info@iramn.ru
com@iramn.ru
bbm.ktbm@gmail.com



КЛЕТОЧНЫЕ  ТЕХНОЛОГИИ  В  БИОЛОГИИ  И  МЕДИЦИНЕ

2017 г., № 2

 СОДЕРЖАНИЕ

Сокультивирование с мезенхимальными стромальными клетками пупочного канатика человека поддерживает жизнеспособность кроветворных стволовых клеток пуповинной крови, но не “стволовость” их потомков
Ю.А.Романов*,***, Н.Е.Волгина**, Е.Е.Балашова***, Н.В.Кабаева*, Т.Н.Дугина***, Г.Т.Сухих** – 71
*ФГБУ РКНПК Минздрава РФ, Москва; **ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава РФ, Москва; ***Банк пуповинной крови “КриоЦентр”, Москва, РФ
В совместной культуре мезенхимальных стромальных клеток пупочного канатика и ядросодержащих клеток пуповинной крови человека исследованы особенности межклеточных взаимодействий и способность мезенхимальных стромальных клеток поддерживать экспансию кроветворных клеток-предшественников. Установлено, что гемопоэтические стволовые клетки пуповинной крови способны адгезировать к мезенхимальным стромальным клеткам и пролиферировать на протяжении 3-4 нед сокультивирования. Однако, несмотря на формирование островков кроветворения и увеличение в прикрепленной фракции доли CD34+ и CD133+ клеток, способность не связанных с мезенхимальными стромальными клетками новообразованных клеток к формированию колоний в полужидкой среде существенно снижается. Полученные данные свидетельствуют о том, что, несмотря на возможность длительного поддержания жизнеспособности и пролиферации клеток пуповинной крови, мезенхимальные стромальные клетки пупочного канатика человека обладают слабой способностью к поддержанию “стволовости” клеток-потомков гемопоэтических стволовых клеток.
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки, пупочный канатик, гемопоэтические стволовые клетки, пуповинная кровь, сокультивирование
Адрес для корреспонденции: romanov@cardio.ru. Романов Ю.А.
Литература
 1.          
Bai L., Li D., Li J., Luo Z., Yu S., Cao S., Shen L., Zuo Z., Ma X. Bioactive molecules derived from umbilical cord mesenchymal stem cells // Acta Histochem. 2016. Vol. 118, N 8. P. 761-769
2.           Bakhshi T., Zabriskie R.C., Bodie S., Kidd S., Ramin S., Paganessi L.A., Gregory S.A., Fung H.C., Christopherson K.W. 2nd. Mesenchymal stem cells from the Wharton’s jelly of umbilical cord segments provide stromal support for the maintenance of cord blood hematopoietic stem cells during long-term ex vivo culture // Transfusion. 2008. Vol. 48, N 12. P. 2638-2644.
 3.           Ballen K.K., Gluckman E., Broxmeyer H.E. Umbilical cord blood transplantation: the first 25 years and beyond // Blood. 2013. Vol. 122, N 4. P. 491-498.
4.            Beksac M. Is there any reason to prefer cord blood instead of adult donors for hematopoietic stem cell transplants? // Front. Med. (Lausanne). 2016. Vol. 2. P. 95. doi: 10.3389/fmed.2015.00095.
 5.           Broxmeyer H.E. Umbilical cord transplantation: epilogue // Semin. Hematol. 2010. Vol. 47, N 1. P. 97-103.
6.           Flores-Guzmán P., Fernández-Sánchez V., Mayani H. Concise review: ex vivo expansion of cord blood-derived hematopoietic stem and progenitor cells: basic principles, experimental approaches, and impact in regenerative medicine // Stem Cells Transl. Med. 2013. Vol. 2, N 11. P. 830-838.
 7.           Gluckman E., Broxmeyer H.A., Auerbach A.D., Friedman H.S., Douglas G.W., Devergie A., Esperou H., Thierry D., Socie G., Lehn P., Cooper S., English D., Kurtzberg J., Bard J., BoyseE.A. Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA-identical sibling // N. Engl. J. Med. 1989. Vol. 26, N 321, N 17. P. 1174-1178.
8.           Gluckman E., Rocha V. Cord blood transplantation: state of the art // Haematologica. 2009. Vol. 94, N 4. P. 451-454.
9.           Kalaszczynska I., Ferdyn K. Wharton's jelly derived mesenchymal stem cells: future of regenerative medicine? Recent findings and clinical significance // Biomed. Res. Int. 2015. Vol. 2015. ID 430847. doi: 10.1155/2015/430847.
10.         Kwon A., Kim Y., Kim M., Kim J., Choi H., Jekarl D.W., Lee S., Kim J.M., Shin J.C., Park I.Y. Tissue-specific differentiation potency of mesenchymal stromal cells from perinatal tissues // Sci. Rep. 2016. Vol. 6. ID 23544. doi: 10.1038/srep23544.
11.         Maslova E.V., Andreeva E.R., Andrianova I.V., Bobyleva P.I., Romanov Y.A., Kabaeva N.V., Balashova E.E., Ryaskina S.S., Dugina T.N., Buravkova L.B. Enrichment of umbilical cord blood mononuclears with hemopoietic precursors in co-culture with mesenchymal stromal cells from human adipose tissue // Bull. Exp. Biol. Med. 2014. Vol. 156, N 4. P. 584-589.
12.          Metheny L., Caimi P., de Lima M. Cord blood transplantation: can we make it better? // Front. Oncol. 2013. Vol. 3. P. 238. doi: 10.3389/fonc.2013.00238.
13.          Pires A.O., Mendes-Pinheiro B., Teixeira F.G., Anjo S.I., Ribeiro-Samy S., Gomes E.D., Serra S.C., Silva N.A., Manadas B., Sousa N., Salgado A.J. Unveiling the differences of secretome of human bone marrow mesenchymal stem cells, adipose tissue-derived stem cells, and human umbilical cord perivascular cells: A proteomic analysis // Stem Cells Dev. 2016. Vol. 25, N 14. P. 1073-1083.
14.         Romanov Y.A., Balashova E.E., Bystrykh O.A., Titkov K.V., Dugina T.N., Kabaeva N.V., Fedorova T.A., Rogachevskii O.V., Degtyarev D.N., Sukhikh G.T. Umbilical cord blood for autologous transfusion in the early postnatal ontogeny: analysis of cell composition and viability during long-term culturing // Bull. Exp. Biol. Med. 2015. Vol. 158, N 4. P. 523-527.
15.         Romanov Y.A., Balashova E.E., Volgina N.E., Kabaeva N.V., Dugina T.N., Sukhikh G.T. Changes in cell composition of umbilical cord blood and functional activity of hematopoietic stem cells during cryogenic storage and repeated freezing/thawing cycles // Bull. Exp. Biol. Med. 2016. Vol. 160, N 4. P. 571-574.
16.          Romanov Y.A., Balashova E.E., Volgina N.E., Kabaeva N.V., Dugina T.N., Sukhikh G.T. Isolation of multipotent mesenchymal stromal cells from cryopreserved human umbilical cord tissue // Bull. Exp. Biol. Med. 2016. Vol. 160, N 4. P. 530-534.
17.          Romanov Y.A., Balashova E.E., Volgina N.E., Kabaeva N.V., Dugina T.N., Sukhikh G.T. Optimized protocol for isolation of multipotent mesenchymal stromal cells from human umbilical cord // Bull. Exp. Biol. Med. 2015. Vol. 160, N 1. P. 148-154.
18.         Sotnezova E.V., Andreeva E.R., Grigoriev A.I., Buravkova L.B. Ex vivo expansion of hematopoietic stem and progenitor cells from umbilical cord blood // Acta Naturae. 2016. Vol. 8, N 3. P. 6-16.
19.         Sotnezova E.V., Gornostaeva A.N., Andreeva E.R., Romanov Y.A., Balashova E.E., Buravkova L.B. Effect of stromal cells and oxygen concentration on the maintenance of cord blood hematopoietic precursors // Tsitologiia. 2015. Vol. 57, N 6. P. 428-435.
20.          Walenda T., Bork S., Horn P., Wein F., Saffrich R., Diehlmann A., Eckstein V., Ho A.D., Wagner W. Co-culture with mesenchymal stromal cells increases proliferation and maintenance of haematopoietic progenitor cells // J. Cell. Mol. Med. 2010. Vol. 14, N 1-2. P. 337-350.
