Biol. 2016. Vol. 215, N 1. P. 47-56.
10.          Preparing primary cultures from muscle biopsy specimens II. The Richard Fields Center for FSHD Research, 2017. URL: https: //www.urmc.rochester.edu/MediaLibraries/URMCMedia/fields-center/documents/myoblastprimaryculture 4_15_14.pdf (
дата обращения 25.09.2017).
11.          PromoCell GmbH. Chondrogenic Differentiation and Analysis of MSC. 2015. URL: http://www.promocell.com/fileadmin/promocell/PDF/Chondrogenic_Differentiation_and_ Analysis_of_MSC.pdf (
дата обращения 25.09.2017).
12.          Rando T.A., Blau H.M. Primary mouse myoblast purification, characterization, andtransplantation for cell-mediated gene therapy // J. Cell Biol. 1994. Vol. 125, N 6. P. 1275-1287.
13.          Relaix F., Zammit P.S. Satellite cells are essential for skeletal muscle regeneration: the cell on the edge returns centre stage // Development. 2012. Vol. 139, N 16. P. 2845-2856.
14.          Roughley P.J. The structure and function of cartilage proteoglycans // Eur. Cell Mater. 2006. Vol. 12. P. 92-101.
15.          Shefer G., Wleklinski-Lee M., Yablonka-Reuveni Z. Skeletal muscle satellite cells can spontaneously enter an alternative mesenchymal pathway // J. Cell Sci. 2004. Vol. 117, Pt 22. P. 5393-5404.
16.          Stadler G., Chen J.C., Wagner K., Robin J.D., Shay J.W., Emerson C.P.Jr, Wright W.E. Establishment of clonal myogenic cell lines from severely affected dystrophic muscles — CDK4 maintains the myogenic population // Skelet Muscle. 2011. Vol. 1, N 1. P. 12. doi: 10.1186/2044-5040-1-12.
17.          Sudo K., Kanno M., Miharada K., Ogawa S., Hiroyama T., Saijo K., Nakamura Y. Mesenchymal progenitors able to differentiate into osteogenic, chondrogenic, and/or adipogenic cells in vitro are present in mostprimary fibroblast-like cell populations // Stem Cells. 2007. Vol. 25, N 7. P. 1610-1617.
18.          Vilquin J.T., Marolleau J.P., Sacconi S., Garcin I., Lacassagne M.N., Robert I., Ternaux B., Bouazza B., Larghero J., Desnuelle C. Normal growth and regenerating ability of myoblasts from unaffected muscles of facioscapulohumeral muscular dystrophy patients // Gene Ther. 2005. Vol. 12, N 22. P. 1651-1662.
19.          Yin H., Price F., Rudnicki M.A. Satellite cells and the muscle stem cell niche // Physiol. Rev. 2013. Vol. 93, N 1. P. 23-67.
20.          Zhu C.H., Mouly V., Cooper R.N., Mamchaoui K., Bigot A., Shay J.W., Di Santo J.P., Butler-Browne G.S., Wright W.E. Cellular senescence in human myoblasts is overcome by human telomerase reverse transcriptase and cyclin-dependent kinase 4: consequences in aging muscle and therapeutic strategies for muscular dystrophies // Aging Cell. 2007.
Vol. 6, N 4. P. 515-523.

Моделирование котрансплантации мультипотентных стромальных клеток жирового тела глазницы и липоаспирата подкожной жировой ткани человека in vitro с использованием органного культивирования в коллагеновом геле
С.А.Борзенок1,2, Д.С.Афанасьева1, М.Б.Гущина3, Д.С.Островский1,4, С.П.Домогатский5,6, Е.О.Осидак6,7229
1ФГАУ МНТК “Микрохирургия глаза” им. акад. С.Н.Федорова Минздрава России, Москва; 2ФГБОУ ВО Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И.Евдокимова Минздрава России, Москва; 3ФГБУ ЦНИИ стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Минздрава России, Москва; 4ФГБНУ НИИ общей патологии и патофизиологии Минздрава России, Москва; 5ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии Минздрава России, Москва;6ООО “Имтек”, Москва, РФ; 7ФГБУ ФНИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи Минздрава России, Москва
          В модели котрансплантации in vitro методом органного культивирования в коллагеновом геле изучали взаимовлияние мультипотентных стромальных клеток жирового тела глазницы и клеток липоаспирата подкожной жировой ткани. Микроскопическая картина, выраженность апоптоза и клеточной пролиферации в культурах жировой ткани с добавлением мультипотентных стромальных клеток свидетельствовала о том, что клетки сохраняли свою жизнеспособность, пролиферативную и секреторную активность. Более высокая пролиферативная активность клеток в условиях котрансплантации способствует обновлению клеток жирового трансплантата и позволит поддерживать его стабильный объем в отдаленном посттрансплантационном периоде.
Ключевые слова: органная культура, апоптоз, мультипотентные стромальные клетки, липофилинг, энофтальм
Адрес для корреспонденции: ada-tomsk@yandex.ru. Афанасьева Д.С.
Литература
1.            Борзенок С.А., Гущина М.Б., Афанасьева Д.С., Шилкин Г.А. Орбитальная жировая клетчатка — новый ресурс для трансплантологии // Вестн. трансплантол. и искусств. органов. 2015. Т. 17, № 4. С. 118-123.
2.            Малаховская В.И., Висаитова З.Ю. Восьмилетний опыт применения липофиллинга в клинической практике: оценка результатов // Вестн. эстетической медицины. 2010. Т. 9, № 3. С. 64-74.
3.            Патент РФ № 2609657. Способ выделения мезенхимных стволовых клеток из орбитальной жировой ткани / С.А.Борзенок, М.Б.Гущина, Д.С. Афанасьева // Бюл. № 4. Опубликовано 22.10.2015.
4.            Рыжевский Д.В., Паштаев Н.П., Поздеева Н.А. Трубин В.В. Опыт использования аутожировой трансплантации при лечении посттравматического энофтальма // Практическая медицина. 2016. № 2-1. С. 43-45.
5.            Фрешни Р.Я. Культура животных клеток: практическое руководство. М., 2010.
6.            Bauer S.M., Bauer R.J., Liu Z.J., Chen H., Goldstein L., Velazquez O.C. Vascular endothelial growth factor-C promotes vasculogenesis, angiogenesis, and collagen constriction in three-dimensional collagen gels // J. Vasc. Surg. 2005. Vol. 41, N 4. P. 699-707.
