info@iramn.ru
com@iramn.ru
bbm.ktbm@gmail.com



КЛЕТОЧНЫЕ  ТЕХНОЛОГИИ  В  БИОЛОГИИ  И  МЕДИЦИНЕ

2017 г., № 3

 СОДЕРЖАНИЕ

Модифицирующее воздействие аутотрансфузии мезенхимных стромальных клеток на продукцию активных форм кислорода и цитокинов мононуклеарами крови пациентов с хронической сердечной недостаточностью
В.Н.Петров, Е.В.Агаева, О.Е.Поповкина, А.Г.Коноплянников, М.А.Каплан, Л.А.Лепехина, Е.В.Саяпина, И.В.Семенкова139
МРНЦ им. А.Ф.Цыба — филиал ФГБУ НМИРЦ Минздрава РФ, Обнинск
Исследовано in vivo модифицирующее влияние аутотрансфузии мезенхимных стромальных клеток костного мозга человека на уровень продукции АФК, цитокинов (TNF-a,TNF-b, IL-1a, IL-10, IFN-g, GM-CSF) и PGE2 мононуклеарами крови пациентов (N=21) с хронической сердечной недостаточностью. Исследованные показатели оценивали до (контроль), сразу и на 14-е сутки после внутривенного введения стромальных клеток в дозах 100-200´106. Установлено, что сразу по завершении аутотрансфузии стромальных клеток было выявлено достоверное повышение in vitro зимозаниндуцируемой хемилюминесценции мононуклеаров крови у 10 пациентов. В поздние сроки (14-е сутки) после аутотрансфузии у половины пациентов выявлено угнетение хемилюминесцентной активности мононуклеаров крови. Обсуждаются возможные механизмы участия трансплантируемых аутологичных костномозговых мезенхимных стромальных клеток в репрограммировании мононуклеарных фагоцитов крови с провоспалительного на противовоспалительный фенотип в условиях их in vivo взаимодействия, частным проявлением которого является переход фазы активизации в ингибирование АФК-продуцирующей активности макрофагов, а также достоверное снижение уровня in vitro ЛПС-индуцированной продукции TNF-a, GM-CSF мононуклеарами крови на фоне существенного повышения концентрации TNF‑b, IL-10, IL-1a.
Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, мононуклеары, активные радикалы кислорода, хемилюминесценция, цитокины
Адрес для корреспонденции: ekagaeva@yandex.ru. Агаева Е.В.
Литература
1. Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б. Взаимодействие мультипотентных мезенхимальных стромальных и иммунных клеток: двунаправленные эффекты // Рос. физиол. журн. 2012. Т. 98, № 12. С. 1441-1459.
2. Маянская И.В., Гоганова А.Ю., Толкачева Н.И., Ашкинази В.И., Маянский А.Н. Иммуносупрессивное действие мезенхимальных стволовых (стромальных) клеток // Иммунология. 2013. Т. 34, № 2. С. 122-128.
3. Петров В.Н., Коноплянников А.Г., Саяпина Е.В., Коноплянникова О.А., Лепехина Л.А., Кальсина С.Ш., Семенкова И.В., Агаева Е.В. In vitro модифицирующее воздействие мезенхимальных стволовых клеток на продукцию макрофагами активных форм кислорода в аллогенной и ксеногенной системах совместных культур // Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные исследования и перспективы клинического применения. // Под ред. В.А.Ткачука. М., 2009. С. 429-448.
4. Цыб А.Ф., А Г.К., Каплан М.А., Поповкина О.Е., Лепехина Л.А., Кальсина С.Ш., Семенкова И., Агаева Е., Даниленко А.А. Использование системной трансплантации “кардиомиобластов”, полученных из мезенхимальных стволовых клеток аутогенного костного мозга, при комплексной терапии больных с хронической сердечной недостаточностью // Гены и клетки. 2009. Т. 4, № 1. С. 78-84.
5. Цыб А.Ф., Коноплянников А.Г., Колесникова А.И., Павлов В.В. Получение и использование в медицине клеточных культур из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека // Вестн. РАМН. 2004. № 9. С. 71-76.
6. Цыб А.Ф., Петров В.Н., Коноплянников A.Г., Саяпина Е.В., Лепехина Л.A., Кальсина С.Ш., Семенкова И.В., Агаева Е.В. Ингибирующее действие in vitro мезенхимальных стволовых клеток на зимозаниндуцируемую продукцию активных форм кислорода макрофагами // Клет. технол. в биол. и мед. 2008. № 3. С. 171-177.
7. Шварц Я.Ш., Свистельник А.В. Функциональные фенотипы макрофагов и концепция М1-М2-поляризации. Ч
. I. Провоспалительный фенотип // Биохимия. 2012. Т. 77, № 3. С. 312-329.
8. Astori G., Amati E., Bambi F., Bernardi M., Chieregato K., Schöfer R., Sella S., Rodeghiero F. Platelet lysate as a substitute for animal serum for the ex-vivo expansion of mesenchymal stem/stromal cells: present and future // Stem Cell Res Ther. 2016. Vol. 7, N 1. P. 93.
9. Belema-Bedada F., Uchida S., Martire A., Kostin S., Braun T. Efficient homing of multipotent adult mesenchymal stem cells depends on FROUNT-mediated clustering of CCR2 // Cell Stem Cell. 2008. Vol. 2, N 6. P. 566-575.
10. Cassatella M.A., Mosna F., Micheletti A., Lisi V., Tamassia N., Cont C., Calzetti F., Pelletier M., Pizzolo G., Krampera M. Toll-like receptor-3-activated human mesenchymal stromal cells significantly prolong the survival and function of neutrophils // Stem Cells. 2011. Vol. 29, N 6. P. 1001-1011.
11. de Oliveira Bravo M., Carvalho J.L., Saldanha-Araujo F. Adenosine production: a common path for mesenchymal stem-cell and regulatory T-cell-mediated immunosuppression // Purinergic Signal. 2016. Vol. 12, N 4. P. 595-609.
12. Fontaine M.J., Shih H., Schäfer R., Pittenger M.F. Unraveling the mesenchymal stromal cells' paracrine immunomodulatory effects // Transfus. Med. Rev. 2016. Vol. 30, N 1. P. 37-43.
13. Glenn J.D., Whartenby K.A. Mesenchymal stem cells: Emerging mechanisms of immunomodulation and therapy // World J. Stem Cells. 2014. Vol. 6, N 5. P. 526-539.
14. Gómez-Aristizábal A., Kim K.P., Viswanathan S. A Systematic study of the effect of different molecular weights of hyaluronic acid on mesenchymal stromal cell-mediated immunomodulation // PLoS One. 2016. Vol. 11, N 1. P. e0147868. doi: 10.1371/journal.pone.0147868.
15. Goodridge H.S., Simmons R.M., Underhill D.M. Dectin-1 stimulation by Candida albicans yeast or zymosan triggers NFAT activation in macrophages and dendritic cells // J. Immunol. 2007. Vol. 178, N 5. P. 3107-3115.
16. Hare J.M., Fishman J.E., Gerstenblith G., DiFede Velazquez D.L., Zambrano J.P., Suncion V.Y., Tracy M., Ghersin E., Johnston P.V., Brinker J.A., Breton E., Davis-Sproul J., Schulman I.H., Byrnes J., Mendizabal A.M., Lowery M.H., Rouy D., Altman P., Wong Po Foo C., Ruiz P., Amador A., Da Silva J., McNiece I.K., Heldman A.W., George R., Lardo A. Comparison of allogeneic vs autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells delivered by transendocardial injection in patients with ischemic cardiomyopathy: the POSEIDON randomized trial // JAMA. 2012. Vol. 308, N 22. P. 2369-2379.
17. Hoogduijn M.J., Crop M.J., Peeters A.M., Korevaar S.S., Eijken M., Drabbels J.J., Roelen D.L., Maat A.P., Balk A.H., Weimar W., Baan C.C. Donor-derived mesenchymal stem cells remain present and functional in transplanted human heart // Am. J. Transplant. 2009. Vol. 9, N 1. P. 222-230.
18. Jiang C.Y., Gui C., He A.N., Hu X.Y., Chen J., Jiang Y., Wang J.A. Optimal time for mesenchymal stem cell transplantation in rats with myocardial infarction // J. Zhejiang Univ Sci B. 2008. Vol. 9, N 8. P. 630-637.
19. Kelly E.K., Wang L., Ivashkiv L.B. Calcium-activated pathways and oxidative burst mediate zymosan-induced signaling and IL-10 production in human macrophages // J. Immunol. 2010. Vol. 184, N 10. P. 5545-5552.