21.          Watson N., Divers R., Kedar R., Mehindru A., Mehindru A., Borlongan M.C., Borlongan C.V. Discarded Wharton jelly of the human umbilical cord: a viable source for mesenchymal stromal cells // Cytotherapy.
2015. Vol. 17, N 1. P. 18-24.

Влияние провоспалительных факторов на нейропротективную эффективность мультипотентных мезенхимных стромальных клеток при черепно-мозговой травме
Т.И.Данилина1, Д.Н.Силачёв2,3, И.Б.Певзнер2,3, М.В.Гуляев4, Ю.А.Пирогов4, Л.Д.Зорова2,3,5, Е.Ю.Плотников2,3, Г.Т.Сухих3, Д.Б.Зоров2,3 77
1Факультет биоинженерии и биоинформатики МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; 2Институт физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; 3ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава РФ, Москва; 4Лаборатория магнитной томографии и спектроскопии факультета фундаментальной медицины МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; 5Международный лазерный научный центр МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
Оценивали нейропротективный потенциал мультипотентных мезенхимных стромальных клеток при черепно-мозговой травме и влияние воспалительного прекондиционирования на нейропротективные свойства стволо­вых клеток в условиях in vitro. Исследовали влияние инкубации клеток с ЛПС или их сокультивирования с лей­коцитами на продукцию в них цитокинов IL-1a, IL-6, TNFa и MMP-2 и MMP-9. Культивирование в условиях, моделирующих воспаление, увеличивает продукцию всех этих факторов в мультипотентных мезенхимных стромальных клетках. Однако приобретение стромальными клетками воспалительного фенотипа не приводило к снижению их терапевтической эффективности при черепно-мозговой травме. Более того, при некоторых вари­ан­тах воспалительного прекондиционирования мультипотентные мезенхимные стромальные клетки проявляли более выраженные нейропротективные свойства, снижая объем повреждения головного мозга и ускоряя восстановление неврологических функций после черепно-мозговой травмы.
Ключевые слова: мезенхимные стволовые клетки, воспаление, нейропротекция, цитокины
Адрес для корреспонденции: plotnikov@genebee.msu.ru. Плотников Е.Ю.
Литература
 1.          
Anton K., Banerjee D., Glod J. Macrophage-associated mesenchymal stem cells assume an activated, migratory, pro-inflammatory phenotype with increased IL-6 and CXCL10 secretion // PLoS One. 2012. Vol. 7, N 4. P. e35036. doi: 10.1371/journal.pone.0035036.
 2.           Boltze J., Arnold A., Walczak P., Jolkkonen J., Cui L., Wagner D.C. The dark side of the force — constraints and complications of cell therapies for stroke // Front. Neurol. 2015. Vol. 6. P. 155. doi: 10.3389/fneur.2015.00155.
 3.           De Ryck M., Van Reempts J., Borgers M., Wauquier A., Janssen P.A. Photochemical stroke model: flunarizine prevents sensorimotor deficits after neocortical infarcts in rats // Stroke. 1989. Vol. 20, N 10. P. 1383-1390.
 4.           English K. Mechanisms of mesenchymal stromal cell immunomodulation // Immunol. Cell Biol. 2013. Vol. 91, N 1. P. 19-26.
 5.           Hsuan Y.C., Lin C.H., Chang C.P., Lin M.T. Mesenchymal stem cell-based treatments for stroke, neural trauma, and heat stroke // Brain Behav. 2016. Vol. 6, N 10. P. e00526.
 6.           Keating A. Mesenchymal stromal cells: new directions // Cell Stem Cell. 2012. Vol. 10, N 6. P. 709-716.
 7.           McKee C.A., Lukens J.R. Emerging Roles for the Immune System in Traumatic Brain Injury // Front. Immunol. 2016. Vol. 7. P. 556.
 8.           Najar M., Raicevic G., Fayyad-Kazan H., Bron D., Toungouz M., Lagneaux L. Mesenchymal stromal cells and immunomodulation: a gathering of regulatory immune cells // Cytotherapy. 2016. Vol. 18, N 2. P. 160-171.
9.           Plotnikov E.Y., Pulkova N.V., Pevzner I.B., Zorova L.D., Silachev D.N., Morosanova M.A., Sukhikh G.T., Zorov D.B. Inflammatory pre-conditioning of mesenchymal multipotent stromal cells improves their immunomodulatory potency in acute pyelonephritis in rats // Cytotherapy. 2013. Vol. 15, N 6. P. 679-689.
10.          Poltavtseva R.A., Silachev D.N., Pavlovich S.V., Kesova M.I., Yarygin K.N., Lupatov A.Y., Van’ko L.V., Shuvalova M.P., Sukhikh G.T. Neuroprotective effect of mesenchymal and neural stem and progenitor cells on sensorimotor recovery after brain injury // Bull. Exp. Biol. Med. 2012. Vol. 153, N 4. P. 586-590.
11.          Romieu-Mourez R., François M., Boivin M.N., Bouchentouf M., Spaner D.E., Galipeau J. Cytokine modulation of TLR expression and activation in mesenchymal stromal cells leads to a proinflammatory phenotype // J. Immunol. 2009. Vol. 182, N 12. P. 7963-7973.
12.          Shichita T., Ito M., Yoshimura A. Post-ischemic inflammation regulates neural damage and protection // Front. Cell Neurosci. 2014. Vol. 8. P. 319. doi: 10.3389/fncel.2014.00319.
13.          Silachev D.N., Plotnikov E.Y., Babenko V.A., Danilina T.I., Zorov L.D., Pevzner I.B., Zorov D.B., Sukhikh G.T. Intra-arterial administration of multipotent mesenchymal stromal cells promotes functional recovery of the brain after traumatic brain injury // Bull. Exp. Biol. Med. 2015. Vol. 159, N 4. P. 528-533.
14.          Silachev D.N., Uchevatkin A.A., Pirogov Y.A., Zorov D.B., Isaev N.K. Comparative evaluation of two methods for studies of experimental focal ischemia: magnetic resonance tomography and triphenyltetrazoleum detection of brain injuries // Bull. Exp. Biol. Med. 2009. Vol. 147, N 2. P. 269-272.
15.          Tomchuck S.L., Zwezdaryk K.J., Coffelt S.B., Waterman R.S., Danka E.S., Scandurro A.B. Toll-like receptors on human mesenchymal stem cells drive their migration and immunomodulating responses // Stem Cells.
2008. Vol. 26, N 1. P. 99-107.

Получение индуцированных плюрипотентных клеток из стромальных клеток печени пациентов с алкогольным циррозом
И.В.Холоденко, Р.В.Холоденко*, Г.В.Манукьян**, А.Ю.Лупатов, К.Н.Ярыгин – 85
ФГБНУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва, РФ;*ФГБУН Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва, РФ; **ФГБНУ Российский научный центр хирургии им. акад. Б.В.Петровского, Москва, РФ
Стромальные клетки печени, полученные из биоптатов печени пациента с алкогольным циррозом, способны длительное время пролиферировать в культуре, претерпевая более 30 пассажей. При пассировании стромаль­ных клеток печени наблюдались следующие особенности: увеличение скорости пролиферации, снижение экспрессии ряда маркеров и потеря способности дифференцироваться в гепатогенном направлении. Из этих клеток (на 30-м пассаже) получена культура индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Проведен сравнительный анализ дифференцировки полученных и исходных клеток в адипогенном и гепатогенном направлении. Дифференцировка индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в обоих направлениях проходила со значительно большей эффективностью и за более короткий срок, чем исходных клеток. В условиях гепатогенной дифференцировки стромальные клетки печени начинали экспрессировать маркеры дефинитивной эндодермы, но не маркеры незрелых/зрелых гепатоцитов, тогда как полученные из них индуцированные плюрипотентные стволовые клетки последовательно экспрессировали маркеры дефинитивной эндодермы, незрелых/зрелых гепатоцитов.
Ключевые слова: стромальные клетки печени, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, гепатогенная дифференцировка, адипогенная дифференцировка, алкогольный цирроз
Адрес для корреспонденции: irkhol@yandex.ru. Холоденко И.В.
Литература
 1.           Бурунова В.В., Гисина А.М., Холоденко И.В., Лупатов А.Ю., Шрагина О.А., Ярыгин К.Н. Стандартизация биохимического профиля клеточных материалов мезенхимального происхождения методом зондирования уровня дегидрогеназной активности // Клет. технол. в биол. и мед. 2010. № 2. С. 63-67.