7.            Boschert M.T., Beckert B.W., Puckett C.L., Concannon M.J. Analysis of lipocyte viability after liposuction // Plast. Reconstr. Surg. 2002. Vol. 109, N 2. P. 761-765.
8.            Brown M., Lee M., Zwiebel S., Adenuga P., Molavi S., Gargesha M., Varghai D., Guyuron B. Augmentation of intraorbital volume with fat injection // Plast. Reconstr. Surg. 2014. Vol. 133, N 5. P. 1098-1106.
9.            Cakir B., Aygit A.C., Omur-Okten O., Yalcin O. Retro-orbital intraconal fat injection: an experimental study in rabbits // J. Oral Maxillofac. Surg. 2012. Vol. 70, N 1. P. 242-250.
10.          Cortese A., Savastano G., Felicetta L. Free fat transplantation for facial tissue augmentation // J. Oral Maxillofac. Surg. 2000. Vol. 58, N 2. P. 164-169.
11.          Carswell K.A., Lee M., Fried S.K. Culture of isolated human adipocytes and isolated adipose tissue // Methods Mol. Biol. 2012. Vol. 806. P. 203-214.
12.          Hardy T.G., Joshi N., Kelly M.H. Orbital volume Augmentation with autologous micro-fat grafts // Ophthal. Plastic Reconstr. Surg. 2007. Vol. 23, N 6. P. 445-449.
13.          Horwitz E.M., Le Blanc K., Dominici M., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F.C., Deans R.J., Krause D.S., Keating A.; International Society for Cellular Therapy. Clarification of the nomenclature for MSC: The international society for cellular therapy position statement // Cytotherapy. 2005. Vol. 7, N 5. P. 393-395.
14.          International Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals // The Development of Science-based Guidelines for Laboratory Animal Care: Proceedings of the November 2003 International Workshop / National Research Council (US) Institute for Laboratory Animal Research. Washington, 2004. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK25438/.
15.          Lee J.Y., Lee K.H., Shin H.M., Chung K.H., Kim G.I., Lew H. Orbital volume augmentation after injection of human orbital adipose-derived stem cells in rabbits // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2013. Vol. 54, N 4. P. 2410-2416.
16.          Matsumoto D., Sato K., Gonda K., Takaki Y., Shigeura T., Sato T., Aiba-Kojima E., Iizuka F., Inoue K., Suga H., Yoshimura K. Cell-assisted lipotransfer: Supportive use of human adipose-derived cells for soft tissue augmentation with lipoinjection // Tissue Eng. 2006. Vol. 12, N 12. P. 3375-3382.
17.          Nae S., Bordeianu I., Stancioiu A.T., Antohi N. Human adipose-derived stem cells: definition, isolation, tissue-engineering applications // Rom. J. Morphol. Embryol. 2013. Vol. 54, N 4. P. 919-924.
18.          Oedayrajsingh-Varma M.J., van Ham S.M., Knippenberg M., Helder M.N., Klein-Nulend J., Schouten T.E., Ritt M.J., van Milligen F.J. Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure // Cytotherapy. 2006. Vol. 8, N 2. P. 166-177.
19.          Sonoda E., Aoki S., Uchihashi K., Soejima H., Kanaji S., Izuhara K., Satoh S., Fujitani N., Sugihara H., Toda S. A new organotypic culture of adipose tissue fragments maintains viable mature adipocytes for a long term, together with development of immature adipocytes and mesenchymal stem cell-like cells // Endocrinology. 2008. Vol. 149, N 10. P. 4794‑4798.
20.          Tchkonia T., Giorgadze N., Pirtskhalava T., Tchoukalova Y., Karagiannides I., Forse R.A., DePonte M., Stevenson M., Guo W., Han J., Waloga G., Lash T.L., Jensen M.D., Kirkland J.L. Fat depot origin affects adipogenesis in primary cultured and cloned human preadipocytes // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2002. Vol. 282, N 5. P. R1286-R1296.
21.          Yoshimura K., Suga H., Eto H. Adipose-derived stem/progenitor cells: roles in adipose tissue remodeling and potential use for soft tissue augmentation // Regen. Med. 2009. Vol. 4, N 2. P. 265-273.
22.          Yoshimura K., Sato K., Aoi N., Kurita M., Inoue K., Suga H., Eto H., Kato H., Hirohi T., Harii K. Cell-assisted lipotransfer for facial lipoatrophy: efficacy of clinical use of adipose-derived stem cells // Dermatol.
Surg. 2008. Vol. 34, N 9. P. 1178-1185.

Матриксные металлопротеиназы ММР-2, ММР-9 и их ингибитор TIMP-1 как маркеры дилатационной кардиомиопатии у лиц разного возраста
И.Б.Антонов*, К.Л.Козлов*, Е.М.Пальцева**, В.О.Полякова***, Н.С.Линькова*,**** – 236
*Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, РФ; **Российский научный центр хирургии им. акад. Б.В.Петровского, Москва, РФ; ***Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О.Отта, Санкт-Петербург, РФ; ****Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, РФ
          Исследовали экспрессию ММР-2, ММР-9 и их ингибитора TIMP-1 в аутопсийном материале миокарда людей разного возраста и в культурах кардиомиоцитов в норме и при дилатационной кардиомиопатии. В нормальном аутопсийном материале миокарда и в культурах кардиомиоцитов экспрессия молекул, участвующих в ремоделировании межклеточного матрикса, при старении практически не изменяется. При дилатационной кардиомиопатии в аутопсийном материале миокарда и в культурах кардиомиоцитов экспрессия ММР-2, ММР-9, TIMP-1 и их соотношение возрастает от 1.5 до 9 раз. Процессы ремоделирования межклеточного матрикса играют важную роль в патогенезе дилатационной кардиомиопатии. ММР-2, ММР-9, их ингибитор TIMP-1 и соотношение ММР/TIMP могут рассматриваться как перспективные предикторы развития дилатационной кардиомиопатии и использоваться для оценки эффективности лечения этого заболевания у людей разного возраста.
Ключевые слова: ММР-2, ММР-9, TIMP-1, дилатационная кардиомиопатия, старение
Адрес для корреспонденции: miayy@yandex.ru. Линькова Н.С.