20. Le Blanc K., Davies L.C. Mesenchymal stromal cells and the innate immune response // Immunol. Lett. 2015. Vol. 168, N 2. P. 140-146.
21. Lee R.H., Pulin A.A., Seo M.J., Kota D.J., Ylostalo J., Larson B.L., Semprun-Prieto L., Delafontaine P., Prockop D.J. Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6 // Cell Stem Cell. 2009. Vol. 5, N 1. P. 54-63.
22. Leibacher J., Henschler R. Biodistribution, migration and homing of systemically applied mesenchymal stem/stromal cells // Stem Cell Res. Ther. 2016. Vol. 7. P. 7. doi: 10.1186/s13287-015-0271-2.
23. Lin Y.C., Leu S., Sun C.K., Yen C.H., Kao Y.H., Chang L.T., Tsai T.H., Chua S., Fu M., Ko S.F., Wu C.J., Lee F.Y., Yip H.K. Early combined treatment with sildenafil and adipose-derived mesenchymal stem cells preserves heart function in rat dilated cardiomyopathy // J. Transl. Med. 2010. Vol. 8. P. 88. doi: 10.1186/1479-5876-8-88.
24. Molina E.R., Smith B.T., Shah S.R., Shin H., Mikos A.G. Immunomodulatory properties of stem cells and bioactive molecules for tissue engineering // J. Contol. Release. 2015. Vol. 219. P. 107-118.
25. Raffaghello L., Bianchi G., Bertolotto M., Montecucco F., Busca A., Dallegri F., Ottonello L., Pistoia V. Human mesenchymal stem cells inhibit neutrophil apoptosis: a model for neutrophil preservation in the bone marrow niche // Stem Cells. 2008. Vol. 26, N 1. P. 151-162.
26. Selleri S., Bifsha P., Civini S., Pacelli C., Dieng M.M., Lemieux W., Jin P., Bazin R., Patey N., Marincola F.M., Moldovan F., Zaouter C., Trudeau L.E., Benabdhalla B., Louis I., Beauséjour C., Stroncek D., Le Deist F., Haddad E. Human mesenchymal stromal cell-secreted lactate induces M2-macrophage differentiation by metabolic reprogramming // Oncotarget. 2016. Vol. 7, N 21. P. 30 193-30 210.
27. Sharma R.R., Pollock K., Hubel A., McKenna D. Mesenchymal stem or stromal cells: a review of clinical applications and manufacturing practices // Transfusion. 2014. Vol. 54, N 5. P. 1418-1437.
28. van den Akker F., de Jager S.C., Sluijter J.P. Mesenchymal stem cell therapy for cardiac inflammation: immuno­modulatory properties and the influence of toll-like receptors // Mediators Inflamm. 2013. Vol. 2013. ID 181020. doi: 10.1155/2013/181020.
29. Zheng G., Ge M., Qiu G., Shu Q., Xu J. Mesenchymal stromal cells affect disease outcomes via macrophage polarization // Stem Cells Int. 2015. Vol. 2015. ID 989473. doi: 10.1155/2015/989473.
30. Zimmermann J.A., Hettiaratchi M.H., McDevitt T.C. Enhanced immunosuppression of T cells by sustained presentation of bioactive interferon-g within three-dimensional mesenchymal stem cell constructs // Stem Cells Transl. Med
. 2017. Vol. 6, N 1. P. 223-237.

Морфофункциональные свойства тромбоцитов человека в условиях контакта с наночастицами серебра
М.С.Макаров, Н.В.Боровкова, М.В.Сторожева 148
ГБУЗ Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В.Склифосовского ДЗ г. Москвы, РФ
Исследованы структура и функции тромбоцитов человека в присутствии наночастиц серебра. При концентрации наносеребра 0.05-5 мкМ происходит дозозависимое подавление адгезивной активности тромбоцитов без нарушения их структурной целостности, при этом в процессе адгезии часть гранул тромбоцитов не экзоцитируется. При концентрации наночастиц 15-100 мкМ происходит спонтанная активация тромбоцитов. Добавление 1-5 мкМ наносеребра к уже начавшим адгезию тромбоцитам блокирует массовую дегрануляцию адгезировавших клеток, однако не препятствует образованию у них ламеллоподий. Максимальная сохранность гранул в тромбоцитах наблюдалась при 2.5-5 мкМ наносеребра и составляла 50% при предварительной инкубации тромбоцитов и 75-77% при стабилизации наносеребром адгезирующих тромбоцитов.
Ключевые слова: тромбоциты, гранулы, адгезия, ламелла, стабилизация
Адрес для корреспонденции: mesimmc@yandex.ru. Макаров М.С.
Литература
1. Гмошинский И.В., Смирнова В.В., Хотимченко С.А. Современное состояние проблемы оценки безопасности наноматериалов // Рос. нанотехнол. 2010. Т. 5, № 9-10. С. 6-10.
2. Крутяков Ю.А., Кудринский А.А., Оленин А.Ю., Лисичкин Г.В. Синтез и свойства наночастиц серебра: достижения и перспективы // Успехи химии. 2008. Т. 77, № 3. С. 242-269.
3. Макаров М.С. Неканонические способы активации тромбоцитов человека // Медицинский алфавит. 2015. Т. 3, № 11. С. 30-35.
4. Макаров М.С., Хватов В.Б., Боровкова Н.В. Стабилизации тромбоцитов человека на адгезивном субстрате с помощью тикагрелора // Мол. мед. 2015.
№ 6. С. 57-60.
5. Arora S., Jain J., Rajwade J.M., Paknikar K.M. Cellular responses induced by silver nanoparticles: in vitro studies // Toxicol. Lett. 2008. Vol. 179, N 2. P. 93-100.
6. Bandyopadhyay D., Baruah H., Gupta B., Sharma S. Silver nanoparticles prevent platelet adhesion on immobilized fibrinogen // Indian J. Clin. Biochem. 2012. Vol. 27, N 2. P. 164-170.
7. de Mel A., Chaloupka K., Malam Y., Darbyshire A., Cousins B., Seifalian A.M. A silver nanocomposite biomaterial for blood-contacting implants // J. Biomed. Mater. Res. A. 2012. Vol. 100, N 9. P. 2348-2357.
8. Fu J., Ji J., Fan D., Shen J. Construction of antibacterial multilayer films containing nanosilver vialayer-by-layer assembly of heparin and chitosan-silver ions complex // J. Biomed. Mater. Res A. 2006. Vol. 79, N 3.
Р. 665-674.
9. Huang H., Lai W., Cui M., Liang L., Lin Y., Fang Q., Liu Y., Xie L. An evaluation of blood compatibility of silver nanoparticles // Sci. Rep. 2016. Vol. 6. ID 25518. doi: 10.1038/srep25518.
10. Peters C.G., Michelson A.D., Flaumenhaft R. Granule exocytosis is required for platelet spreading: differential sorting of
a-granules expressing VAMP-7 // Blood. 2012. Vol. 120, N 1. P. 199-206.
11. Shrivastava S., Bera T., Singh S.K., Singh G., Ramachandrarao P., Dash D. Characterization of antiplatelet properties of silver nanoparticles // ACS Nano. 2009. Vol. 3, N 6. P. 1357-1364.
12. Shrivastava S., Singh S.K., Mukhopadhyay A., Sinha A.S., Mandal R.K., Dash D. Negative regulation of fibrin polymerization and clot formation by nanoparticles of silver // Colloids Surf. B Biointerfaces. 2011. Vol. 82, N 1. P. 241-246.
13. Sudheesh Kumar P.T., Raj N.M., Praveen G., Chennazhi K.P., Nair S.V., Jayakumar R. In vitro and In vivo evaluation of microporous chitosan hydrogel/nanofibrin composite bandage for skin tissue regeneration // Tissue Eng. Part A. 2013. Vol. 19, N 3-4. P. 380-392.
14. Walters B.D., Stegemann J.P. Strategies for directing the structure and function of 3D collagen biomaterials across length scales // Acta Biomater.