2.           Вдовин А.С., Лупатов А.Ю., Холоденко И.В., Ярыгин К.Н. Сравнение эффективности репрограммирования фибробластов человека при помощи вирусной трансдукции и эписомальной трансфекции // Клет. технол. в биол. и мед. 2015. № 3. С. 149-154.
3.          Кониева А.А., Холоденко И.В., Шрагина О.А., Холоденко Р.В., Бурунова В.В., Бибаева Л.В., Ярыгин К.Н., Ярыгин В.Н. Функциональная оценка мезенхимальных стволовых клеток, меченных магнитными микрочастицами, in vitro и анализ их распределения в организме после трансплантации // Клет. технол. в биол. и мед. 2010. № 3. С. 147-152.
4.           Холоденко И.В., Холоденко Р.В., Манукян Г.В., Бурунова В.В., Ярыгин К.Н. Мезенхимально-эпителиальный переход в культуре стромальных прогениторных клеток, выделенных из биоптата печени пациента с алкогольным циррозом // Клет. технол. в биол. и мед. 2016. № 3. С. 147-151.
5.          Холоденко И.В., Холоденко Р.В., Манукьян Г.В., Ярыгин К.Н. Гепатогенная дифференцировка стромальных клеток взрослой и фетальной печени in vitro // Биомедицинская химия.
2016. Т. 62, № 6. С. 674-682.
6.          Caldwell S., Park S.H. The epidemiology of hepatocellular cancer: from the perspectives of public health problem to tumor biology // J. Gastroenterol. 2009. Vol. 44, Suppl. 19. P. 96-101.
7.          D’Amico G., Garcia-Tsao G., Pagliaro L. Natural history and prognostic indicators of survival in cirrhosis: a systematic review of 118 studies // J. Hepatol. 2006. Vol. 44, N 1. P. 217-231.
 8.           Dhawan A., Puppi J., Hughes R.D., Mitry R.R. Human hepatocyte transplantation: current experience and future challenges // Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol. 2010. Vol. 7, N 5. P. 288-298.
 9.           Duncan S.A. Mechanisms controlling early development of the liver // Mech. Dev. 2003. Vol. 120, N 1. P. 19-33.
10.           Kamiya A., Kinoshita T., Miyajima A. Oncostatin M and hepatocyte growth factor induce hepatic maturation via distinct signaling pathways // FEBS Lett. 2001. Vol. 492, N 1‑2. P. 90-94.
11.           Raab S., Klingenstein M., Liebau S., Linta L. A comparative view on human somatic cell sources for iPSC generation // Stem Cells Int. 2014. Vol. ID 768391. doi: 10.1155/2014/768391.
12.           Rojas A., Schachterle W., Xu S.M., Martín F., Black B.L. Direct transcriptional regulation of Gata4 during early endoderm specification is controlled by FoxA2 binding to an intronic enhancer // Dev. Biol. 2010. Vol. 346, N 2. P. 346-355.
13.          Sauer V., Roy-Chowdhury N., Guha C., Roy-Chowdhury J. Induced pluripotent stem cells as a source of hepatocytes // Curr. Pathobiol. Rep. 2014. Vol. 2, N 1. P. 11-20.
14.          Si-Tayeb K., Noto F.K., Nagaoka M., Li J., Battle M.A., Duris C., North P.E., Dalton S., Duncan S.A. Highly efficient generation of human hepatocyte-like cells from induced pluripotent stem cells // Hepatology. 2010. Vol. 51, N 1. P. 297-305.
15.          Sund N.J., Ang S.L., Sackett S.D., Shen W., Daigle N., Magnuson M.A., Kaestner K.H. Hepatocyte nuclear factor 3beta (Foxa2) is dispensable for maintaining the differentiated state of the adult hepatocyte // Mol. Cell. Biol. 2000. Vol. 20, N 14. P. 5175-5183.
16.         Walesky C., Apte U. Role of hepatocyte nuclear factor 4a (HNF4a) in cell proliferation and cancer // Gene Expr. 2015.
Vol. 16, N 3. P. 101-108.

Пролиферация лимфоцитов периферической крови и мезенхимных стромальных клеток из вартонова студня в смешанных и мембранно-разделенных культурах
А.М.Полтавцев, Р.А.Полтавцева*, М.Н.Юшина*, С.В.Павлович*, Е.В.Свирщевская** – 93
Институт прикладной механики РАН, Москва, РФ; *ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава РФ, Москва; **ФГБУН Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва, РФ
Исследовали влияние мезенхимных стромальных клеток на пролиферацию CFSE-окрашенных Т-клеток в сме­шанных и мембранно-разделенных (Transwell) культурах, а также в 3D-культуре мезенхимных стромальных клеток из вартонова студня. Показано, что взаимодействие мезенхимных стромальных клеток с митогенакти­вированными лимфоцитами периферической крови аллогенного донора приводит к подавлению пролиферации Т-клеток в широком диапазоне соотношений клеток. Культивирование в Transwell-системе показало отсутствие супрессии как по оценке доли пролиферирующих клеток, так и при анализе клеточного цикла. С помощью 3D-культур показано контактное взаимодействие мезенхимных стромальных клеток и лимфоцитов, что приводит к накоплению лимфоцитов в G2/M, а мезенхимных стромальных клеток — в G0/G1 цикле деления. Показано существование двух механизмов супрессорного действия мезенхимных стромальных клеток из вартонова студня. Эффекты реализуются в течение 6 сут, что позволяет предположить наличие терапевтического действия мезенхимных стромальных клеток до момента их полной элиминации из организма.
Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, лимфоциты периферической крови, Transwell-культуры, многоклеточные сфероиды, клеточный цикл
Адрес для корреспонденции: esvir@mx.ibch.ru. Свирщевская Е.В.
Литература

 1.           Свирщевская Е.В., Полтавцева Р.А., Белецкий И.П., Селезнёва И.И., Сухих Г.Т. Антипролиферативное действие мезенхимных стволовых клеток и эпителиальных клеток на лимфоциты // Бюл. экспер. биол.
2016. Т. 161, № 4. C. 508-512.
 2.           Ciccocioppo R., Cangemi G.C., Kruzliak P., Gallia A., Betti E., Badulli C., Martinetti M., Cervio M., Pecci A., Bozzi V., Dionigi P., Visai L., Gurrado A., Alvisi C., Picone C., Monti M., Bernardo M.E., Gobbi P., Corazza G.R. Ex vivo immunosuppressive effects of mesenchymal stem cells on Crohn’s disease mucosal T cells are largely dependent on indoleamine 2,3-dioxygenase activity and cell-cell contact // Stem Cell Res. Ther. 2015. Vol. 6. P. 137.
 3.           English K., Tonlorenzi R., Cossu G., Wood K.J. Mesoangioblasts suppress T cell proliferation through IDO and PGE-2‑dependent pathways // Stem Cells Dev. 2013. Vol. 22, N 3. P. 512-523.
 4.           Fayyad-Kazan H., Faour W.H., Badran B., Lagneaux L., Najar M. The immunomodulatory properties of human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells are defined according to multiple immunobiological criteria // Inflamm. Res. 2016. Vol. 65, N 6. P. 501-510.
5.           Gauthaman K., Yee F.C., Cheyyatraivendran S., Biswas A., Choolani M., Bongso A. Human umbilical cord Wharton’s jelly stem cell (hWJSC) extracts inhibit cancer cell growth in vitro // J. Cell. Biochem. 2012. Vol. 113, N 6. P. 2027-2039.
6.          He H., Nagamura-Inoue T., Takahashi A., Mori Y., Yamamoto Y., Shimazu T., Tsunoda H., Tojo A. Immunosuppressive properties of Wharton’s jelly-derived mesenchymal stromal cells in vitro // Int. J. Hematol. 2015. Vol. 102, N 3. P. 368-378.
7.          Hu J., Zhang X., Zhou L., Zhang Y. Immunomodulatory properties of colonic mesenchymal stem cells // Immunol. Lett. 2013. Vol. 156, N 1-2. P. 23-29.
 8.           Krampera M., Cosmi L., Angeli R., Pasini A., Liotta F., Andreini A., Santarlasci V., Mazzinghi B., Pizzolo G., Vinante F., Romagnani P., Maggi E., Romagnani S., Annunziato F. Role for interferon-gamma in the immunomodulatory activity of human bone marrow mesenchymal stem cells // Stem Cells. 2006. Vol. 24, N 2. P. 386-398.