Литература
1.            Гуревич М.А., Архипова Л.В. Принципы лечения хронической сердечной недостаточности у больных с дилатационной кардиомиопатией // Болезни сердца и сосудов. 2011. T. 6, № 1. С. 37-40.
2.            Терещенко С.Н., Алаева Е.Н., Нарусов О.Ю., Кочетов А.Г., Скворцов А.А. Диагностика и лечение дилатационной кардиомиопатии в повседневной клинической практике (данные первого российского регистра по дилатационной кардиомиопатии) // Кардиол. вестн.
2014. Т. 9, № 2. С. 54-61.
3.            Bornstein P., Sage E.N. Matricellular proteins: extracellular modulators of cell function // Curr. Opin. Cell. Biol. 2002. Vol. 14, N 5. P. 608-616.
4.            Creemers E.E., Cleutjens J.P., Smits J.F., Daemen M.J. Matrix Metalloproteinase Inhibition after Myocardial Infarction: a new approach to prevent heart failure? // Circ. Res. 2001. Vol. 89, N 3. P. 201-210.
5.            Ju C., Ye M., Li F. Plasma brain natriuretic peptide, endothelin-1, and matrix metalloproteinase 9 expression and significance in Type 2 diabetes mellitus patients with ischemic heart disease // Med. Sci. Monit. 2015. Vol. 21. P. 2094-2099.
6.            Jungbauer C.G., Riedlinger J., Block D., Stadler S., Birner C., Buesing M., König W., Riegger G., Maier L., Luchner A. Panel of emerging cardiac biomarkers contributes for prognosis rather than diagnosis in chronic heart failure // Biomark. Med. 2014. Vol. 8, N 6. P. 777-789.
7.            Li X., Lu Y., Sun Y., Zhang Q. Effect of curcumin on permeability of coronary artery and expression of related proteins in rat coronary atherosclerosis heart disease model // Int. J. Clin. Exp. Pathol. 2015. Vol. 8, N 6. P. 7247-7253.
8.            Lubos E., Schnabel R., Rupprecht H.J., Bickel C., Messow C.M., Prigge S., Cambien F., Tiret L., Münzel T., Blankenberg S. Prognostic value of tissue inhibitor of metalloproteinase-1 for cardiovascular death among patients with cardiovascular disease: results from the atherogene study // Eur. Heart J. 2006. Vol. 27, N 2. P. 150-156.
9.            Morine K.J., Paruchuri V., Qiao X., Mohammad N., Mcgraw A., Yunis A., Jaffe I., Kapur N.K. Circulating multimarker profile of patients with symptomatic heart failure supports enhanced fibrotic degradation and decreased angiogenesis // Biomarkers. 2016. Vol. 21, N 1. P. 91-97.
10.          Nepomnyashchikh L.M., Lushnikova E.L., Bakarev M.A., Nikityuk D.B., Yuzhik E.I., Mzhelskaya M.M., Nepomnyashchikh R.D., Klinnikova M.G., Karpova A.A. Immunohistochemical analysis of MMP-2 expression in the myocardium during the postinfarction period // Bull. Exp. Biol. Med. 2015. Vol. 159, N 4. P. 505-510.
11.          Picard F., Brehm M., Fassbach M., Pelzer B., Scheuring S., Küry P., Strauer B.E., Schwartzkopff B. Increased cardiac mRNA expression of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) and its inhibitor (TIMP-1) in DCM patients // Clin. Res. Cardiol. 2006.Vol. 95, N 5. P. 261-269.
12.          Rita Balistreri C., Allegra A., Crapanzano F., Pisano C., Ruvolo G. Matrix Metalloproteinases (MMPs), their genetic variants and miRNA in mitral valve diseases: potential biomarker tools and targets for personalized treatments // J. Heart Valve Dis. 2016. Vol. 25, N 4. P. 463-474.
13.          Rutschow S., Leschka S., Westermann D., Puhl K., Weitz A., Ladyszenskij L., Jaeger S., Zeichhardt H., Noutsias M., Schultheiss H.P., Tschope C., Pauschinger M. Left ventricular enlargement in coxsackievirus-B3 induced chronic myocarditis-ongoing inflammation and an imbalance of the matrix degrading system // Eur. J. Pharmacol.
2010. Vol. 630, N 1‑3. P. 145-151.

Некоторые особенности местного распределения мультипотентных мезенхимных стромальных клеток после инъекции в интактную мышечную ткань в эксперименте
И.В.Майбородин, В.В.Морозов, А.А.Аникеев, Р.В.Маслов, Н.Ф.Фигуренко, В.А.Матвеева, В.И.Майбородина* – 241
Центр новых медицинских технологий (зав. — проф. А.И.Шевела) ФГБУН Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, РФ; *Лаборатория ультраструктурных основ патологии (зав. — проф. Д.Е.Семенов) ФГБНУ Института молекулярной патологии и патоморфологии, Новосибирск, РФ
          Методами световой микроскопии с применением люминесценции изучали изменения мышечной ткани задней конечности крыс после инъекции под кожу в области лигированной бедренной вены аутологичных мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костномозгового происхождения с трансфицированным геном GFP и дополнительно окрашенными Vybrant CM-DiI клеточными мембранами. При введении стромальных клеток через кожу возможно их попадание не только в поврежденные ткани, где необходимо ускорение регенерации, но и в интактные структуры, расположенные поверхностнее или глубже. В неповрежденной мышечной ткани стромальные клетки распространяются по периваскулярной клетчатке, инициируют воспаление и миграцию макрофагов, активируют склеротические процессы или даже являются непосредственной их причиной вследствие как дифференцировки в клетки соединительной ткани (фибробласты), так и стимуляции пролиферации и синтеза коллагена собственными фибробластами. Введенные мультипотентные мезенхимные стромальные клетки постепенно фагоцитируются макрофагами.
Ключевые слова: мультипотентные мезенхимные стромальные клетки, мышечная ткань, воспаление, склероз, макрофаги
Адрес для корреспонденции: imai@mail.ru. Майбородин И.В.
Литература
1.            Майбородин И.В., Матвеева В.А., Маслов Р.В., Оноприенко Н.В., Кузнецова И.В., Частикин Г.А., Аникеев А.А. Некоторые реакции регионарных лимфатических узлов крыс после имплантации в дефект костной ткани мультипотентных стромальных клеток, адсорбированных на полигидроксиалканоате // Морфология. 2016. Т. 149, № 2. С. 21-26.