2014. Vol. 10, N 4. Р.1488‑1501.

Влияние нативного и модифицированного аполипопротеина А-I на биосинтез ДНК в культурах разных типов клеток
И.Ф.Усынин, А.Н.Дударев, С.М.Мирошниченко, Т.А.Ткаченко, А.Ю.Городецкая – 155
Лаборатория механизмов межклеточных взаимодействий ФГБНУ НИИ биохимии, Новосибирск, РФ
Культивирование клеток костного мозга в бессывороточной среде RPMI-1640 в течение 24 ч сопровождалось снижением скорости включения [3Н]-тимидина в ДНК. Добавление в культуральную среду нативного аполипопротеина А-I или плазменных липопротеинов низкой и высокой плотности приводило к повышению данного показателя. В отличие от нативного аполипопротеина А-I, его модифицированная форма снижала скорость биосинтеза ДНК в клетках костного мозга. Подобный ингибирующий эффект модифицированного белка обнаружен в культурах эмбриональных клеток почек человека линии HEK293 и быстро пролиферирующей мышиной макрофагальной линии ANA-1. Исключение составляли миелоидные клетки человека линии U937, биосинтез ДНК которых не изменялся под влиянием как нативного, так и модифицированного аполипопротеина А-I. Регуляторные эффекты аполипопротеина А-I имеют тканеспецифический характер и в зависимости от конформации белка могут оказывать как стимулирующее, так и ингибирующее действие на биосинтез ДНК в клетках.
Ключевые слова: аполипопротеин А-I, биосинтез ДНК, клетки костного мозга, перевиваемые клеточные линии, культура клеток
Адрес для корреспонденции: ivan.usynin@niibch.ru. Усынин И.Ф
Литература
1. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск, 1992.
2. Панин Л.Е., Усынин И.Ф., Харьковский А.В. Влияние тетрагидрокортизола на биосинтеза белка в гепатоцитах // Бюл. экспер. биол. 2000. Т. 129, № 2. С. 171-173.
3. Панин Л.Е., Усынин И.Ф., Харьковский А.В., Потеряева О.Н. Влияние липопротеинов высокой плотности и гидрокортизона на продукцию аполипопротеина Е клетками Купфера // Бюл. экспер. биол. 1998. Т. 126, № 7. С. 43-45.
4. Панин Л.Е., Хощенко О.М., Усынин И.Ф. Роль аполипопротеина А-1 в активации биосинтеза белка и ДНК в гепатоцитах под влиянием стероидных гормонов // Бюл. экспер. биол. 2001. Т. 131, № 1. С. 63-65.
5. Пыхтина М.Б., Иванов И.Д., Беклемишев А.Б. Разработка эффективных способов выделения аполипопротеина А-1 из плазмы крови человека // Биофарм. журнал.
2012. Т. 4, № 6. С. 37-45.
6. Burgess J.W., Kiss R.S., Zheng H., Zachariah S., Marcel Y.L. Trypsin-sensitive and lipid-containing sites of the macrophage extracellular matrix bind apolipoprotein A-I and participate in ABCA1-dependent cholesterol efflux // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277, N 35. P. 31 318-31 326.
7. Cham B.E., Knowles B.R. A solvent system for delipidation of plasma or serum without protein precipitation // J. Lipid. Res. 1976. Vol. 17, N 2. P. 176-181.
8. Dawson C.W., Young L.S. In vitro assays to study epithelial cell growth // Methods Mol. Biol. 2001. Vol. 174. P. 165-172.
9. Favre G., Tazi K.A., Le Gaillard F., Bennis F., Hachem H., Soula G. High density lipoprotein3 binding sites are related to DNA biosynthesis in the adenocarcinoma cell line A549 // J. Lipid Res. 1993. Vol. 34, N 7. P. 1093-1106.
10. Fisher E.A., Feig J.E., Hewing B., Hazen S.L., Smith J.D. High-density lipoprotein function, dysfunction, and reverse cholesterol transport // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2012. Vol. 32, N 12. P. 2813-2820.
11. Getz G.S., Reardon C.A. Apolipoprotein A-I and A-I mimetic peptides: a role in atherosclerosis // J. Inflamm. Res. 2011. Vol. 4. P. 83-92.
12. Handwerger S., Myers S., Richards R., Richardson B., Turzai L., Moeykins C., Meyer T., Anantharamahiah G.M. Apolipoprotein A-I stimulates placental lactogen expression by human trophoblast cells // Endocrinology. 1995. Vol. 136, N 12. P. 5555-5560.
13. Hewing B., Parathath S., Barrett T., Chung W.K., Astudillo Y.M., Hamada T., Ramkhelawon B., Tallant T.C., Yusufishaq M.S., Didonato J.A., Huang Y., Buffa J., Berisha S.Z., Smith J.D., Hazen S.L., Fisher E.A. Effects of native and myeloperoxidase-modified apolipoprotein A-I on reverse cholesterol transport and atherosclerosis in mice // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2014. Vol. 34, N 4. P. 779-789.
14. Kimura M., Okamoto H., Natsume H., Ogihara M. IP Receptor agonist-induced DNA synthesis and proliferation in primary cultures of adult rat hepatocytes: the involvement of endogenous transforming growth factor-
a // J. Pharmacol. Sci. 2009. Vol. 109, N 4. P. 618-629.
15. Kirikae T., Tamura H., Hashizume M., Kirikae F., Uemura Y., Tanaka S., Yokochi T., Nakano M. Endotoxin contamination in fetal bovine serum and its influence on tumor necrosis factor production by macrophage-like cells J774.1 cultured in the presence of the serum // Int. J. Immunopharmacol. 1997. Vol. 19, N 5. P. 255-562.
16. Krilov D., Balarin M., Kosovic M., Gamulin O., Brnjas-Kraljevic J. FT-IR spectroscopy of lipoproteins — a comparative study // Spectrochim. Acta. A Mol. Biomol. Spectrosc. 2009. Vol. 73, N 4. P. 701-706.
17. Mills G.L., Lane P.L., Weech P.K. A Guidebook to Lipoprotein Techniques / Eds. R.H.Burden, P.H.van Knippenberg. Amsterdam, 1984.
18. Montecucco F., Favari E., Norata G.D., Ronda N., Nofer J.R., Vuilleumier N. Impact of systemic inflammation and autoimmune diseases on apoA-I and HDL plasma levels and functions // Handb. Exp. Pharmacol. 2015. Vol. 244. P. 455-482.
19. Moore Z.W., Hui D.Y. Apolipoprotein E inhibition of vascular hyperplasia and neointima formation requires in­ducible nitric oxide synthase // J. Lipid Res. 2005. Vol. 46, N 10. P. 2083-2090.
20. Nofer J.R., Junker R., Pulawski E., Fobker M., Levkau B., von Eckardstein A., Seedorf U., Assmann G., Walter M. High density lipoproteins induce cell cycle entry in vascular smooth muscle cells via mitogen activated protein kinase-dependent pathway // Thromb. Haemost. 2001. Vol. 85, N 4. P. 730-735.
21. Nofer J.R. Signal transduction by HDL: agonists, receptors, and signaling cascades // Handb. Exp. Pharmacol. 2015. Vol. 224. P. 229-256.
22. Oberg K.A., Fink A.L. A new attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectroscopy method for the study of proteins in solution // Anal. Biochem. 1998. Vol. 256, N 1. P. 92-106.
23. Panin L.E., Maksimov V.F., Usynin I.F., Korostyshevskaya I.M. Activation of nucleolar DNA expression in hepatocytes by glucocorticoids and high density lipoproteins // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002. Vol. 81, N 1. P. 69-76.
24. Peitsch M.C., Kress A., Lerch P.G., Morgenthaler J.J., Isliker H., Heiniger H.J. A purification method for apolipoprotein A-I and A-II // Anal. Biochem. 1989. Vol. 178, N 2. P. 301-305.
25. Qiang J.K., Wong Y.C., Siderowf A., Hurtig H.I., Xie S.X., Lee V.M., Trojanowski J.Q., Yearout D., B Leverenz J., Montine T.J., Stern M., Mendick S., Jennings D., Zabetian C., Marek K., Chen-Plotkin A.S. Plasma apolipoprotein A1 as a biomarker for Parkinson disease // Ann. Neurol. 2013. Vol. 74, N 1. P. 119-127.
26. Sasongko M.B., Wong T.Y., Nguyen T.T., Kawasaki R., Jenkins A., Shaw J., Wang J.J. Serum apolipoprotein AI and B are stronger biomarkers of diabetic retinopathy than traditional lipids // Diabetes Care. 2011. Vol. 34, N 2. P. 474-479.
27. Undurti A., Huang Y., Lupica J.A., Smith J.D., DiDonato J.A., Hazen S.L. Modification of high density lipoprotein by myeloperoxidase generates a pro-inflammatory particle // J. Biol. Chem. 2009. Vol. 284, N 45. P. 30 825-30 835.