9.          Le Blanc K., Rasmusson I., Götherström C., Seidel C., Sundberg B., Sundin M., Rosendahl K., Tammik C., Ringdén O. Mesenchymal stem cells inhibit the expression of CD25 (interleukin-2 receptor) and CD38 on phytohaemagglutinin-activated lymphocytes // Scand. J. Immunol. 2004. Vol. 60, N 3. P. 307-315.
10.            Li Y., Qu Y.H., Wu Y.F., Liu L., Lin X.H., Huang K., Wei J. Bone marrow mesenchymal stem cells suppressing activation of allogeneic cytokine-induced killer/natural killer cells either by direct or indirect interaction // Cell Biol. Int. 2015. Vol. 39, N 4. P. 435-445.
11.            Najar M., Raicevic G., Boufker H.I., Fayyad Kazan H., De Bruyn C., Meuleman N., Bron D., Toungouz M., Lagneaux L. Mesenchymal stromal cells use PGE2 to modulate activation and proliferation of lymphocyte subsets: combined comparison of adipose tissue, Wharton’s jelly and bone marrow sources // Cell. Immunol. 2010. Vol. 264, N 2. P. 171-179.
12.           Ramasamy R., Tong C.K., Seow H.F., Vidyadaran S., Dazzi F. The immunosuppressive effects of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells target T cell proliferation but not its effector function // Cell. Immunol. 2008. Vol. 251, N 2. P. 131-136.
13.          Rasmusson I., Ringdén O., Sundberg B., Le Blanc K. Mesenchymal stem cells inhibit the formation of cytotoxic T lymphocytes, but not activated cytotoxic T lymphocytes or natural killer cells // Transplantation. 2003. Vol. 76, N 8. P. 1208-1213.
14.           Spaggiari G.M., Capobianco A., Becchetti S., Mingari M.C., Moretta L. Mesenchymal stem cell-natural killer cell interactions: evidence that activated NK cells are capable of killing MSCs, whereas MSCs can inhibit IL-2-induced NK-cell proliferation // Blood. 2006. Vol. 107, N 4. P. 1484-1490.
15.          Vellasamy S., Sandrasaigaran P., Vidyadaran S., Abdullah M., George E., Ramasamy R. Mesenchymal stem cells of human placenta and umbilical cord suppress T-cell proliferation at G0 phase of cell cycle // Cell Biol. Int. 2013. Vol. 37, N 3. P. 250-256.
16.          Yang H., Sun J., Li Y., Duan W.M., Bi J., Qu T. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells suppress proliferation of PHA-activated lymphocytes in vitro by inducing CD4(+) CD25(high)CD45RA(+) regulatory T cell production and modulating cytokine secretion // Cell. Immunol. 2016. Vol. 302. P. 26-31.
17.           Yildirim S., Zibandeh N., Genc D., Ozcan E.M., Goker K., Akkoc T. The comparison of the immunologic properties of stem cells isolated from human exfoliated deciduous teeth, dental pulp, and dental follicles // Stem Cells Int. 2016.
Vol. 2016. id 4682875. doi: 10.1155/2016/4682875.

Трипептиды восстанавливают количество шипиков нейронов в модели болезни Альцгеймера in vitro
Н.А.Красковская*, Е.О.Куканова**, Н.С.Линькова*,**, Е.А.Попугаева*, В.Х.Хавинсон**,*** – 101
*ФГАОУ ВО Санкт-Петербургский государственный политехнический университет, Санкт-Петербург, РФ; **Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, РФ; ***Институт физиологии им. И.П.Павлова РАН, Санкт-Петербург, РФ
В первичной культуре нейронов гиппокампа мышей в условиях амилоидной синаптотоксичности (модель бо­лезни Альцгеймера) пептид EDR в концентрации 200 нг/мл повышал количество грибовидных шипиков ней­ронов (на 71%) до уровня нормы. Трипептид KED в концентрации 200 нг/мл повышал количество грибовидных шипиков в культуре нейронов гиппокампа в модели болезни Альцгеймера на 20%. Трипептид EDR может быть рекомендован для дальнейшего экспериментального изучения с целью создания нейропротективного средства для профилактики и лечения болезни Альцгеймера.
Ключевые слова: болезнь Альцгеймера, трипептиды, дендритные шипики, бета-амилоид, культура нейронов гиппокампа
Адрес для корреспонденции: miayy@yandex.ru. Линькова Н.С.
Литература
1.            Башкирева А.С., Артамонова В.Г. Пептидергическая коррекция невротических состояний у водителей грузового автотранспорта // Успехи геронтологии. 2012. Т. 25, № 4. С. 718-728.
2.           Умнов Р.С., Линькова Н.С., Хавинсон В.Х. Нейропротекторные эффекты пептидных биорегуляторов у людей разного возраста: обзор литературы // Успехи геронтологии. 2013. Т. 26, № 4. С. 671-678.
3.           Хавинсон В.Х., Кузник Б.И., Рыжак Г.А. Пептидные биорегуляторы — новый класс геропротекторов. Сообщение 2. Результаты клинических исследований // Успехи геронтологии. 2013. Т. 26, № 1. С. 20-37.
4.           Хавинсон В.Х., Линькова Н.С., Елашкина Е.В., Дурнова А.О., Козлов К.Л., Гутоп Е.О. Молекулярные аспекты антиатеросклеротического действия коротких пептидов // Клет. технол. в биол. и мед. 2014.
№ 3. С. 185-189.
5.           Arutjunyan A., Kozina L., Stvolinskiy S., Bulygina Y., Mashkina A., Khavinson V. Pinealon protects the rat offspring from prenatal hyperhomocysteinemia // Int J. Clin. Exp. Med. 2012. Vol. 5, N 2. P. 179-185.
 6.           Borlikova G.G., Trejo M., Mably A.J., Mc Donald J.M., Sala Frigerio C., Regan C.M., Murphy K.J., Masliah E., Walsh D.M. Alzheimer brain-derived amyloid b-protein impairs synaptic remodeling and memory consolidation // Neurobiol. Aging. 2013. Vol. 34, N 5. P. 1315-1327.
7.           Bourne J., Harris K.M. Do thin spines learn to be mushroom spines that remember? // Curr. Opin. Neurobiol. 2007. Vol. 17, N 3. P. 381-386.
8.          Bourne J.N., Harris K.M. Balancing structure and function at hippocampal dendritic spines // Annu. Rev. Neurosci. 2008. Vol. 31. P. 47-67.
9.           Brookmeyer R., Johnson E., Ziegler-Graham K., Arrighi H.M. Forecasting the global burden of Alzheimer’s disease // Alzheimers Dement. 2007. Vol. 3, N 3. P. 186-191.
10.         Penzes P., Cahill M.E., Jones K.A., VanLeeuwen J.E., Woolfrey K.M. Dendritic spine pathology in neuropsychiatric disorders // Nat. Neurosci. 2011. Vol. 14, N 3. P. 285-293.
11.         Popugaeva E., Pchitskaya E., Speshilova A., Alexandrov S., Zhang H., Vlasova O., Bezprozvanny I. STIM2 protects hippocampal mushroom spines from amyloid synaptotoxicity // Mol. Neurodegener. 2015. Vol. 10. P. 37. doi: 10.1186/s13024-015-0034-7.
12.          Rodriguez A., Ehlenberger D.B., Dickstein D.L., Hof P.R., Wearne S.L. Automated three-dimensional detection and shape classification of dendritic spines from fluorescence microscopy images // PLoS One. 2008. Vol. 3, N 4. P. e1997. doi: 10.1371/journal.pone.0001997.
13.          Sun S., Zhang H., Liu J., Popugaeva E., Xu N.J., Feske S., White C.L. 3rd, Bezprozvanny I. Reduced synaptic STIM2 expression and impaired store-operated calcium entry cause destabilization of mature spines in mutant presenilin mice // Neuron. 2014. Vol. 82, N 1. P. 79-93.
14.          Wei Z.H., He Q.B., Wang H., Su B.H., Chen H.Z. Meta-analysis: the efficacy of nootropic agent Cerebrolysin in the treatment of Alzheimer’s disease // J. Neural Transm.
(Vienna). 2007. Vol. 114, N 5. P. 629-634.