2.            Майбородин И.В., Морозов В.В., Матвеева В.А., Аникеев А.А., Фигуренко Н.Ф., Маслов Р.В., Частикин Г.А., Майбородина В.И. Результаты использования клеточных технологий при лигировании магистральной вены в эксперименте // Бюл. экспер. биол.
2017. Т. 164, № 7. С. 73-80.
3.            Chai N.L., Zhang X.B., Chen S.W., Fan K.X., Linghu E.Q. Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells alleviate liver fibrosis in rats // World J. Gastroenterol. 2016. Vol. 22, N 26. P. 6036-6048.
4.            Haldar D., Henderson N.C., Hirschfield G., Newsome P.N. Mesenchymal stromal cells and liver fibrosis: a complicated relationship // FASEB J. 2016. Vol. 30, N 12. P. 3905-3928.
5.            Lee C.H., Shah B., Moioli E.K., Mao J.J. CTGF directs fibroblast differentiation from human mesenchymal stem/stromal cells and defines connective tissue healing in a rodent injury model // J. Clin. Invest. 2015. Vol. 125, N 10. P. 3992. doi: 10.1172/JCI84508.
6.            Liu J., Hsu A., Lee J.F., Cramer D.E., Lee M.J. To stay or to leave: Stem cells and progenitor cells navigating the S1P gradient // World J. Biol. Chem. 2011. Vol. 2, N 1. P. 1-13.
7.            Liu S., Jiang L., Li H., Shi H., Luo H., Zhang Y., Yu C., Jin Y. Mesenchymal stem cells prevent hypertrophic scar formation via inflammatory regulation when undergoing apoptosis // J. Invest. Dermatol. 2014. Vol. 134, N 10. P. 2648-2657.
8.            Marycz K., Krzak J., Marɛdziak M., Tomaszewski K.A., Szczurek A., Moszak K. The influence of metal-based biomaterials functionalized with sphingosine-1-phosphate on the cellular response and osteogenic differentaion potenial of human adipose derived mesenchymal stem cells in vitro // J. Biomater. Appl. 2016. Vol. 30, N 10. P. 1517-1533.
9.            Mitchell A.J., Pradel L.C., Chasson L., Van Rooijen N., Grau G.E., Hunt N.H., Chimini G. Technical advance: autofluorescence as a tool for myeloid cell analysis // J. Leukoc. Biol. 2010. Vol. 88, N 3. P. 597-603.
10.          Molenaar R., Greuter M., van der Marel A.P., Roozendaal R., Martin S.F., Edele F., Huehn J., Förster R., O'Toole T., Jansen W., Eestermans I.L., Kraal G., Mebius R.E. Lymph node stromal cells support dendritic cell-induced gut-homing of T cells // J. Immunol. 2009. Vol. 183, N 10. P. 6395-6402.
11.          Poncelet A.J., Denis D., Gianello P. Cellular xenotransplantation // Curr. Opin. Organ Transplant. 2009. Vol. 14, N 2. P. 168-174.
12.          van den Bogaerdt A.J., van der Veen V.C., van Zuijlen P.P., Reijnen L., Verkerk M., Bank R.A., Middelkoop E., Ulrich M.M. Collagen cross-linking by adipose-derived mesenchymal stromal cells and scar-derived mesenchymal cells: are mesenchymal stromal cells involved in scar formation? // Wound Repair Regen. 2009. Vol. 17, N 4. P. 548-558.
13.          Yamaza T., Kentaro A., Chen C., Liu Y., Shi Y., Gronthos S., Wang S., Shi S. Immunomodulatory properties of stem cells from human exfoliated deciduous teeth // Stem Cell Res. Ther. 2010. Vol. 1, N 1. P. 5. doi: 10.1186/scrt5.
14.          Yates C.C., Nuschke A., Rodrigues M., Whaley D., Dechant J.J., Taylor D.P., Wells A. Improved transplanted stem cell survival in a polymer gel supplemented with tenascin C accelerates healing and reduces scarring of murine skin wounds // Cell Transplant. 2017. Vol. 26, N 1. P. 103-113.
15.          Zhao X.F., Wang D.L., Wei Z.R., Xue Q.Y., Yu L.M. The research of fibroblasts from human hypertrophic scar showing a mesenchymal stem cell phenotype and multilineage differentiation potentialities // Zhonghua Zheng Xing Wai Ke Za Zhi. 2013.
Vol. 29, N 4. P. 273-279.

Изучение базовых характеристик клеток остеогенного и хондрогенного ряда, значимых для тканевой инженерии имплантатов
Н.М.Астахова*,**, А.В.Корель*, Е.И.Щелкунова*, К.Е.Орищенко***, С.В.Николаев***, У.С.Зубаирова***, И.А.Кирилова* – 249
*ФГБУ Новосибирский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. Я.Л.Цивьяна Минздрава России, Новосибирск; **АО “Инновационный медико-технологический центр (Медицинский Технопарк)”, Новосибирск, РФ; ***ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, РФ
          Выделены и охарактеризованы культуры клеток костной и хрящевой ткани лабораторных мини-свиней. У адгезивных клеток остеогенного и хондрогенного ряда были уточнены размеры и характерные морфологические особенности. Исследуемые культуры клеток in vitro экспрессировали специфические маркеры, которые выявляли иммуногистохимическим окрашиванием: у остеобластов — щелочную фосфатазу и отложение кальциевых депозитов, у хондрогенных клеток — экспрессию коллагена II и хрящевого внеклеточного матрикса при длительном культивировании обеих культур клеток в стандартных условиях. Кроме того, пролиферативный потенциал (митотический индекс) для обоих типов клеток составил 4.64% от общего числа клеток. Двигательная активность — средняя скорость миграции клеток для остеобластов составила 49 пикселов/ч, а для хондробластов — 47 пикселов/ч, среднее значение длины пройденного пути для хондробластов — 2045 пикселов, для остеобластов — 2118 пикселов. Полученные линии клеток уже используются в качестве модельного контроля при определении оптимальной биосовместимости материалов матриксов. Характеристики двигательной активности клеток костной и хрящевой ткани предполагается использовать для моделирования и вычисления скорости заселения клетками 3D-скаффолдов из синтетических и биологических полимеров с различной внутренней структурой и физико-химическими свойствами при разработке тканевых имплантатов в условиях in vitro.