28. Yamato K., Tamasawa N., Murakami H., Guan J.Z., Tanabe J., Matsui J., Suda T., Yasujima M. Quantitative analysis of apolipoprotein E secretion by human monocyte-derived macrophages in culture // Tohoku J. Exp. Med. 2003. Vol. 201, N 1. P. 47-54.
29. Zheng X., Baker H., Hancock W.S., Fawaz F., McCaman M., Pungor E. Jr. Proteomic analysis for the assessment of different lots of fetal bovine serum as a raw material for cell culture. Part IV. Application of proteomics to the manufacture of biological drugs // Biotechnol. Prog. 2006. Vol. 22, N 5. P. 1294-1300.
30. Zhou X., Von Eckardstein A. Effect of HDL and apoAI on PGE2 production by monocyte-derived macrophages // J. Huazhong. Univ. Sci. Technolog. Med. Sci. 2002. Vol. 22, N 4. P. 270-272.
31. Zucker S., Lysik R.M., Chikkappa G., Glucksman M.J., Gomez-Reino J., DiStefano J.F. Very low density lipoprotein hematopoiesis inhibitor from rat plasma // Exp.
Hematol. 1980. Vol. 8, N 7. P. 895-905.

Нейропротективный эффект сигма1-рецептора на клеточной модели болезни Хантингтона
А.В.Большакова*, Н.А.Красковская*, А.Н.Гайнуллина*, Е.О.Куканова*, О.Л.Власова*, И.Б.Безпрозванный*,** – 160
*Лаборатория молекулярной нейродегенерации Санкт-Петербургского политехнического университета Петра Великого, Санкт-Петербург, РФ; **Department of Physiology, UT Southwestern Medical Center at Dallas, Dallas, USA
Болезнь Хантингтона является наследственным нейродегенеративным заболеванием, поражающим преимущественно нейроны стриатума. Исследования последних лет указывают на нарушения в кальциевой регуляции в нейронах стриатума при болезни Хантингтона, что приводит к элиминации синаптических связей между нейронами коры и стриатума. Были исследованы нейропротективные свойства сигма1-рецептора, одна из основных функций которого связана с модуляцией кальциевого гомеостазиса в клетках. Добавление селективных агонистов сигма1-рецептора в кортикостриатную культуру восстанавливает синаптические связи между нейронами коры и стриатума. Полученные данные позволяют предположить, что сигма1-рецептор является перспективной мишенью для разработки лекарственных препаратов в терапии болезни Хантингтона.
Ключевые слова: болезнь Хантингтона, кортикостриатные культуры, средние шипиковые нейроны, дендритные шипики, сигма1-рецептор
Адрес для корреспонденции: ninakraskovskaya@gmail. com. Красковская Н.А., mnlabspb@gmail.com. Безпрозванный И.Б.
Литература
1. Артамонов Д.Н., Коржова В.В., Ву Д., Рыбальченко П.Д., Им К., Красноборова В.А., Власова О.Л., Безпрозванный И.Б. Нарушения синаптической передачи при болезни Хантингтона на кортикостриатной модели культуры нейронов // Биол. мембраны. 2013. Т. 30, № 4. С. 276.
2. Dyhring T., Nielsen E.Ø., Sonesson C., Pettersson F., Karlsson J., Svensson P., Christophersen P., Waters N. The dopaminergic stabilizers pridopidine (ACR16) and (-)-OSU6162 display dopamine D (2) receptor antagonism and fast receptor dissociation properties // Eur. J. Pharmacol. 2010. Vol. 628, N 1-3. P. 19-26.
3. Huntington Study Group HART Investigators. A randomized, double-blind, placebo-controlled trial of pridopidine in Huntington's disease // Mov. Disord. 2013. Vol. 28, N 10. P. 1407-1415.
4. Mavlyutov T.A., Epstein M.L., Andersen K.A., Ziskind-Conhaim L., Ruoho A.E. The sigma-1 receptor is enriched in postsynaptic sites of C-terminals in mouse motoneurons. An anatomical and behavioral study // Neuroscience. 2010. Vol. 167, N 2. P. 247-255.
5. Rodriguez A., Ehlenberger D.B., Dickstein D.L., Hof P.R., Wearne S.L. Automated three-dimensional detection and shape classification of dendritic spines from fluorescence microscopy images // PLoS One. Vol. 3, N 4. P. e1997. doi: 10.1371/journal.pone.0001997.
6. Ryskamp D., Wu J., Geva M., Kusko R., Grossman I., Hayden M., Bezprozvanny I. The sigma-1 receptor mediates the beneficial effects of pridopidine in a mouse model of Huntington disease // Neurobiol Dis. 2017.  Vol. 97, Pt A. P. 46-59.
7. Sahlholm K., Århem P., Fuxe K., Marcellino D. The dopamine stabilizers ACR16 and (-)-OSU6162 display nanomolar affinities at the
s-1 receptor // Mol. Psychiatry. 2013. Vol. 18, N 1. P. 12-14.
8. Sun S., Zhang H., Liu J., Popugaeva E., Xu N.J., Feske S., White C.L.3rd, Bezprozvanny I. Reduced synaptic STIM2 expression and impaired store-operated calcium entry cause destabilization of mature spines in mutant presenilin mice // Neuron. 2014. Vol. 82, N 1. P. 79-93.
9.
Walker F.O. Huntington's disease // Lancet. 2007. Vol. 369. P. 218-228.
10. Wu J., Ryskamp D.A., Liang X., Egorova P., Zakharova O., Hung G., Bezprozvanny I. Enhanced store-pperated calcium entry leads to striatal synaptic loss in a Huntington's disease mouse model // J. Neurosci. 2016. Vol. 36, N 1. P. 125-141.

Характеристика трофобластов при длительном культивировании in vitro
Т.Д.Колокольцова*,**, И.Н.Сабурина*,****, Т.Н.Нановская**, С.Л.Патрикеева**, Д.И.Верниковская**, И.М.Зурина*, А.А.Горкун*, Н.В.Кошелева*, Р.А.Полтавцева***, Г.Т.Сухих*** – 168
*ФГБНУ НИИ общей патологии и патологической физиологии, Москва, РФ; **University of Texas Medical Branch, Galveston, Texas, USA; ***ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава РФ, Москва; ****ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования, Москва, РФ
Исследовали более 40 культур цитотрофобластов, выделенных из островков клеток, растущих из трипсинизированных кусочков ткани микроворсинок плаценты. Результаты показали фенотипическую изменчивость трофобластов. Изменение морфологии трофобластов от эпителиоподобных или овальных клеток до биполярных и веретеновидных или извитых и до мезенхимоподобных при дальнейшем культивировании, а также активная экспрессия цитокератина-7 и виментина свидетельствуют об эпителиально-мезенхимальном переходе трофобластов при культивировании in vitro. Контроль экспрессии специфических маркеров при длительном культивировании трофобластов (до 7 пассажей и более) показал возможность контаминации культуры другими нетрофобластными клетками, включая фибробласты. Высокая вероятность контаминации культуры трофобластов быстрорастущими клетками свидетельствует о необходимости регулярного контроля культур, используемых в фундаментальных исследованиях. Исследования подтвердили возможность длительного культивирования клеток, сохраняющих характеристики трофобластов. Соответствие и чистота 4 культур трофобластов, свободных от контаминации и сохраняющих характеристики чистой культуры при длительном (более 10 пассажей) культивирoвании in vitro, подтверждены.
Ключевые слова: трофобласт, культура клеток, морфология трофобластов, цитокератин, виментин
Адрес для корреспонденции: kolokoltd@mail.ru. Колокольцова Т.Д.
Литература
1. Колокольцова Т.Д., Сабурина И.Н., Полтавцева Р.А., Сухих Г.Т. Выделение и культивирование трофобластов из терминальной плаценты человека // Клет. технол. в биол. и мед. 2014. № 4. С. 216-220.
2. Aboagye-Mathiesen G., Laugesen J., Zdravkovic M., Ebbesen P. Isolation and characterization of human placental trophoblast subpopulations from first-trimester chorionic villi // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1996. Vol. 3, N 1. P. 14-22.
3. Battula V.L., Evans K.W., Hollier B.G., Shi Y., Marini F.C., Ayyanan A., Wang R.Y., Brisken C., Guerra R., Andreeff M., Mani S.A. Epithelial-mesenchymal transition-derived cells exhibit multilineage differentiation potential similar to mesenchymal stem cells // Stem Cells. 2010. Vol. 28, N 8. P. 1435-1445.