Возможность усиления склероза тканей после инъекции мезенхимных мультипотентных стромальных клеток в область формирующегося рубца в эксперименте
И.В.Майбородин, В.В.Морозов, А.А.Аникеев, Н.Ф.Фигуренко, Р.В.Маслов, В.А.Матвеева, Г.А.Частикин, В.И.Майбородина* – 105
Центр новых медицинских технологий (зав. — проф. А.И.Шевела) ФГБУН Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, РФ; *Лаборатория ультраструктурных основ патологии (зав. — проф. Д.Е.Семенов) ФГБНУ Института молекулярной патологии и патоморфологии, Новосибирск, РФ
Методами световой микроскопии с применением люминесценции изучали особенности склероза тканей после вве­дения под кожу в области лигированной бедренной вены крыс аутологичных мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костномозгового происхождения с трансфицированным геном GFP и дополнительно окрашенными Vybrant CM-Dil клеточными мембранами. Хирургическое вмешательство, связанное с перевязыванием магистральной вены, сопровождалось склеротической трансформацией тканей, обусловленной прямым повреждением и хроническим воспалением, вызванным присутствием медленно деградируемой лигатуры. Введение стромальных клеток после такой операции приводит к формированию более обширного рубца. По-видимому, существует вероятность как дифференцировки стромальных клеток в клетки соединительной ткани — фибробласты, так и стимуляции пролиферации и синтеза коллагена собственными фибробластами. В отдаленные сроки после воздействия не исключено уменьшение объема плотной волокнистой соединительной ткани из-за реорганизации рубца.
Ключевые слова: мультипотентные мезенхимные стромальные клетки, склероз, фибробласты, флюоресценция фибробластов
Адрес для корреспонденции: imai@mail.ru. Майбородин И.В.
Литература
1.            Кузнецова И.В., Майбородин И.В., Шевела А.И., Баранник М.И., Манаев А.А., Бромбин А.И., Майбородина В.И. Реакция окружающих тканей на имплантацию абсорбируемых шовных материалов // Бюл. экспер. биол. 2014. Т. 157, № 3. С. 375-380.
 2.           Майбородин И.В., Морозов В.В., Маркевич Я.В., Матвеева В.А., Артемьева Л.В., Матвеев А.Л., Частикин Г.А., Серяпина Ю.В. Усиление ангиогенеза после паравазального введения мезенхимных стволовых клеток на фоне тромбированной вены в эксперименте // Клет. технол. в биол. и мед. 2015. № 1. С. 15-20.
3.           Майбородин И.В., Морозов В.В., Матвеева В.А., Шевела А.И., Аникеев А.А., Фигуренко Н.Ф., Маслов Р.В., Частикин Г.А. Восстановление кровотока в конечности после лигирования магистральной вены при использовании клеточных технологий в эксперименте // Флебология.
2016. Т. 10, № 3. С. 126-136.
4.            Bi Z.M., Zhou Q.F., Geng Y., Zhang H.M. Human umbilical cord mesenchymal stem cells ameliorate experimental cirrhosis through activation of keratinocyte growth factor by suppressing microRNA-199 // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 2016. Vol. 20, N 23. P. 4905-4912.
5.           Cahill E.F., Kennelly H., Carty F., Mahon B.P., English K. Hepatocyte growth factor is required for mesenchymal stromal cell protection against bleomycin-induced pulmonary fibrosis // Stem Cells Transl. Med. 2016. Vol. 5, N 10. P. 1307-1318.
6.            Cahill E.F., Sax T., Hartmann I., Haffner S., Holler E., Holler B., Huss R., Günther C., Parolini O., Kolch W., Eissner G. Mesenchymal stromal cells protect endothelial cells from cytotoxic T lymphocyte-induced lysis // Scand. J. Immunol. 2016. Vol. 84, N 3. P. 158-164.
7.           Chai N.L., Zhang X.B., Chen S.W., Fan K.X., Linghu E.Q. Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells alleviate liver fibrosis in rats // World J. Gastroenterol. 2016. Vol. 22, N 26. P. 6036-6048.
8.          Elhusseini F.M., Saad M.A., Anber N., Elghannam D., Sobh M.A., Alsayed A., El-Dusoky S., Sheashaa H., Abdel-Ghaffar H., Sobh M. Long term study of protective mechanisms of human adipose derived mesenchymal stem cells on cisplatin induced kidney injury in Sprague-Dawley rats // J. Stem Cells Regen. Med. 2016. Vol. 12, N 1. P. 36-48.
9.          Fu K., Xu Q., Czernuszka J., McKenna C.E., Ebetino F.H., Russell R.G., Triffitt J.T., Xia Z. Prolonged osteogenesis from human mesenchymal stem cells implanted in immunodeficient mice by using coralline hydroxyapatite incorporating rhBMP2 microspheres // J. Biomed. Mater. Res. A. 2010. Vol. 92, N 4. P. 1256-1264.
10.         Haldar D., Henderson N.C., Hirschfield G., Newsome P.N. Mesenchymal stromal cells and liver fibrosis: a complicated relationship // FASEB J. 2016. Vol. 30, N 12. P. 3905-3928.
11.         Hasegawa N., Kawaguchi H., Hirachi A., Takeda K., Mizuno N., Nishimura M., Koike C., Tsuji K., Iba H., Kato Y., Kurihara H. Behavior of transplanted bone marrow-derived mesenchymal stem cells in periodontal defects // J. Periodontol. 2006. Vol. 77, N 6. P. 1003-1007.
12.         Hu X., Yu S.P., Fraser J.L., Lu Z., Ogle M.E., Wang J.A., Wei L. Transplantation of hypoxia-preconditioned mesenchymal stem cells improves infarcted heart function via enhanced survival of implanted cells and angiogenesis // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2008. Vol. 135, N 4. P. 799-808.
13.          Kamihata H., Matsubara H., Nishiue T., Fujiyama S., Tsutsumi Y., Ozono R., Masaki H., Mori Y., Iba O., Tateishi E., Kosaki A., Shintani S., Murohara T., Imaizumi T., Iwasaka T. Implantation of bone marrow mononuclear cells into ischemic myocardium enhances collateral perfusion and regional function via side supply of angioblasts, angiogenic ligands, and cytokines // Circulation. 2001. Vol. 104, N 9. P. 1046-1052.
14.          Li Y., Zhang W., Gao J., Liu J., Wang H., Li J., Yang X., He T., Guan H., Zheng Z., Han S., Dong M., Han J., Shi J., Hu D. Adipose tissue-derived stem cells suppress hypertrophic scar fibrosis via the p38/MAPK signaling pathway // Stem Cell Res. Ther. 2016. Vol. 7, N 1. P. 102.
15.          Takahashi M., Li T.S., Suzuki R., Kobayashi T., Ito H., Ikeda Y., Matsuzaki M., Hamano K. Cytokines produced by bone marrow cells can contribute to functional improvement of the infarcted heart by protecting cardiomyocytes from ischemic injury // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2006. Vol. 291, N 2. P. H886-H893.

Избирательная цитотоксичность наночастиц марганца в отношении клеток глиобластом человека
И.А.Разумов, Е.Л.Завьялов, С.Ю.Троицкий*, А.В.Ромащенко, Д.В.Петровский, К.Е.Купер**, М.П.Мошкин114
ФГБУН ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, РФ; *ФГБУН Институт катализа им. Г.К.Борескова СО РАН, Новосибирск, РФ; **ФГБУН Институт ядерной физики им. Г.И.Будкера СО РАН, Новосибирск, РФ
С помощью MTT-теста была определена токсичность разных типов наночастиц марганца в отношении опухолевых клеток глиобластомы U-87MG и U-251 и нормальных клеток человека. Избирательность токсического действия оценивали как отношение 50% цитотоксической концентрации (СС50) для клеток фибробластов эмбрионов человека (ФЭЧ-15) к СС50 для опухолевых клеток. Избирательное токсическое действие in vitro было выявлено у 5 из 6 образцов исследуемых наночастиц. Максимальным индексом избирательности обладали наночастицы оксида марганца (СС50 6.9 нМ для клеток U-87MG и 2.1 нМ для U-251) — 29 и 95.2 для клеток глиобластом U-87MG и U-251 соответственно. Наночастицы оксида марганца, применяемые для выявления глиом при МРТ-исследованиях, могут быть использованы для разработки онколитического агента для лечения глиальных опухолей человека.
Ключевые слова: глиобластома, U-87MG, U-251, наночастицы марганца, MTT-тест
Адрес для корреспонденции: razumov@bionet.nsc.ru. Разумов И.А.
Литература
1.          Завьялов Е.Л., Разумов И.А., Герлинская Л.А., Ромащенко А.В. In vivo МРТ-визуализация динамики развития глиобластомы U87 в модели ортотопической ксенотрансплантации мышам линии SCID // Вавиловский журнал генетики и селекции. 2015. Т. 19, № 4. С. 460-465.