Ключевые слова: хондрогенные и остеогенные клетки, митотический индекс, скорость миграции, 3D-скаффолд
Адрес для корреспонденции: nastakhova@niito.ru. Астахова Н.М.
Литература
1.            Деев Р.В., Цупкина Н.В., Бозо И.Я., Калигин М.С., Гребнев А.Р., Исаев А.А., Пинаев Г.П. Тканеинженерный эквивалент кости: методологические основы создания и биологические свойства // Гены и клетки. 2011. Т. 6, № 1. C. 62-67.
2.            Комлев В.С., Сергеева Н.С., Федотов А.Ю., Свиридова И.К., Кирсанова В.А., Ахмедова С.А., Тетерина А.Ю., Зобков Ю.В., Кувшинова Е.А., Шанский Я.Д., Баринов С.М. Исследование физико-химических и биологических свойств композиционных матриксов в системе альгинат-фосфаты кальция, предназначенных для использования в технологиях прототипирования при замещении костных дефектов //Материаловедение. 2016. № 3. С. 38-42.
3.            Нащекина Ю.А., Никонов П.О., Михайлов В.М., Пинаев Г.П. Зависимость заполнения стромальными клетками костного мозга трехмерной матрицы от способа посева клеток и типа модификации поверхности матрицы // Цитология.
2014. Т. 56, № 4.С. 283-290.
4.            Cao X., Lin Y., Driscoll T.P., Franco-Barraza J., Cukierman E., Mauck R.L., Shenoy V.B. A chemomechanical model of matrix and nuclear rigidity regulation of focal adhesion size // Biophys J. 2015. Vol. 109, N 9. P. 1807-1817.
5.            De Santis R., Russo A., Gloria A., D’Amora U., Russo T., Panseri S., Sandri M., Tampieri A., Marcacci M., Dediu V.A., Wilde C.J., Ambrosio L. Towards the design of 3D fiber-deposited poly(
e-caprolactone)/iron-doped hydroxyapatite nanocomposite magnetic scaffolds for bone regeneration // J. Biomed. Nanotechnol. 2015.Vol. 11, N 7. P. 1236-1246.
6.            Di Silvio L., Gurav N. Osteoblasts // Human Cell Culture / Eds. M.R.Koller, B.O.Palsson, J.R.W.Masters. London, 2001. P. 221‑241.
7.            Dillon J.P., Waring-Green V.J., Taylor A.M., Wilson P.J., Birch M., Gartland A., Gallagher J.A. Primary human osteoblast cultures // Methods Mol. Biol. 2012. Vol. 816. P. 3-18.
8.            Hadjicharalambous C., Buyakov A., Buyakova S., Kulkov S., Chatzinikolaidou M. Porous alumina, zirconia and alumina/zirconia for bone repair: fabrication, mechanical and in vitro biological response // Biomed. Mater. 2015.Vol. 10, N 2. ID 025012. doi: 10.1088/1748-6041/10/2/025012.
9.            Hadjicharalambous C., Mygdali E., Prymak O., Buyakov A., Kulkov S., Chatzinikolaidou M. Proliferation and osteogenic response of MC3T3-E1 pre-osteoblastic cells on porous zirco­nia ceramics stabilized with magnesia or yttria // J. Biomed. Mater. Res. A. 2015. Vol. 103, N 11. P. 3612-3624.  257
10.          Huang L., Cai X., Li H., Xie Q., Zhang M., Yang C. The effects of static pressure on chondrogenic and osteogenic differentiation in condylar chondrocytes from temporomandibular joint // Arch. Oral Biol .2015.Vol. 60, N 4. P. 622-630.
11.          Iandolo D., Ravichandran A., Liu X., Wen F., Chan J.K., Berggren M., Teoh S.H., Simon D.T. Development and characterization of organic electronic scaffolds for bone tissue engineering // Adv. Healthc. Mater. 2016. Vol. 5, N 12. P. 1505-1512.
12.          Khang G. Intelligent scaffolds for tissue engineering and regenerative medicine. Boca Raton, 2012. P. 589-606.
13.          Maeda A., Bandow K., Kusuyama J., Kakimoto K., Ohnishi T., Miyawaki S., Matsuguchi T. Induction of CXCL2 and CCL2 by pressure force requires IL-1
b-MyD88 axis in osteoblasts // Bone. 2015. Vol. 74. P. 76-82.
14.          Pati F., Song T.H., Rijal G., Jang J., Kim S.W., Cho D.W. Ornamenting 3D printed scaffolds with cell-laid extracellular matrix for bone tissue regeneration // Biomaterials. 2015. Vol. 37. P. 230-241.
15.          Selmeczi D., Mosler S., Hagedorn P.H., Larsen N.B., Flyvbjerg H. Cell motility as persistent random motion: theories from experiments // Biophys. J. 2005.Vol. 89, N 2. P. 912-931.
16.          Smith B.D, Grande D.A. The current state of scaffolds for musculoskeletal regenerative applications // Nat. Rev. Rheumatol. 2015. Vol. 11, N 4. P. 213-222.
17.          Tsekov R., Lensen M. Brownian motion and temperament of living cells // Chin. Phys. Lett. 2013. Vol. 30, N 7. ID 070501.
18.          Tsiridis E., Gurav N., Bailey G., Sambrook R., Di Silvio L. A novel ex vivo culture system for studying bone repair // Injury. 2006.Vol. 37, Suppl. 3. P. S10-S17.
19.          Wang T., Yang X., Qi X., Jiang C. Osteoinduction and proliferation of bone-marrow stromal cells in three-dimensional poly(
e-caprolactone)/ hydroxyapatite/collagen scaffolds // J. Transl Med. 2015. Vol. 13. P. 152. doi: 10.1186/s12967-015-0499-8.
20.          Yin B., Ma P., Chen J., Wang H., Wu G., Li B., Li Q., Huang Z., Qiu G., Wu Z. Hybrid macro-porous titanium ornamented by degradable 3D Gel/nHA micro-scaffolds for bone tissue regeneration // Int. J. Mol. Sci. 2016.
Vol. 17, N 4. P. 575. doi: 10.3390/ijms17040575.