4. Bellego F., Vaillancourt C., Lafond J. Isolation and culture of term human cytotrophoblast cells and in vitro methods for studying human cytotrophoblast cells’ calcium uptake // Human embryogenesis. Methods and protocols / Eds J.Lafond, C.Vaillancourt. London; N.Y., 2009. P. 73-87.
5. Bischof P., Irminger-Finger I. The human cytotrophoblastic cell, a mononuclear chameleon // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2005. Vol. 37, N 1. P. 1-16.
6. Bullen B.E., Bloxam D.L., Ryder T.A., Mobberley M.A., Bax C.M. Two-sided culture of human placental trophoblast. Morphology, immunocytochemistry and permeability properties // Placenta. 1990. Vol. 11, N 5. P. 431-450.
7. Ezashi T., Telugu B.P., Roberts R.M. Model systems for studying trophoblast differentiation from human pluripotent stem cells // Cell Tissue Res. 2012. Vol. 349, N 3. P. 809-824.
8. Giakoumopoulos M., Golos T.G. Embryonic stem cell-derived trophoblast differentiation: a comparative review of the biology, function, and signaling mechanisms // J. Endocrinol. 2013. Vol. 216, N 3. P. R33-R45.
9. Li C.D., Zhang W.Y., Li H.L., Jiang X.X., Zhang Y., Tang P.H., Mao N. Mesenchymal stem cells derived from human placenta suppress allogeneic umbilical cord blood lymphocyte proliferation // Cell Res. 2005. Vol. 15, N 7. P. 539-547.
10. Maldonado-Estrada J., Menu E., Roques P., Barré-Sinoussi F., Chaouat G. Evaluation of cytokeratin 7 as an accurate intracellular marker with which to assess the purity of human placental villous trophoblast cells by flow cytometry // J. Immunol. Methods. 2004. Vol. 286, N 1-2. P. 21-34.
11. Orendi K., Kivity V., Sammar M., Grimpel Y., Gonen R., Meiri H., Lubzens E., Huppertz B. Placental and trophoblastic in vitro models to study preventive and therapeutic agents for preeclampsia // Placenta. 2011. Vol. 32, Suppl. P. S49-S54.
12. Pattillo R.A., Gey G.O. The establishment of a cell line of human hormone-synthesizing trophoblastic cells in vitro // Cancer Res. 1968. Vol. 28, N 7. P. 1231-1236.
13. Portmann-Lanz C.B., Schoeberlein A., Huber A., Sager R., Malek A., Holzgreve W., Surbek D.V. Placental mesenchymal stem cells as potential autologous graft for pre- and perinatal neuroregeneration // Am. J. Obstet. Gynecol. 2006. Vol. 194, N 3. P. 664-673.
14. Stenqvist A.C., Chen T., Hedlund M., Dimova T., Nagaeva O., Kjellberg L., Innala E., Mincheva-Nilsson L. An efficient optimized method for isolation of villous trophoblast cells from human early pregnancy placenta suitable for functional and molecular studies // Am. J. Reprod. Immunol. 2008. Vol. 60, N 1. P. 33-42.
15. Thordarson G., Folger P., Talamantes F. Development of a placental cell culture for stufying the control of mouse placental lactogenII secretion // Placenta.
1987. Vol. 8, N 6. P. 573-585.

Перспективность использования клеточного продукта для терапии кожных дефектов при сахарном диабете
А.П.Лыков*,**, Н.А.Бондаренко*,**, О.В.Повещенко*,**, Т.В.Миллер*, А.Ф.Повещенко*,**, М.А.Суровцева*,**, Н.П.Бгатова*, В.И.Коненков* – 175
*ФГБНУ Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии, Новосибирск, РФ; **ФГБУ Новосибирский научно-исследовательский институт патологии кровообращения им. акад. Е.Н.Мешалкина Минздрава РФ, Новосибирск, РФ
Изучена терапевтическая эффективность аутологичного клеточного продукта в терапии ожоговой раны кожи мышей-самцов линии C57Bl/6 на фоне стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета. Показано статистически значимое уменьшение площади дефекта кожи после однократного введения в область раны клеточ­ного продукта (костномозговых мультипотентных мезенхимных стромальных клеток, фибробластов или же кондиционных сред от этих клеток) у животных как с экспериментальным сахарным диабетом, так и без сахарного диабета.
Ключевые слова: клеточный продукт, костномозговые мультипотентные мезенхимные стромальные клетки, кондиционные среды, стрептозотоциновый диабет
Адрес для корреспонденции: aplykov2@mail.ru. Лыков А.П.
Литература
1. Коненков В.И., Климонтов В.В. Генные и клеточные технологии в лечении синдрома диабетической стопы // Сахарный диабет. 2014. № 1. С. 63-69.
2. Коненков В.И., Климонтов В.В., Кузнецова И.В. Нарушения ангиогенеза и лимфангиогенеза при сахарном диабете // Арх. патол. 2014. Т. 76, № 2. С. 55-59.
3. Лыков А.П., Бондаренко Н.А., Сахно Л.В., Шевела Е.Я., Повещенко О.В., Ким И.И., Никонорова Ю.В., Коненков В.И. Влияние секреторных факторов эндотелиальных клеток на пролиферативную и миграционную способность мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток человека // Фундаментальные исследования.
2014. № 4-2. С. 296-301.
4. Bernardi S., Severini G.M., Zauli G., Secchiero P. Cell-based therapies for diabetic complications // Exp. Diabetes Res. 2012. Vol. 2012. ID 872504. doi: 10.1155/2012/872504.
5. Chen L., Tredget E.E., Wu P.Y., Wu Y. Paracrine factors of mesenchymal stem cells recruit macrophages and endothelial lineage cells and enhance wound healing // PLoS One. 2008. Vol. 3, N 4. P. e1886. doi: 10.1371/journal.pone.0001886.
6. Heo S.C., Jeon E.S., Lee I.H., Kim H.S., Kim M.B., Kim J.H. Tumor necrosis factor-a-activated human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells accelerate cutaneous wound healing through paracrine mechanisms // J. Invest. Dermatol. 2011. Vol. 131, N 7. P. 1559-1567.
7. Ichim T.E., Solano F., Lara F., Paris E., Ugalde F., Rodriguez J.P., Minev B., Bogin V., Ramos F., Woods E.J., Murphy M.P., Patel A.N., Harman R.J., Riordan N.H. Feasibility of combination allogeneic stem cell therapy for spinal cord injury: a case report // Int. Arch. Med. 2010. Vol. 3. P. 30. doi: 10.1186/1755-7682-3-30.
8. Pasha Z., Wang Y., Sheikh R., Zhang D., Zhao T., Ashraf M. Preconditioning enhances cell survival and differentiation of stem cells during transplantation in infarcted myocardium // Cardiovasc. Res. 2008. Vol. 77, N 1. P. 134-142.
9. Perin E.C., Tian M., Marini F.C.3rd, Silva G.V., Zheng Y., Baimbridge F., Quan X., Fernandes M.R., Gahremanpour A., Young D., Paolillo V., Mukhopadhyay U., Borne A.T., Uthamanthil R., Brammer D., Jackson J., Decker W.K., Najjar A.M., Thomas M.W., Volgin A., Rabinovich B., Soghomonyan S., Jeong H.J., Rios J.M., Steiner D., Robinson S., Mawlawi O., Pan T., Stafford J., Kundra V., Li C., Alauddin M.M., Willerson J.T., Shpall E., Gelovani J.G. Imaging long-term fate of intramyocardially implanted mesenchymal stem cells in a porcine myocardial infarction model // PLoS One. 2011. Vol. 6, N 9. P. e22949. doi: 10.1371/journal.pone.0022949.
10. Sasaki M., Abe R., Fujita Y., Ando S., Inokuma D., Shimizu H. Mesenchymal stem cells are recruited into wounded skin and contribute to wound repair by transdifferentiation into multiple skin cell type // J. Immunol. 2008. Vol. 180, N 4. P. 2581-2587.
11. Wan J., Xia L., Liang W., Liu Y., Cai Q. Transplantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells promotes delayed wound healing in diabetic rats// J. Diabetes Res. 2013.
Vol. 2013. ID 647107. doi: 10.1155/2013/647107.