2.          Зайцева Н.В., Землянова М.А., Звездин В.Н., Акафьева Т.И., Мазунина Д.Л., Довбыш А.А. Эффекты субхронической экспозиции наночастиц оксида марганца на центральную нервную систему, перекисное окисление липидов и ферменты антиоксидантной системы крыс // Анализ риска здоровью. 2014. № 4. С. 66-77.
 3.           Лисяный Н.И., Лисяный А.Н. Стволовые опухолевые клетки злокачественных глиальных опухолей мозга // Онкология. 2010. Т. 12, № 3. С. 229-236.
 4.          Пиотровский Л.Б. Наномедицина как часть нанотехнологий // Вестник РАМН. 2010. № 3. С. 41-46.
5.          Трещалина Е.М, Жукова О.С., Герасимова Г.К., Гарин А.М., Смирнова А.С. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р
.У.Хабриева. М., 2000. С. 319-325.
 6.           Arvizo R.R., Miranda O.R., Moyano D.F., Walden C.A., Giri K., Bhattacharya R., Robertson J.D., Rotello V.M., Reid J.M., Mukherjee P. Modulating pharmacokinetics, tumor uptake and biodistribution by engineered nanoparticles // PLoS One. 2011. Vol. 6, N 9. P. e24374. doi: 10.1371/journal.pone. 0024374.
7.          Chen Z.W., Lai J.K.L. , Shek C.H. Nucleation site and mechanism leading to growth of bulk-quantity Mn3O4 nanorods // Appl. Phys. Lett. 2005. Vol. 86, N 18. ID 181911. doi:10.1063/1.1923753.
 8.           Hanley C., Layne J., Punnoose A., Reddy K.M., Coombs I., Coombs A., Feris K., Wingett D. Preferential killing of cancer cells and activated human T cells using ZnO nanoparticles // Nanotechnology. 2008 Vol. 19, N 29. ID 295103. doi: 10.1088/0957-4484/19/29/295103.
9.          Hernández-Pedro N.Y., Rangel-López E., Magaña-Maldonado R., de la Cruz V.P., del Angel A.S., Pineda B., Sotelo J. Application of nanoparticles on diagnosis and therapy in gliomas // Biomed. Res. Int. 2013. Vol. 2013. ID 351031. doi: 10.1155/2013/351031.
10.          Karim R., Palazzo C., Evrard B., Piel G. Nanocarriers for the treatment of glioblastoma multiforme: Current state-of-the-art // J. Control. Release. 2016. Vol. 227. P. 23-37.
11.          Moshkin M.P., Petrovski D.V., Akulov A.E., Romaschenko A.V., Gerlinskaya L.A., Muchnaya M.I., Ganimedov V.L., Sadovsky A.S., Savelov A.A., Koptyug I.V., Troitsky S.Yu., Bukhtiyarov V.I., Kolchanov N.A., Sagdeyev R.Z., Fomin V.M. Aerosol deposition in nasal passages of burrowing and ground rodents when breathing dust-laden air // Zh. Obshch. Biol. 2014. Vol. 75, N 3. P. 214-225.
12.          Mytych J., Wnuk M. Nanoparticle technology as a double-edged sword: cytotoxic, genotoxic and epigenetic effects on living cells // J. Biomater. Nanobiotechnol. 2013. Vol. 4. P. 53-63. http://dx.doi.org/10.4236/jbnb.2013.41008.
13.          Nam J., Won N., Bang J., Jin H., Park J., Jung S., Jung S., Park Y., Kim S. Surface engineering of inorganic nanoparticles for imaging and therapy // Adv. Drug Deliv. Rev. 2013. Vol. 65, N 5. P. 622-648.
14.          Niks M., Otto M. Towards an optimized MTT assay // J. Immunol. Methods. 1990. Vol. 130, N 1. P. 149-151.
15.          Raliya R., Singh Chadha T., Haddad K., Biswas P. Perspective on nanoparticle technology for biomedical use // Curr. Pharm. Des. 2016. Vol. 22, N 17. P. 2481-2490.
16.           Ring C.J. Cytolytic viruses as potential anti-cancer agents // J. Gen. Virol. 2002. Vol. 83, Pt 3. P. 491-502.
17.           Schladt T.D., Schneider K., Shukoor M.I., Natalio F., Bauer H., Tahir M.N., Weber S., Schreiber L.M., Schröder H.C., Müller W.E., Tremel W. Highly soluble multifunctional MnO nanoparticles for simultaneous optical and MRI imaging and cancer treatment using photodynamic therapy // J. Mater. Chem. 2010. Vol. 20, N 38. P. 8297. doi: 10.1039/c0jm01465f.
18.           Smith L., Kuncic Z., Ostrikov K., Kumar S. Nanoparticles in cancer imaging and therapy // J. Nanomaterials. 2012. Vol. 2012. ID 891318. http://dx.doi.org/10.1155/2012/891318.
19.          Stupp R., Hegi M.E., Gilbert M.R., Chakravarti A. Chemoradiotherapy in malignant glioma: standard of care and future directions // J. Clin. Oncol. 2007. Vol. 25, N 26. P. 4127-4136.
20.          Wicki A., Witzigmann D., Balasubramanian V., Huwyler J. Nanomedicine in cancer therapy: challenges, opportunities, and clinical applications // J. Control.
Release. 2015. Vol. 200. P. 138-157.

Экспрессия сигнальных молекул в культуре эндотелия человека при атеросклерозе и рестенозе
К.Л.Козлов*, И.И.Болотов*, Н.С.Линькова*,**, А.О.Дробинцева*** – 119
*Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, РФ; **ФГАОУ ВО Санкт-Петербургский государственный политехнический университет, Санкт-Петербург, РФ; ***ФГБУ НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О.Отта, Санкт-Петербург, РФ
Проводили сравнительный анализ экспрессии сигнальных молекул в культуре эндотелия человека в норме и при атеросклерозе и рестенозе. В культуре клеток эндотелия человека в норме экспрессия коннексина-37 и сиртуина-1 была в 2 и 5 раз ниже, чем при атеросклерозе и рестенозе. При этом в эндотелии при атеросклерозе и рестенозе экспрессия эндотелина-1 была в 3 раза выше по сравнению с нормой. Кроме того, изменение экспрессии коннексина-37 и эндотелина-1 усугублялось при рестенозе по сравнению с атеросклерозом. Коннексин-37 и эндотелин-1 могут являться предиктивными маркерами для оценки прогноза осложнений у пациентов с атеросклерозом после постановки стента.
Ключевые слова: атеросклероз, рестеноз, эндотелий сосудов, культура клеток
Адрес для корреспонденции: miayy@yandex.ru. Линькова Н.С.
Литература
1.           Билецкий С.В. Эндотелиальная дисфункция и патология сердечно-сосудистой системы // Внутренняя медицина. 2008. Т. 2, № 8. С. 134-139.
2.           Гаврилова Н.Е., Метельская В.А., Перова Н.В., Яровая Е.Б., Мазаев В.П., Уразалина С.Ж., Бойцов С.А. Взаимосвязь между выраженностью коронарного атеросклероза, факторами риска и маркерами атеросклеротического поражения каротидных и периферических артерий // Кардиоваск. тер. и проф. 2013. Т. 12, № 1. С. 40-45.
3.          Данилов Н.М., Горгадзе Т.Т., Савченко А.П., Чазова И.Е. Факторы риска рестеноза после коронарного стентирования у больных с метаболическим синдромом // Кардиоваск. тер. и проф. 2007. Т. 6, № 2. С. 71-74.
4.          Хавинсон В.Х., Линькова Н.С., Елашкина Е.В., Дурнова А.О., Козлов К.Л., Гутоп Е.О. Молекулярные аспекты антиатеросклеротического действия коротких пептидов // Клет. технол. в биол. и мед. 2014. № 3. С. 185-189.
5.          Хавинсон В.Х., Линькова Н.С., Морозова Е.А., Гутоп Е.О., Елашкина Е.В. Молекулярные механизмы сердечно-сосудистой патологии // Успехи физиол. наук.
2014. Т. 45, № 3. С. 57-65.
6.          Chen J., Xavier S., Moskowitz-Kassai E., Chen R., Lu C.Y., Sanduski K., Špes A., Turk B., Goligorsky M.S. Cathepsin cleavage of sirtuin 1 in endothelial progenitor cells mediates stress-induced premature senescence // Am. J. Pathol. 2012. Vol. 180, N 3. P. 973-983.