Моноциты с онкогенной мутацией JAK2 V617F как основа для изучения патогенетических механизмов миелофиброза
А.А.Силютина, И.И.Гин, С.С.Приходько, С.В.Жук, П.А.Бутылин, А.Ю.Зарицкий – 258
НИЛ онкогематологии Института гематологии ФГБУ Национального медицинского исследовательского центра им. В.А.Алмазова, Санкт-Петербург, РФ
          Исследована созданная ранее стабильная клеточная линия моноцитарного происхождения, несущая мутацию JAK2 V617F. Анализ экспрессии про- и антифибротических факторов показал изменения продукции матрикс­ных металлопротеиназ и их ингибиторов, ростовых факторов, галектина-3 и пентраксина-3 в клетках с мутацией JAK2 по сравнению с контрольными немодифицированными клетками.
Ключевые слова: первичный миелофиброз, миелопролиферативные неоплазии, JAK2 V617F, макрофаги
Адрес для корреспонденции: silyutina.anna89@gmail.com. Силютина А.А.
Литература
1.            Силютина А.А., Гин И.И., Матюхина Н.М., Балаян Е.Н., Бутылин П.А. Модели миелофиброза (обзор литературы и собственные данные) // Клин. онкогематол.
2017. Т. 10, № 1. С. 75-84.
2.            Abdul Hameed M.D., Tawa G.J., Kumar K., Ippolito D.L., Lewis J.A., Stallings J.D., Wallqvist A. Systems level analysis and identification of pathways and networks associated with liver fibrosis // PLoS One. 2014. Vol. 9, N 11. P. e112193. doi: 10.1371/journal.pone.0112193.
3.            Auffray C., Sieweke M.H., Geissmann F. Blood monocytes: development, heterogeneity, and relationship with dendritic cells // Annu. Rev. Immunol. 2009. Vol. 27. P. 669-692.
4.            Cabrera S., Gaxiola M., Arreola J. L., Ramírez R., Jara P., D'Armiento J., Richards T., Selman M., Pardo A. Overexpression of MMP9 inmacrophages attenuates pulmonary fibrosis induced by bleomycin // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2007. Vol. 39, N 12. P. 2324-2338.
5.            Endo H., Niioka M., Sugioka Y., Itoh J., Kameyama K., Okazaki I., Ala-Aho R.,Kähäri V. M., Watanabe T. Matrix metalloproteinase-13 promotesrecovery from experimental liver cirrhosis in rats // Pathobiology. 2011. Vol. 78, N 5. P. 239-252.
6.            Introna M., Alles V.V., Castellano M., Picardi G., De Gioia L., Bottazzai B., Peri G., Breviario F., Salmona M., De Gregorio L., Dragani T.A., Srinivasan N., Blundell T.L., Hamilton T.A., Mantovani A. Cloning of mouse ptx3, a new member of the pentraxin gene family expressed at extrahepatic sites // Blood. 1996. Vol. 87, N 5. P. 1862-1872.
7.            Jensen M.K., Holten-Andersen M.N., Riisbro R., de Nully Brown P., Larsen M.B., Kjeldsen L., Heickendorff L., Brünner N., Hasselbalch H.C. Elevated plasma levels of TIMP-1 correlate with plasma suPAR/uPA in patients with chronic myeloproliferative disorders // Eur. J. Haematol. 2003. Vol. 71, N 5. P. 377-384.
8.            Kantarjian H.M., Silver R.T., Komrokji R.S., Mesa R.A., Tacke R., Harrison C.N. Ruxolitinib for myelofibrosise — an update of its clinical effects // Clin. Lymphoma Myeloma Leuk. 2013. Vol. 13, N 6. P. 638-645.
9.            Klampfl T., Gisslinger H., Harutyunyan A.S., Nivarthi H., Rumi E., Milosevic J.D., Them N.C., Berg T., Gisslinger B., Pietra D., Chen D., Vladimer G.I., Bagienski K., Milanesi C., Casetti I.C., Sant'Antonio E., Ferretti V., Elena C., Schischlik F., Cleary C., Six M., Schalling M., Schönegger A., Bock C., Malcovati L., Pascutto C., Superti-Furga G., Cazzola M., Kralovics R. Somatic mutations of calreticulin in myelo­proliferative neoplasms // N. Engl. J. Med. 2013. Vol. 369, N 25. P. 2379-2390.
10.          Koopmans S.M., Bot F.J., Schouten H.C., Janssen J., van Marion A.M. The involvement of Galectins in the modulation of the JAK/STAT pathway in myeloproliferative neoplasia // Am. J. Blood Res. 2012. Vol 2, N 2. P. 119-127.
11.          Le Bousse-Kerdilès M.C. Primary myelofibrosis and the “bad seeds in bad soil” concept // Fibrogenesis Tissue Repair. 2012. Vol. 5, Suppl. 1. P. S20.
12.          Lee C.G., Homer R.J., Zhu Z., Lanone S., Wang X., Koteliansky V., Shipley J.M., Gotwals P., Noble P., Chen Q., Senior R.M., Elias J.A. Interleukin-13 induces tissue fibrosis by selectively stimulating and activating transforming growth factor beta(1) // J. Exp. Med. 2001. Vol. 194, N 6. P. 809-821.
13.          Murate T., Yamashita K., Isogai C., Suzuki H., Ichihara M., Hatano S., Nakahara Y., Kinoshita T., Nagasaka T., Yoshida S., Komatsu N., Miura Y., Hotta T., Fujimoto N., Saito H., Hayakawa T. The production of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in megakaryopoiesis: possible role of platelet- and megakaryocyte-derived TIMPs in bone marrow fibrosis // Br. J. Haematol. 1997. Vol. 99, N 1. P. 181-189.
14.          Oliver G.W., Stettler-Stevenson W.G., Kleiner D.E. Zymography, casein zymography and reverse zymography: activity assays for proteases and their inhibitors // Handbook of proteolytic enzymes. San Diego, 1999. P. 61-76.

15.          Pilling D., Cox N., Vakil V., Verbeek J.S., Gomer R.H. The long pentraxin PTX3 promotes fibrocyte differentiation // PLoS One. 2015. V. 10. N 3. P. e0119709. doi: 10.1371/journal. pone.0119709.
16.          Schneider R.K., Ziegler S., Leisten I., Ferreira M.S., Schumacher A., Rath B., Fahrenkamp D., Müller-Newen G., Crysandt M., Wilop S., Jost E., Koschmieder S., Knüchel R., Brümmendorf T.H., Ziegler P. Activated fibronectin-secretory phenotype of mesenchymal stromal cells in pre-fibrotic myeloproliferative neoplasms // J. Hematol. Oncol. 2014. Vol. 7. P. 92. doi: 10.1186/s13045-014-0092-2.