Формирование тканеинженерной конструкции хрящевой ткани человека в проточном биореакторе
В.И.Севастьянов, Ю.Б.Басок, А.М.Григорьев, Л.А.Кирсанова, В.Н.Василец – 178
ФГБУ Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И.Шумакова Минздрава РФ, Москва
Проведены эксперименты по культивированию клеточно-инженерной конструкции хрящевой ткани человека, состоящей из биополимерного микроструктурированного коллагенсодержащего гидрогеля, мезенхимных стро­мальных клеток жировой ткани человека и индукционной хондрогенной культуральной среды, в специально разработанном проточном биореакторе. Показано, что на 16-е сутки эксперимента мезенхимные стромальные клетки жировой ткани человека приобретают характерную для хондробластов уплощенную форму и проявляют высокую пролиферативную активность с формированием собственного внеклеточного матрикса. Наблюдаемые изменения в гистологической картине культивируемой системы свидетельствуют о начале формирования тканеинженерной конструкции хрящевой ткани человека.
Ключевые слова: проточный биореактор, клеточно-инженерная и тканеинженерная конструкция, биополимерный матрикс, мезенхимные стромальные клетки, хрящевая ткань
Адрес для корреспонденции:
viksev@yandex.ru. Севастьянов В.И.
Литература
1. Басок Ю.Б., Севастьянов В.И. Технологии тканевой инженерии и регенеративной медицины в лечении дефектов хрящевой ткани суставов // Вестн. трансплантол. и искусств. органов 2016. Т. 18, № 4. С. 102-122.
2. Сайковский Р.С., Савенкова Н.А., Аверьянов А.В., Лисица А.В. Эффективность применения препарата Сферогель для лечения гонартроза // Клин. практика. 2013. № 3. С. 4-10.
3. Севастьянов В.И. Технологии тканевой инженерии и регенеративной медицины // Вестн. трансплантол. и искусств. органов 2014. Т. 16, № 3. С. 93-108.
4. Севастьянов В.И., Перова Н.В. Биополимерный гетерогенный гидрогель СфероГЕЛЬ — инъекционный биодеградируемый имплантат для заместительной и регенеративной медицины // Практич. медицина 2014. № 8. С. 120-126.
5. Севастьянов В.И., Перова Н.В., Немец Е.А., Сургученко В.А., Пономарева А.С. Примеры экспериментально-клинического применения биосовместимых материалов в регенеративной медицине // Биосовместимые мате­риалы / Под ред. В.И.Севастьянова, М.П.Кирпичникова. М., 2011. С. 237-252.
6. Соловьева И.В., Шестерня Н., Перова Н.В., Севастьянов В.И. Комбинированное применение биополимерного гетерогенного гидрогеля и гиалуроновой кислоты при остеоартрозе (первый опыт) // Врач. 2016.
№ 1. С. 12-17.
7. Bajek A., Gurtowska N., Olkowska J., Kazmierski L., Maj M., Drewa T. Adipose-derived stem cells as a tool in cell-based therapies // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 2016. Vol. 64, N 6. P. 443-454.
8. Bernhard J.C., Vunjak-Novakovic G. Should we use cells, biomaterials, or tissue engineering for cartilage regeneration? // Stem Cell Res. Ther. 2016. Vol. 7, N 1. P. 56.
9. He B., Wu J.P., Kirk T.B., Carrino J.A., Xiang C., Xu J. High-resolution measurements of the multilayer ultra-structure of articular cartilage and their translational potential // Arthritis Res. Ther. 2014. Vol. 16, N 2. P. 205.
10. Liu M., Yu X., Huang F., Cen S., Zhong G., Xiang Z. Tissue engineering stratified scaffolds for articular cartilage and subchondral bone defects repair // Orthopedics. 2013. Vol. 36, N 11. P. 868-873.
11. Stubbs A.J., Howse E.A., Mannava S. Tissue engineering and the future of hip cartilage, labrum and ligamentum teres // J. Hip Preserv. Surg. 2015. Vol. 3, N 1. P. 23-29.
12. Surguchenko V.A., Ponomareva A.S., Kirsanova L.A., Skaleckij N.N., Sevastianov V.I. The cell-engineered construct of cartilage on the basis of biopolymer hydrogel matrix and human adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells (in vitro study) // J. Biomed.
Mater. Res. A. 2015. Vol. 103, N 2. P. 463-470.

Структурная динамика хондроцитов при культивировании
Н.П.Омельяненко, С.А.Родионов – 184
ФГБУ ЦНИИ травматологии и ортопедии им. Н.Н.Приорова Минздрава РФ, Москва
Проведено сравнительное исследование морфологии хондроцитов в составе нормального хряща после выделения из ткани и на этапах последующего культивирования. Дана оценка структурной динамики клеток в ходе культивирования. Выявлены существенные морфологические различия хондроцитов на указанных этапах их подготовки к использованию in vivo. Показано, что перед имплантацией хондроциты имеют выраженные из­менения структуры, такие как “блеббинг” и обводнение цитоплазмы, что может влиять на формирование полноценного хрящевого регенерата. Исследование было проведено с помощью светооптических методов, включающих цейтраферную съемку клеточных культур с использованием дифференциального интерференционного контрастирования по Номарскому в комплексе с трансмиссионной электронной микроскопией.
Ключевые слова: хондроциты, структурная динамика, клеточное культивирование
Адрес для корреспонденции:
rodionov_085@mail.ru. Родионов С.А.
Литература
1. Омельяненко Н.П., Ильина В.К., Ковалев А.В., Кальсин В.А., Родионов С.А. Структурная динамика адгезивных клеток костного мозга при культивировании: первичный пассаж (часть 1) // Гены и клетки. 2012. Т. 7, № 4. С. 28-37.
2. Омельяненко Н.П., Ильина В.К., Ковалев А.В., Кальсин В.А., Родионов С.А. Структурная динамика адгезивных клеток костного мозга при культивировании: первый пассаж // Гены и Клетки. 2014. Т. 9, № 4. С. 56-62.
3. Омельяненко Н.П., Слуцкий Л.И. Хрящ — хрящевая ткань: структурно-функциональная характеристика, биохимическая и молекулярно-биологическая характеристика // Соединительная ткань (гистофизиология и биохимия). Том
2 / Под ред. С.П.Миронова. М., 2008. С. 41-188.
4. Anderer U., Libera J. In vitro engineering of human auto­genous cartilage // J. Bone Miner. Res. 2002. Vol. 17, N 8. P. 1420-1429.
5. Brittberg M., Lindahl A., Nilsson A., Ohlsson C., Isaksson O., Peterson L. Treatment of deep cartilage defects in the knee with autologous chondrocyte transplantation // N. Engl. J. Med. 1994. Vol. 331, N 14. P. 889-895.
6. Brittberg M. Cell carriers as the next generation of cell therapy for cartilage repair: a review of the matrix-induced autologous chondrocyte implantation procedure // Am. J. Sports Med. 2010. Vol. 38, N 6. P. 1259-1271.
7. Caron M.M., Emans P.J., Coolsen M.M., Voss L., Surtel D.A., Cremers A., van Rhijn L.W., Welting T.J. Redifferentiation of dedifferentiated human articular chondrocytes: comparison of 2D and 3D cultures // Osteoarthritis Cartilage. 2012. Vol. 20, N 10. P. 1170-1178.
8.
Charras G.T. A short history of blebbing // J. Microscopy. 2008. Vol. 231, Pt 3. P. 466-478.
9. Coates E.E., Fisher J.P. Phenotypic variations in chondrocyte subpopulations and their response to in vitro culture and external stimuli // Ann. Biomed. Eng. 2010. Vol. 38, N 11. P. 3371-3388.
10. Croft D.R., Coleman M.L., Li S., Robertson D., Sullivan T., Stewart C.L., Olson M.F. Actin-myosinbased contraction is responsible for apoptotic nuclear disintegration // J. Cell Biol. 2005. Vol. 168, N 2. P. 245-255.
11. Cuéllar V.G., Cuéllar J.M., Kirsch T., Strauss E.J. Correlation of synovial fluid biomarkers with cartilage pathology and associated outcomes in knee // Arthroscopy. 2016. Vol. 32, N 3. P. 475-485.
12. Darling E.M., Athanasiou K.A. Rapid phenotypic changes in passaged articular chondrocyte subpopulations // J. Orthop. Res. Vol. 23, N 2. P. 425-432.
13. Filardo G., Kon E., Di Martino A., Iacono F., Marcacci M. Arthroscopic second-generation autologous chondrocyte implantation: a prospective 7-year follow-up study // Am. J. Sports Med. 2011. Vol. 39, N 10. P. 2153-2160.