7.          Donato A.J., Magerko K.A., Lawson B.R., Durrant J.R., Lesniewski L.A., Seals D.R. SIRT-1 and vascular endothelial dysfunction with ageing in mice and humans // J. Physiol. 2011. Vol. 589, Pt 18. P. 4545-4554.
 8.           Pitha J., Hubáček J.A., Pithová P. The connexin 37 (1019C>T) gene polymorphism is associated with subclinical atherosclerosis in women with type 1 and 2 diabetes and in women with central obesity // Physiol. Res. 2010. Vol. 59, N 6. P. 1029-1032.
9.           Pogoda K., Füller M., Pohl U., Kameritsch P. NO, via its target Cx37, modulates calcium signal propagation selectively at myoendothelial gap junctions // Cell Commun. Signal. 2014. Vol. 12. P. 33. doi: 10.1186/1478-811X-12-33.
10.          Ruan Y., Dong C., Patel J., Duan C., Wang X., Wu X., Cao Y., Pu L., Lu D., Shen T., Li J. SIRT1 suppresses doxorubicin-induced cardiotoxicity by regulating the oxidative stress and p38MAPK pathways // Cell. Physiol. Biochem. 2015. Vol. 35, N 3. P. 1116-1124.
11.           Saez J.C., Berthoud V.M., Branes M.C., Martinez A.D., Beyer E.C. Plasma membrane channels formed by connexins: their regulation and functions // Physiol. Rev. 2003. Vol. 83, N 4. P. 1359-1400.
12.           Yang Y., Guo S.X., Yang Z.Y., Zhang T., Cao H.M., Wang R.X. Association between 1019C/T polymorphism of Connexin 37 gene and restenosis after coronary stenting // Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2013. Vol. 30, N 4. P. 456-460.
13.           Yin H., Wang X.H., Zhu X.D., Han H., Guo W.Y., Ful Z.R. A tissue engineered renovascular graft composed of proteins, polymers, smooth muscle and endothelial cells for renal artery stenosis // J. Biomed. Nanotechnol. 2013. Vol. 9, N 8. P. 1345-1353.
14.           Yang H., Xu J.X., Kong X.Z., Ren Z.G., Xia Z.Y., Qu H.Q., Wang L.X. Relations between plasma von Willebrand factor or endo­thelin-1 and restenosis following carotid artery stenting // Med.
Princ. Pract. 2012. Vol. 21, N 6. P. 538-542.

Уровень пероксида водорода в клетках линии HeLa в озонированной среде
К.Н.Конторщикова, А.С.Белова*, В.В.Дуденкова*, А.Г.Орлова*, И.Г.Терентьев, С.Н.Цыбусов, А.В.Алясова –123
ФГБОУ ВО Нижегородская государственная медицинская академия Минздрава РФ,
Нижний Новгород; *ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт прикладной физики РАН, Нижний Новгород, РФ
Исследовали участие пероксида водорода в ответе опухолевых клеток на обработку озонированной культуральной средой. Методом флюоресцентной микроскопии с использованием генетически кодируемого сенсора HyPer2 выявлены изменения уровня пероксида водорода при инкубации опухолевых клеток в озонированной культуральной среде. Изменения флюоресцентных свойств сенсора, отражающие повышение содержания пер­оксида водорода в цитоплазме клеток, были выявлены в первые 70 мин от начала воздействия. Содержание данной молекулы продолжало постепенно повышаться вплоть до 375-й минуты. Выявленные изменения свидетельствуют об участии пероксида водорода в клеточной реакции на озонирование.
Ключевые слова: озон, клетки линии HeLa Kyoto, пероксид водорода, сенсор HyPer2
Адрес для корреспонденции: kontclin@mail.ru. Конторщикова К.Н.
Литература
 1.           Алясова А.В., Ведунова М.В., Мищенко Т.А., Терентьев И.Г., Цыбусов С.Н., Конторщикова К.Н. Влияние озона и доксорубицина на жизнеспособность и морфологию злокачественных клеток печени // Современ. технол. в мед. 2016. Т. 8, № 2. С. 84-89.
 2.           Алясова А.В., Конторщикова К.Н., Терентьев И.Г., Иванова И.П., Кузнецов С.С., Сазанов А.И. Влияние низких терапевтических концентраций озонированного физиологического раствора на терапевтический патоморфоз опухоли в эксперименте // Современ. технол. в мед. 2010. № 4. С. 27-32.
3.           Алясова А.В., Конторщикова К.Н., Шахов Б.Е. Озоновые технологии в лечении злокачественных опухолей. Н.Новгород, 2006.
4.          Масленников О.В., Конторщикова К.Н., Шахов Б.Е. Руководство по озонотерапии. Н.Новгород, 2015.
 5.          Разумовский С.Д., Заиков Г.Е. Озон и его реакции с органическими соединениями. М
., 1974.
 6.           Belousov V.V., Fradkov A.F., Lukyanov K.A., Staroverov D.B., Shakhbazov K.S., Terskikh A.V., Lukyanov S. Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide // Nat. Methods. 2006. Vol. 3, N 4. P. 281-286.
 7.           Belova A.S., Orlova A.G., Balalaeva I.V., Antonova N.O., Maslennikova A.V., Mishina N.M., Zagaynova E.V. Hydrogen peroxide detection in viable and apoptotic tumor cells under action of cisplatin and bleomycin // Photonics and Lasers in Medicine. 2016. Vol. 5, N 2. P. 113-121.
 8.           Bocci V., Borrelli E., Travagli V., Zanardi I. The ozone paradox: ozone is a strong oxidant as well as a medical drug // Med. Res. Rev. 2009. Vol. 29, N 4. P. 646-682.
9.            Markvicheva K.N., Bilan D.S., Mishina N.M., Gorokhovatsky A.Y., Vinokurov L.M., Lukyanov S., Belousov V.V. A genetically encoded sensor for H2O2 with expanded dynamic range // Bioorg. Med. Chem. 2011. Vol. 19, N 3. P. 1079-1084.
10.          Poburko D., Santo-Domingo J., Demaurex N. Dynamic regulation of the mitochondrial proton gradient during cytosolic calcium elevations // J. Biol. Chem. 2011. Vol. 286, N 13. P. 11 672-11 684.
11.          Shirmanova M.V., Druzhkova I.N., Lukina M.M., Matlashov M.E., Belousov V.V., Snopova L.B., Prodanetz N.N., Dudenkova V.V., Lukyanov S.A., Zagaynova E.V. Intracellular pH imaging in cancer cells in vitro and tumors in vivo using the new genetically encoded sensor SypHer2 // Biochim. Biophys. Acta. 2015. Vol. 1850, N 9. P. 1905-1911.
12.          Valacchi G., Bocci V. Studies on the biological effects of ozone: 11. Release of factors from human endothelial cells // Mediators Inflamm. 2000. Vol. 9, N 6.
P. 271-276.

Репрограммирование клеток ретинального пигментного эпителия человека под влиянием bFGF in vitro
Е.В.Шафеи, А.М.Куринов, А.В.Кузнецова, М.А.Александрова – 128
ФГБУН Институт биологии развития им. Н.К.Кольцова РАН, Москва, РФ
Изучали влияние bFGF на репрограммирование клеток ретинального пигментного эпителия человека in vitro. В клетках линии ARPE-19 после добавления bFGF отмечено увеличение экспрессии мРНК KLF4 и снижение экспрессии мРНК PAX6, MITF и OTX2 — специфичных для ретинального пигментного эпителия. Самый высокий уровень экспрессии мРНК KLF4 отмечен через 72 ч после добавления bFGF, затем он резко снижался, что сопровождалось 3-кратным увеличением экспрессии мРНК TUBB3, нейронального маркера. Иммуноцитохимическое исследование показало, что под влиянием bFGF часть клеток сохраняла эпителиальные свойства и окрашивалась на коннексин-43, а другая — имела длинные аксоноподобные отростки и окрашивалась на bIII-тубулин, что свидетельствует о трансдифференцировке по нейрональному пути. Несмотря на доминирование эпителиальных свойств, клетки ARPE-19 под влиянием bFGF способны проявлять пронейрональные свойства.
Ключевые слова: ретинальный пигментный эпителий, ARPE-19, bFGF, нейрональная дифференцировка, иммуноцитохимия
Адрес для корреспонденции: mariaaleks@inbox.ru. Александрова М.А.
Литература
1.          Кузнецова А.В., Милюшина Л.А., Микаелян А.С., Зиновьева Р.Д., Григорян Э.Н., Александрова М.А. Дедифференцировка клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека in vitro // Мол. мед. 2010.