17.          Schneider R.K., Mullally A., Dugourd A., Peisker F., Hoogenboezem R., Van Strien P.M.H., Bindels E.M., Heckl D., Büsche G., Fleck D., Müller-Newen G., Wongboonsin J., Ventura Ferreira M., Puelles V.G., Saez-Rodriguez J., Ebert B.L., Humphreys B.D., Kramann R. Gli1+ mesenchymal stro­mal cells are a key driver of bone marrow fibrosis and an important cellular therapeutic target // Cell Stem Cell. 2017. Vol. 20, N 6. P. 785-800.e8.
18.          Tefferi A., Vainchenker W. Myeloproliferative neoplasms: molecular pathophysiology, essential clinical understanding, and treatment strategies // J. Clin. Oncol. 2011. Vol. 29, N 5. P. 573-582.
19.          Uchinami H., Seki E., Brenner D.A., D'Armiento J. Loss of MMP 13 attenuates murine hepatic injury and fibrosis during cholestasis // Hepatology. 2006. Vol. 44, N 2. P. 420-429.
20.          Vadikolia C.M., Tsatalas C., Anagnostopoulos K., Trypsianis G., Pantelidou D., Bazdiara I., Anastasiadis A., Spanoudakis E., Kotsianidis I., Margaritis D., Kortsaris A., Bourikas G. Proteolytic matrix metallopeptidases and inhibitors in BCR-ABL1-negative myeloproliferative neoplasms: correlation with JAK2 V617F mutation status // Acta Haematol. 2011. Vol. 126, N 1. P. 54-62.
21.          Verstovsek S., Manshouri T., Pilling D., Bueso-Ramos C.E., Newberry K.J., Prijic S., Knez L., Bozinovic K., Harris D.M., Spaeth E.L., Post S.M., Multani A.S., Rampal R.K., Ahn J., Levine R.L., Creighton C.J., Kantarjian H.M., Estrov Z. Role of neoplastic monocyte-derived fibrocytes in primary myelofibrosis // J. Exp. Med. 2016. Vol. 21, N 9. P. 1723-1740.
22.          Wagner-Ballon O., Chagraoui H., Prina E., Tulliez M., Milon G., Raslova H., Villeval J.L., Vainchenker W., Giraudier S. Monocyte/macrophage dysfunctions do not impair the promotion of myelofibrosis by high levels of thrombopoietin // J. Immunol. 2006. Vol. 176, N 11. P. 6425-6433.
23.          Wang J.C., Novetsky A., Chen C., Novetsky A.D. Plasma matrix metalloproteinase and tissue inhibitor of metalloproteinase in patients with agnogenic myeloid metaplasia or idiopathic primary myelofibrosis // Br. J. Haematol. 2002. Vol. 119, N 3. P. 709-712.
24.          Wang X., Zhou Y., Tan R., Xiong M., He W., Fang L., Wen P., Jiang L, Yang J. Mice lacking the matrix metalloproteinase-9 gene reduce renal interstitial fibrosis in obstructive nephropathy // Am. J. Physiol. 2010. Vol. 299, N 5. P. F973-F982.
25.          Wynn T.A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis // J. Pathol.
2008. Vol. 214, N 2. P. 199-210.

Выживаемость мезенхимных стволовых клеток при различных методах небулизации
А.В.Аверьянов, А.Г.Коноплянников*, Н.С.Антонов, Г.Л.Осипова, О.С.Васильева, Г.М.Сахарова, А.Р.Татарский, В.И.Кобылянский – 265
ФГБУ Научно-исследовательский институт пульмонологии ФМБА России, Москва; *ФГБУ НМИРЦ Минздрава России, Обнинск
          Проведено сравнительное исследование выживаемости мезенхимных стволовых клеток костного мозга при рас­пылении их суспензии через компрессорный, ультразвуковой и сетчатый небулайзеры в течение 10 мин. Наи­большая степень жизнеспособности стромальных клеток сохранялась после прохождения через компрессорный небулайзер (72%), существенно меньшая выживаемость наблюдалась при ультразвуковой небулизации (20%), при меш-небулизации живых клеток не выявлялось. Компрессорный небулайзер является наиболее предпочтительной формой получения аэрозоля из клеточного материала для его доставки в нижние дыхательные пути.
Ключевые слова: мезенхимные стволовые клетки, выживаемость, небулайзер, болезни легких
Адрес для корреспонденции: averyanovav@mail.ru. Аверьянов А.В.
Литература
1.            Alhasan L., Qi A., Rezk A.R., Yeo L.Y., Chan P.P. Assessment of the potential of a high frequency acoustomicrofluidic nebulisation platform for inhaled stem cell therapy // Integr. Biol. (Camb). 2016. Vol. 8, N 1. P. 12-20.
2.            Awad H.A., Butler D.L., Boivin G.P., Smith F.N., Malaviya P., Huibregtse B., Caplan A.I. Autologous mesenchymal stem cell-mediated repair of tendon // Tissue Eng. 1999. Vol. 5, N 3. P. 267-277.
3.            Glassberg M.K., Minkiewicz J., Toonkel R.L., Simonet E.S., Rubio G.A., DiFede D., Shafazand S., Khan A., Pujol M.V., LaRussa V.F., Lancaster L.H., Rosen G.D., Fishman J., Mageto Y.N., Mendizabal A., Hare J.M. Allogeneic human mesenchymal stem cells in patients with idiopathic pulmonary fibrosis via intravenous delivery (AETHER): a phase I safety clinical trial // Chest. 2017. Vol. 151, N 5. P. 971-981.
4.            Ingenito E.P., Tsai L., Murthy S., Tyagi S., Mazan M., Hoffman A. Autologous lung-derived mesenchymal stem cell transplantation in experimental emphysema // Cell Transplant. 2012. Vol. 21, N 1. P. 175-189.
5.            Kim S.Y., Burgess J.K., Wang Y., Kable E.P., Weiss D.J., Chan H.K., Chrzanowski W. Atomized human amniotic mesenchymal stromal cells for direct delivery to the airway for treatment of lung injury // J. Aerosol Med. Pulm. Drug Deliv. 2016. Vol. 29, N 6. P. 514-524.