14. Gille J., Behrens P., Volpi P., de Girolamo L., Reiss E., Zoch W., Anders S. Outcome of Autologous Matrix Induced Chondrogenesis (AMIC) in cartilage knee surgery: data of the AMIC Registry // Arch. Orthop. Trauma Surg. 2013. Vol. 133, N 1. P. 87-93.
15. Libera J., Ruhnau K., Baum P., Lüthti U., Schreyer T., Meyer U., Wiesmann H., Herrmann A., Korte T. Pullig U., Siodla V. Cartilage engineering // Fundamentals of Tissue Engineering and Regenerative Medicine / Eds. U.Meyer, Th.Meyer, J.Handschel, H.P.Wiesmann. Berlin, 2009. P. 233-242.
16. Marcacci M., Berruto M., Brocchetta D., Delcogliano A., Ghinelli D., Gobbi A., Kon E., Pederzini L., Rosa D., Sacchetti G.L., Stefani G., Zanasi S. Articular cartilage engineering with Hyalograft C: 3-year clinical results // Clin. Orthop. Relat. Res. 2005. N 435. P. 96-105.
17. Peterson L., Minas T., Brittberg M., Nilsson A., Sjögren-Jansson E., Lindahl A. Two- to 9-year outcome after autologous chondrocyte transplantation of the knee // Clin. Orthop. Relat. Res. 2000. N 374. P. 212-234.
18. Ryan J.M., Flanigan D.C. Emerging technologies: What is the future of cartilage restoration? // Hard Tissue. 2013. Vol. 2, N 2. P. 12.
19. Schneider U., Rackwitz L., Andereya S., Siebenlist S., Fensky F., Reichert J., Löer I., Barthel T., Rudert M., Nöth U. A prospective multicenter study on the outcome of type I collagen hydrogel-based autologous chondrocyte implantation (CaReS) for the repair of articular cartilage defects in the knee // Am. J. Sports Med. 2011. Vol. 39, N 12. P. 2558-2565.
20. Steinwachs M., Kreuz P.C. Autologous chondrocyte implantation in chondral defects of the knee with a type I/III collagen membrane: a prospective study with a 3-year follow-up // Arthroscopy. 2007. Vol. 23, N 4. P. 381-387.
21. Wickman G., Julian L., Olson M.F. How apoptotic cells aid in the removal of their own cold dead bodies // Cell Death Differ. 2012. Vol. 19, N 5. P. 735-742.
22. Youn I., Choi J.B., Cao L., Setton L.A., Guilak F. Zonal variations in the three-dimensional morphology of the chondron measured in situ using confocal microscopy // Osteoarthritis and Cartilage. 2006. Vol. 14, N 9. P. 889-897.
23. Zaslav K., Cole B., Brewster R., DeBerardino T., Farr J., Fowler P., Nissen C.; STAR Study Principal Investigators. A prospective study of autologous chondrocyte implantation in patients with failed prior treatment for articular cartilage defect of the knee: results of the Study of the Treatment of Articular Repair (STAR) clinical trial // Am. J. Sports Med. 2009.
Vol. 37, N 1. P. 42-55.

Особенности заселения клеточного материала в матриксы на основе полимолочной кислоты, изготовленные по технологии электроспиннинга и аэродинамического формования
С.А.Афанасьев, Э.Ф.Муслимова, Ю.А.Нащекина*, П.О.Никонов*, Ю.В.Роговская, Е.Н.Больбасов**, С.И.Твердохлебов** – 192
Научно-исследовательский институт кардиологии ТНИМЦ РАН, Томск, РФ; *ФГБУН Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, РФ; **ФГАОУ ВО Национальный исследовательский Томский политехнический университет, Томск, РФ
Оценивалась возможность заселения стромальных клеток костного мозга в матриксы из полимолочной кислоты, полученные методом электроспиннинга и аэродинамического формования. Заселение клеток проводили методом динамического заселения. Затем матриксы 3 сут культивировали в чашках Петри с питательной средой. Выход клеток на поверхность чашек Петри зафиксирован только для матрикса, изготовленного методом электроспиннинга. Однако после использования красителя DAPI клетки были выявлены в структуре обоих матриксов. Среднее количество клеток в матриксах, изготовленных методом электроспиннинга и аэродинамического формования, составляло 56±9 и 81±6 соответственно. Заселение стромальных клеток в матрикс, изготовленный аэродинамическим формованием, происходит эффективнее, что обусловлено его более оптимальной пространственной организацией.
Ключевые слова: синтетический матрикс, полимолочная кислота, электроспиннинг, аэродинамическое формование, культура клеток
Адрес для корреспонденции: tursky@cardio-tomsk.ru. Афанасьев С.А.
Литература
1.Ахмедов Ш.Д., Афанасьев С.А., Дьякова М.Л., Фатхутдинов Т.Х., Кактурский Л.В. Использование бесклеточного матрикса для формирования новых кровеносных сосудов и сердца методом тканевой инженерии // Гены и клетки. 2009. Т. 4, № 2. С. 32-39.
2.Зорин В.Л., Зорина А.И., Черкасов В.Р. Анализ зарубежного рынка регенеративной медицины // Гены и клетки. 2009. Т. 4, № 3. С. 68-78.
3.Нащекина Ю.А., Никонов П.О., Михайлов В.М., Пинаев Г.П. Зависимость заполнения стромальными клетками костного мозга трехмерной матрицы от способа посева клеток и типа модификации поверхности матрицы // Цитология. 2014. Т. 56, № 4. С. 283-290.
4.Попов С.В., Рябов В.В., Суслова Т.Е., Штатолкина М.А., Веснина Ж.В., Крылов А.Л., Афанасьев С.А., Марков В.А., Карпов Р.С. Фундаментальные и прикладные аспекты клеточных технологий в кардиологии и кардиохирургии // Сиб. науч. мед. журн. 2008. Т. 28, № 4. С. 5-15.
5.Швед Ю.Л., Кухарева Л.В., Зорин И.М., Соловьев A.Ю., Блинова М.И., Билибин А.Ю., Пинаев Г.П. Разработка полимерной подложки для культивирования фибробластов кожи человека // Цитология.
2006. Т. 48, № 2. С. 161-168.
6. Bol'basov E.N., Lapin I.N., Tverdokhlebov S.I., Svetlichnyi V.A. Aerodynamic synthesis of biocompatible matrices and their functionalization by nanoparticles obtained by the method of laser ablation // Russ. Phys. J. 2014. Vol. 57, N 3. P. 293-300.
7. Bolbasov E.N., Stankevich., K.S., Sudarev E.A., Bouznik V.M., Kudryavtseva V.L., Antonova L.V., Matveeva V.G., Anissimov Y.G., Tverdokhlebov S.I. The investigation of the production method influence on the structure and properties of the ferroelectric nonwoven materials based on vinylidene fluoride-tetrafluoroethylene copolymer // Mater. Chem. Phys. 2016. Vol. 182. P. 338-346.
8. Daristotle J.L., Behrens A.M., Sandler A.D., Kofinas P. A Review of the fundamental principles and applications of solution blow spinning // ACS Appl. Mater. Interfaces. 2016. Vol. 8, N 51. P. 34 951-34 963.
9.
Langer R., Tirrell D.A. Designing materials for biology and medicine // Nature. 2004. Vol. 428. Р. 487-492.
10. Lou H., Han W., Wang X. Numerical study on the solution blowing annular jet and its correlation with fiber morphology // Ind. Eng. Chem. Res. 2014. Vol. 53, N 7. P. 2830-2838.
11. Melchels F.P.W., Domingos M.A.N., Klein T.J., Malda J., Bartolo P.J., Hutmacher D.W. Additive manufacturing of tissues and organs // Prog. Polym. Sci. 2011. 2011. Vol. 37, N 8. P. 1079-1104.
12. Sabbatier G., Larrañaga A., Guay-Bégin A.A., Fernandez J., Diéval F., Durand B., Sarasua J.R., Laroche G. Design, degradation mechanism and long-term cytotoxicity of poly(L-lactide) and poly(lactide-co-
Î-caprolactone) terpolymer film and air-spun nanofiber scaffold // Macromol. Biosci. 2015. Vol. 15, N 10. P. 1391-1410.
13. Sill T.J., von Recum H.A. Electrospinning: applications in drug delivery and tissue engineering // Biomaterials. 2008. Vol. 29, N 13.
Р. 1989-2006.
14. Tomecka E., Wojasinski M., Jastrzebska E., Chudy M., Ciach T., Brzozka Z. Poly(l-lactic acid) and polyurethane nanofibers fabricated by solution blow spinning as potential substrates for cardiac cell culture // Mater.