№ 6. С. 23-29.
2.          Akrami H., Soheili Z.S., Khalooghi K., Ahmadieh H., Rezaie-Kanavi M., Samiei S., Davari M., Ghaderi S., Sanie-Jahromi F. Retinal pigment epithelium culture;a potential source of retinal stem cells // J. Ophthalmic Vis. Res. 2009. Vol. 4, N 3. P. 134-141.
3.          Azuma N., Tadokoro K., Asaka A., Yamada M., Yamaguchi Y., Handa H., Matsushima S., Watanabe T., Kohsaka S., Kida Y., Shiraishi T., Ogura T., Shimamura K., Nakafuku M. The Pax6 isoform bearing an alternative spliced exon promotes the development of the neural retinal structure // Hum. Mol. Genet. 2005. Vol. 14, N 6. P. 735-745.
4.           Bharti K., Nguyen M.T., Skuntz S., Bertuzzi S., Arnheiter H. The other pigment cell: specification and development of the pigmented epithelium of the vertebrate eye // Pigment Cell Res. 2006. Vol. 19, N 5. P. 380-394.
5.          Carr A.J., Vugler A.A., Yu L., Semo M., Coffey P., Moss S.E., Greenwood J. The expression of retinal cell markers in human retinal pigment epithelial cells and their augmentation by the synthetic retinoid fenretinide // Mol. Vis. 2011. Vol. 17. P. 1701-1715.
 6.           Chen S., Fariss R.N., Kutty R.K., Nelson R., Wiggert B. Fenretinide-induced neuronal differentiation of ARPE-19 human retinal pigment epithelial cells is associated with the differential expression of Hsp70, 14-3-3, pax-6, tubulin beta-III, NSE, and bag-1 proteins // Mol. Vis. 2006. Vol. 12. P. 1355-1363.
 7.           Dunn K.C., Aotaki-Keen A.E., Putkey F.R., Hjelmeland L.M. ARPE-19, a human retinal pigment epithelial cell line with differentiated properties // Exp. Eye Res. 1996. Vol. 62, N 2. P. 155-169.
8.          Eguizabal C., Montserrat N., Veiga A., Izpisua Belmonte J.C. Dedifferentiation, transdifferentiation, and reprogramming: future directions in regenerative medicine // Semin. Reprod. Med. 2013. Vol. 31, N 1. P. 82-94.
9.          Fang J., Shaw P.X., Wang Y., Goldberg J.L. Krüppel-Like Factor 4 (KLF4) is not required for retinal cell differentiation // eNeuro. 2016. Vol. 3, N 1. pii: ENEURO.0117-15.2016. doi: 10.1523/ENEURO.0117-15.2016.
10.         Grigorian E.N. Competence factors of retinal pigment epithelium cells for reprogramming in the neuronal direction during retinal regeneration in newts // Izv. Akad. Nauk. Ser. Biol. 2015. N 1. P. 5-16.
11.         Grigoryan E.N., Markitantova Y.V., Avdonin P.P., Radugina E.A. Study of regeneration in amphibians in age of molecular-genetic approaches and methods // Genetika. 2013. Vol. 49, N 1. P. 55-72.
12.          Kojima A., Nakahama K., Ohno-Matsui K., Shimada N., Mori K., Iseki S., Sato T., Mochizuki M., Morita I. Connexin 43 contributes to differentiation of retinal pigment epithelial cells via cyclic AMP signaling // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2008. Vol. 366, N 2. P. 532-538.
13.          Kuznetsova A.V., Aleksandrova M.A., Kurinov A.M., Chentsova E.V., Makarov P.V. Plasticity of adult human retinal pigment epithelial cells // Int. J. Clin. Exp. 2016. Vol. 9, N 11. P. 20 892‑20 906.
14.          Kuznetsova A.V., Aleksandrova M.A. Heterogeneity of retinal pigment epithelial cells from adult human eye in different culturing systems // Bull. Exp. Biol. Med. 2017. Vol. 162, N 4. P. 569-577.
15.          Kuznetsova A.V., Kurinov A.M., Aleksandrova M.A. Cell models to study regulation of cell transformation in pathologies of retinal pigment epithelium // J. Ophthalmol. 2014. Vol. 2014. ID 801787. doi: 10.1155/2014/801787.
16.          Lotz S., Goderie S., Tokas N., Hirsch S.E., Ahmad F., Corneo B., Le S., Banerjee A., Kane R.S., Stern J.H., Temple S., Fasano C.A. Sustained levels of FGF2 maintain undifferentiated stem cell cultures with biweekly feeding // PLoS One. 2013. Vol. 8, N 2. P. e56289. doi: 10.1371/journal.pone.0056289.
17.          Luz-Madrigal A., Grajales-Esquivel E., McCorkle A., DiLorenzo A.M., Barbosa-Sabanero K., Tsonis P.A., Del Rio-Tsonis K. Reprogramming of the chick retinal pigmented epithelium after retinal injury // BMC Biol. 2014. Vol. 12. P. 28. doi: 10.1186/1741-7007-12-28.
18.          Martinez-Morales J.R., Del Bene F., Nica G., Hammerschmidt M., Bovolenta P., Wittbrodt J. Differentiation of the vertebrate retina is coordinated by an FGF signaling center // Dev. Cell. 2005. Vol. 8, N 4. P. 565-574.
19.          Milyushina L.A., Kuznetsova A.V., Grigoryan E.N., Aleksandrova M.A. Phenotypic plasticity of retinal pigment epithelial cells from adult human eye in vitro // Bull. Exp. Biol. Med. 2011. Vol. 151, N 4. P. 506-511.
20.           Milyushina L.A., Poltavtseva R.A., Marei M.V., Podgornyi O.V., Sukhikh G.T., Aleksandrova M.A. In vitro phenotypic modification of pigmented epithelium cells from human eye at early stages of development // Bull. Exp. Biol. Med. 2009. Vol. 148, N 1. P. 113-119.
21.          Milyushina L.A., Verdiev B.I., Kuznetsova A.V., Aleksandrova M.A. Expression of multipotent and retinal markers in pigment epithelium of adult human in vitro // Bull. Exp. Biol. Med. 2012. Vol. 153, N 1. P. 157-162.
22.          Mochii M., Mazaki Y., Mizuno N., Hayashi H., Eguchi G. Role of Mitf in differentiation and transdifferentiation of chicken pigmented epithelial cell // Dev. Biol. 1998. Vol. 193, N 1. P. 47-62.
23.          Pittack C., Grunwald G.B., Reh T.A. Fibroblast growth factors are necessary for neural retina but not pigmented epithelium differentiation in chick embryos // Development. 1997. Vol. 124, N 4. P. 805-816.
24.          Sakaguchi D.S., Janick L.M., Reh T.A. Basic fibroblast growth factor (FGF-2) induced transdifferentiation of retinal pigment epithelium: generation of retinal neurons and glia // Dev. Dyn. 1997. Vol. 209, N 4. P. 387-398.
25.         Salero E., Blenkinsop T.A., Corneo B., Harris A., Rabin D., Stern J.H., Temple S. Adult human RPE can be activated into a multipotent stem cell that produces mesenchymal derivatives // Cell Stem Cell. 2012. Vol. 10, N 1. P. 88-95.
26.          Schwegler J.S., Knorz M.C., Akkoyun I., Liesenhoff H. Basic, not acidic fibroblast growth factor stimulates proliferation of cultured human retinal pigment epithelial cells // Mol. Vis. 1997. Vol. 3. P. 10.
27.          Sparrow J.R., Hicks D., Hamel C.P. The retinal pigment epithelium in health and disease // Curr. Mol. Med. 2010. Vol. 10, N 9. P. 802-823.
28.           Taranova O.V., Magness S.T., Fagan B.M., Wu Y., Surzenko N., Hutton S.R., Pevny L.H. SOX2 is a dose-dependent regulator of retinal neural progenitor competence // Genes Dev. 2006. Vol. 20, N 9. P. 1187-1202.
29.          Yan R.T., He L., Zhan W., Wang S.Z. Induction of ectopic retina-like tissue by transgenic expression of neurogenin // PLoS One. 2015. Vol. 10, N 1. P. e0116171. doi: 10.1371/journal.pone.0116171.
30.           Zhao S., Thornquist S.C., Barnstable C.J. In vitro transdifferentiation of embryonic rat retinal pigment epithelium to neural retina // Brain Res. 1995. Vol. 677, N 2. P. 300-310.