6.            Martin A.R., Finlay W.H. Nebulizers for drug delivery to the lungs // Expert Opin. Drug Deliv. 2015.Vol. 12, N 6. P. 889-900.
7.            Petrella F., Rizzo S., Borri A., Casiraghi M., Spaggiari L. Current perspectives in mesenchymal stromal cell therapies for airway tissue defects // Stem Cells Int. 2015. Vol. 2015. ID 746392. doi: 10.1155/2015/746392.              267
8.            Sutton M.T., Fletcher D., Ghosh S.K., Weinberg A., van Heeckeren R., Kaur S., Sadeghi Z., Hijaz A., Reese J., Lazarus H.M., Lennon D.P., Caplan A.I., Bonfield T.L. Antimicrobial properties of mesenchymal stem cells: therapeutic potential for cystic fibrosis infection, and treatment // Stem Cells Int. 2016. Vol. 2016. ID 5303048. doi: 10.1155/2016/5303048.
9.            Tibboel J., Keijzer R., Reiss I., de Jongste J.C., Post M. Intravenous and intratracheal mesenchymal stromal cell injection in a mouse model of pulmonary emphysema // COPD. 2014. Vol. 11, N 3. P. 310-318.
10.          Wecht S., Rojas M. Mesenchymal stem cells in the treatment of chronic lung disease // Respirology. 2016. Vol. 21, N 8. P. 1366-1375.
11.          Yeo L.Y., Friend J.R., McIntosh M.P., Meeusen E.N., Morton D.A. Ultrasonic nebulization platforms for pulmonary drug delivery // Expert Opin. Drug Deliv. 2010. Vol. 7, N 6. P. 663-679.
12.          Zhang X., Zhang L., Xu W., Qian H., Ye S., Zhu W., Cao H., Yan Y., Li W., Wang M., Wang W., Zhang R. Experimental therapy for lung cancer: umbilical cord-derived mesenchymal stem cell-mediated interleukin-24 delivery // Curr.
Cancer Drug Targets. 2013. Vol. 13, N 1. P. 92-102.

Особенности правил надлежащей производственной практики (GMP) для биомедицинских клеточных продуктов
М.А.Тулина, Н.В.Пятигорская – 268
Институт фармации и трансляционной медицины ФГАОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России, Москва
          В работе описываются особенности Правил надлежащей производственной практики (GMP) для биомедицинских клеточных продуктов, которые заключаются в необходимости соблюдения высоких стандартов асептического производства на протяжении всего производственного цикла, в строгих требованиях к донорам и процедуре получения биоматериала; в обеспечении прослеживаемости клеточных продуктов; в определении процедур процессинга, на основании которых делается заключение об отнесении клеточных продуктов к минимально манипулированным; в непрерывной поддержке качества и автоматизации процесса контроля на всех стадиях производства, что обеспечит возможность выпуска готовой продукции одновременно с завершением технологических операций.
Ключевые слова: клеточные технологии, надлежащая производственная практика, биомедицинские клеточные продукты, система качества производства
Адрес для корреспонденции: mari_bel_90@mail.ru. Тулина М.А.
Литература
1.            ГОСТ P ИСО 14644-1-2002 Чистые помещения и связанные с ними контролируемые среды. Часть 1. Классификация чистоты воздуха. М., 2003.
2.            ГОСТ Р ИСО 13408-6-2009 Асептическое производство медицинской продукции. Часть 6. Изолирующие системы. М., 2009.
3.            ГОСТ Р ИСО 9001-2011. Межгосударственный стандарт системы менеджмента качества. Требования. М., 2012.
4.            О биомедицинских клеточных продуктах: Федеральный закон от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ // Российская газета. 2016. № 139. C. 18.
5.            ОСТ 64-02-003-2002. Продукция медицинской промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения. М., 2002.
6.            Пятигорская Н.В., Тулина М.А., Аладышева Ж.И., Береговых В.В. Международные подходы к регулированию препаратов клеточной терапии // Вестн. РАМН
. 2013. № 8. С. 4-8.
7.            Carmen J., Brindley D. A., Davie N. L., Smith D. Cell therapy manufacturing: identifying and meeting demand // Stem cells in regenerative medicine: science, regulation and business strategies / Eds. A.A.Vertes, N.Qureshi, A.I.Caplan, L.E.Babiss. Chichester, 2015. P. 49-68.
8.            Commission Directive 2003/94/EC of 8 October 2003 laying down the principles and guidelines of GMP in respect of medicinal products for human use and investigational me­dicinal products for human use // Official Journal of the European Union. 2003. L262. P. 22-26.
9.            Commission Directive 2004/23/EC of the European Parliament and of the Council of 31 March 2004 on setting standards of quality and safety for the donation, procurement, testing, processing, preservation, storage and distribution of human tissues and cells // Official Journal of the European Union. 2005. L102. P. 48-58.
10.          Guidance for Industry: Current Good Tissue Practice (CGTP) and Additional Requirements for Manufacturers of Human Cells, Tissues, and Cellular and Tissue-Based Products (HCT/Ps). FDA. 2011. P. 67.
11.          Guidance for Industry: Eligibility Determination for Donors of Human Cells, Tissues, and Cellular and Tissue-Based Products (HCT/Ps). FDA. 2007. P. 70.
12.          Guidance for Industry: Investigating and Reporting Adverse Reactions Related to Human Cells, Tissues, and Cellular and Tissue-Based Products (HCT/Ps) Regulated Solely under Section 361 of the Public Health Service Act and 21 CFR Part 1271. FDA. 2015. P. 20.
13.          Guideline on human cell-based medicinal products. EMEA. 2008. P. 24.
14.          Guideline on risk management systems for medicinal products for human use. EMEA. 2005. P. 32.
15.          G
ünther Ch. Huss R., Hauser A. Advances in Pharmaceutical Cell Therapy: Principles of Cell-Based Biopharmaceuticals. Singapore, 2016.
16.          ISBT 128 Standard. Labeling of Cellular Therapy Products. ICCBBA, 2013. ST-004. P. 39.
17.          Kellathur S.N., Lou H.X. Cell and tissue therapy regulation: worldwide status and harmonization // Biologicals. 2012. Vol. 40, N 3. P. 222-224.
18.          Kolkundkar U., Gottipamula S., Majumdar A. Cell therapy manufacturing and quality control: current process and regulatory challenges // J. Stem Cell Res. Ther. 2014. Vol. 4, N 9. P. 75-82.