Sci. Eng. C. Mater. Biol. Appl. 2017. Vol. 75. P. 305-316.

Биолюминесцентная оценка распределения в мозге высокомолекулярной белковой фракции препарата “Целлекс-дейли” при интраназальном введении
В.П.Баклаушев*, Г.М.Юсубалиева**, М.С.Буренков***, П.А.Мельников*,**, Е.А.Божко***, Г.А.Ментюков***, Л.С.Лаврентьева***, М.А.Соколов***, в.п.Чехонин**,**** – 196
*ФГБУ Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий ФМБА России, Москва; **ФГБУ Федеральный медицинский исследовательский центр психиатрии и наркологии им. В.П.Сербского Минздрава РФ, Москва; ***АО “Фарм-Синтез”, Москва, РФ; ****ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава РФ, Москва
В эксперименте на здоровых крысах оценивали проницаемость гематоэнцефалического барьера для белковой фракции 50-100 кД (БФ50-100) препарата “Целлекс-дейли”, меченной флюоресцентным трейсером FITC, при интраназальном введении по сравнению с раствором неконъюгированного красителя FITC. Флюори­метрический анализ образцов сыворотки крови и ликвора показал, что БФ50-100-FITC препарата “Целлекс-дейли” при интраназальном введении проникает в системный кровоток и цероброспинальную жидкость с максимумом накопления к 2 ч после введения и сохраняется в кровотоке в течение 24 ч, что, вероятно, обусловлено связыванием с белками плазмы крови. Различия в кинетическом профиле БФ50-100-FITC и свободного FITC косвенно подтверждают, что в течение 24 ч большая часть препарата не подвергается деградации, и FITC, вероятно, не отщепляется от белковых компонентов препарата. Анализ in vivo флюоресценции позволил заключить, что через 6 ч после окончания интраназального введения флюоресцентный сигнал достоверно определяется в обонятельных луковицах головного мозга, что свидетельствует о проникновении интраназально введенного препарата “в обход” гематоэнцефалического барьера. Сканирующая лазерная конфокальная микроскопия на срезах головного мозга крыс подтвердила факт проникновения высокомолекулярной белковой фракции БФ50-100-FITC в структуры ЦНС. Наиболее выраженное накопление меченого препарата наблюдалось в обонятельных луковицах через 6 и 12 ч после введения. В отличие от свободного FITC, вводимого в контрольной группе, препарат БФ50-100-FITC достоверно накапливался в обонятельной коре и нейронах фронтальной коры головного мозга с функционально полноценными ядрами, которые определялись через 6, 12 и 24 ч.
Ключевые слова: целлекс-дейли, интраназальное введение, гематоэнцефалический барьер, адресная доставка
Адрес для корреспонденции: serpoff@gmail.com. Баклаушев В.П.
Литература

1. Баклаушев В.П., Павлов К.А., Чехонин В.П. Моноклональные антитела в диагностике низкодифференцированных глиом // Биомед. химия. 2009. Т. 55, № 2. С. 140-154.
2. Бельская Г.Н., Чуприна С.Е., Воробьев А.А., Горожа Е.Н., Буторакина Т.Л., Соколов М.А., Измайлов И.А. Когнитивные нарушения при инсульте: возможности медикаментозной коррекции // Журн. неврол. и психиатр.
2016. Т. 116, № 5. С.33-37.
3.
Bannunah A.M., Vllasaliu D., Lord J., Stolnik S. Mechanisms of nanoparticle internalization and transport across an intestinal epithelial cell model: effect of size and surface charge // Mol. Pharm. 2014. Vol. 11, N 12. P. 4363-4373.
4. Daniel J.A., Chau N., Abdel-Hamid M.K., Hu L., von Kleist L., Whiting A., Krishnan S., Maamary P., Joseph S.R., Simpson F., Haucke V., McCluskey A., Robinson P.J. Phenothiazine-derived antipsychotic drugs inhibit dynamin and clathrin-mediated endocytosis // Traffic. 2015. Vol. 16, N 6. P. 635-654.
5. Deng-Bryant Y., Readnower R., Leung L.Y., Tortella F., Shear D. Methods of drug delivery in neurotrauma // Methods Mol. Biol. 2016. Vol. 1462. P. 89-100.
6.
Dey M., Yu D., Kanojia D., Li G., Sukhanova M., Spencer D.A., Pituch K.C., Zhang L., Han Y., Ahmed A.U., Aboody K.S., Lesniak M.S., Balyasnikova I.V. Intranasal oncolytic virotherapy with CXCR4-enhanced stem cells extends survival in mouse model of glioma // Stem Cell Rep. 2016. Vol. 7, N 3. P. 471-482.
7. Donega V., Nijboer C.H., Braccioli L., Slaper-Cortenbach I., Kavelaars A., van Bel F., Heijnen C.J. Intranasal administration of human MSC for ischemic brain injury in the mouse: in vitro and in vivo neuroregenerative functions // PLoS One. 2014. Vol. 9, N 11. P. e112339. doi: 10.1371/journal.pone.0112339.
8. Donega V., Nijboer C.H., van Tilborg G., Dijkhuizen R.M., Kavelaars A., Heijnen C.J. Intranasally administered mesenchymal stem cells promote a regenerative niche for repair of neonatal ischemic brain injury // Exp. Neurol. 2014. Vol. 261. P. 53-64.
9.
Frey W.H.2nd. Method of administering neurologic agents to the brain. US Patent 5624898 A; April 29, 1997.
10. Frey W.H.2nd., Danielyan L., Gleiter C.H. Methods, pharmaceutical compositions and articles of manufacture for administering therapeutic cells to the animal central nervous system. US Patent 8283160 B2; October 9, 2012.
11. Khan A., Imam S.S., Aqil M., Ahad A., Sultana Y., Ali A., Khan K. Brain targeting of temozolomide via the intranasal route using lipid-based nanoparticles: brain pharmacokinetic and scintigraphic analyses // Mol. Pharm. 2016. Vol. 13, N 11. P. 3773-3782.
12. Kumar S., Ali J., Baboota S. Design Expert(®) supported optimization and predictive analysis of selegiline nano­emulsion via the olfactory region with enhanced behavioural performance in Parkinson’s disease // Nanotechnology. 2016. Vol. 27, N 43. ID 435101 435101. doi: 10.1088/0957-4484/27/43/435101.
13. McGowan J.W., Shao Q., Vig P.J., Bidwell G.L.3rd. Intranasal administration of elastin-like polypeptide for therapeutic delivery to the central nervous system // Drug Des. Dev. Ther. 2016. Vol. 10. P. 2803-2813.
14. Nag S. Morphology and molecular properties of cellular components of normal cerebral vessels // The blood-brain barrier / Ed. S.Nag. 2003. Toronto.
15. Narayan R., Singh M., Ranjan O., Nayak Y., Garg S., Shavi G.V., Nayak U.Y. Development of risperidone liposomes for brain targeting through intranasal route // Life Sci. 2016. Vol. 163. P. 38-45.
16. Nour S.A., Abdelmalak N.S., Naguib M.J., Rashed H.M., Ibrahim A.B. Intranasal brain-targeted clonazepam polymeric micelles for immediate control of status epilepticus: in vitro optimization, ex vivo determination of cytotoxicity, in vivo biodistribution and pharmacodynamics studies // Drug Deliv. 2016. Vol. 23, N 9. P. 3681-3695.
17. Pardridge W.M. Why is the global CNS pharmaceutical market so under-penetrated? // Drug Discov. Today. 2002. Vol. 7, N 1. P. 5-7.
18. Wei Z.Z., Gu X., Ferdinand A., Lee J.H., Ji X., Ji X.M., Yu S.P., Wei L. Intranasal delivery of bone marrow mesenchymal stem cells improved neurovascular regeneration and rescued neuropsychiatric deficits after neonatal stroke in rats // Cell Transplant. 2015. Vol. 24, N 3. P. 391-402.
19. Wei N., Yu S.P., Gu X., Taylor T.M., Song D., Liu X.F., Wei L. Delayed intranasal delivery of hypoxic-preconditioned bone marrow mesenchymal stem cells enhanced cell homing and therapeutic benefits after ischemic stroke in mice // Cell Transplant. 2013. Vol. 22, N 6. P. 977-991.
20. Weiss N., Miller F., Cazaubon S., Couraud P.O. The blood-brain barrier in brain homeostasis and neurological diseases // Biochim. Biophys. Acta. 2009. Vol. 1788, N 4. P. 842-857.