com@iramn.ru
 
bbm.ktbm@gmail.com



БЮЛЛЕТЕНЬ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЫ

2019 г., Том 167, № 3 МАРТ

 

СОДЕРЖАНИЕ

Физиология
Эндогенная опиоидная зависимость после периодического употребления 5% раствора этанола у крыс
С.К.Судаков, Н.Г.Богданова, Е.В.Алексеева, Г.А.Назарова – 268
ФГБНУ НИИ нормальной физиологии им. П.К.Анохина, Москва, РФ
         
Исследовали возможность формирования эндогенной опиоидной зависимости при периодическом употреблении крысами 5% раствора этанола. Во время эксперимента у животных контрольной группы вода находилась в обеих поилках. В опытной группе животным во второй поилке предоставляли 5% раствор этанола на 12 ч в день. Остальные 12 ч крысы опытной группы были лишены корма и раствора этанола. Такой режим потребления растворов соблюдался в течение 8 сут. На основании коэффициента предпочтения этанола были выделены две подгруппы крыс — предпочитающие потребление 5% раствора этанола и предпочитающие потребление воды. Лишение возможности потребления этанола и последующее введение налоксона приводило к появлению признаков синдрома отмены опиатов как у животных, предпочитающий этанол, так и у животных, предпочитающих воду. Сделано предположение о том, что при регулярном периодическом добровольном приеме слабого раствора этанола в течение 8 сут у крыс независимо от количества потребляемого этанола формируется эндогенная опиоидная зависимость.
Ключевые слова: этанол, вкусовое предпочтение, эндогенная опиоидная зависимость, синдром отмены, крысы Вистар
Адрес для корреспонденции: s-sudakov@nphys.ru. Судаков С.К.
Литература
1.            Судаков С.К. Механизмы “виртуального” подкрепления и действие психоактивных веществ // Вопросы наркологии.
2017. № 2-3. С. 109-116.
2.            Avena N.M., Bocarsly M.E., Rada P., Kim A., Hoebel B.G. After daily bingeing on a sucrose solution, food deprivation induces anxiety and accumbens dopamine/acetylcholine imbalance // Physiol. Behav. 2008. Vol. 94, 3. P. 309-315.
3.            Avena N.M., Rada P., Hoebel B.G. Evidence of sugar addiction: behavioral and neurochemical effects of intermittent, excessive sugar intake // Neurosci. Biobehav. Rev. 2008. Vol. 32, N 1. P. 20-39.
4.            Colantuoni C., Rada P., McCarthy J., Patten C., Avena N.M., Chadeayne A., Hoebel B.G. Evidence that intermittent, excessive sugar intake causes endogenouse opioi dependence // Obes. Res. 2002. Vol. 10, N 6. P. 478-488.
5.            Donaire R., Conrad S.E., Thompson J.B., Papini M.R., Torres C. Augmented voluntary consumption of ethanol induced by reward downshift increases locomotor activity of male Wistar rats in the elevated plus maze // Behav. Processes. 2018. Vol. 150. P. 59-65.
6.            Faget L., Osakada F., Duan J., Ressler R., Johnson A.B., Proudfoot J.A., Yoo J.H., Callaway E.M., Hnasko T.S. Afferent inputs to neurotransmitter-defined cell types in the ventral tegmental area // Cell Rep. 2016. Vol. 15, N 12. P. 2796-2808.
7.            Fields H.L., Hjelmstad G.O., Margolis E.B., Nicola S.M. Ventral tegmental area neurons in learned appetitive behavior and positive reinforcement // Annu. Rev. Neurosci. 2007. Vol. 30. P. 289-316.
8.            Goldstein A. Heroin addiction: neurobiology, pharmacology, and policy // J Psychoactive Drugs. 1991. Vol. 23, N 2. P. 123-133.
9.            Hoebel B.G., Avena N.M., Bocarsly M.E., Rada P. A behavioral and circuit model based on sugar addiction in rats // J. Addict. Med. 2009. Vol. 3, N 1. P. 33-41.
10.          Niikura K., Narita M., Okutsu D., Tsurukawa Y., Nanjo K., Kurahashi K., Kobayashi Y., Suzuki T. Implication of endogenous beta-endorphin in the inhibition of the morphine-induced rewarding effect by the direct activation of spinal protein kinase C in mice // Neurosci. Lett. 2008. Vol. 433, N 1. P. 54-58.
11.          Schultz W., Dayan P., Montague P.R. A neural substrate of prediction and reward // Science. 1997. Vol. 275. P. 1593-1599.
12.          Sudakov S.K., Konstantinopolsky M.A., Surkova L.A., Tyurina I.V., Borisova E.V. Evaluation of wistar rats’ individual sensitivity to the development of physical dependence on morphine // Drug Alcohol Depend. 1991. Vol. 29, N 1. P. 69-75.
13.          Tseng A., Nguyen K., Hamid A., Garg M., Marquez P., Lutfy K. The role of endogenous beta-endorphin and enkephalins in ethanol reward // Neuropharmacology. 2013. Vol. 73. P. 290-300.
14.          Van Ree J.M. Role of pituitary and related neuropeptides in alcoholism and pharmacodependence // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 1986. Vol. 10, N 2. P. 219-228.

Влияние переменного электрического тока на режим пульсирования магистральных артерий крысы in situ
С.В.Ревенко1, Л.Н.Тихомирова2, И.Ю.Гаврилов3, И.А.Тараканов2272
1Отдел физиологии (рук. — акад. Л.В.Розенштраух) НИИ экспериментальной кардиологии ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва; 2Лаборатория общей патологии кардиореспираторной системы (рук. — докт. биол. наук И.А.Тараканов) ФГБНУ НИИ общей патологии и патофизиологии, Москва, РФ; 3Отдел биоинженерных технологий и поддержки научных исследований (рук. — канд. биол. наук Е.Г.Попов) НИИ экспериментальной кардиологии ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва
         
В опытах на наркотизированных крысах одновременно регистрировали электропотенциал и электроимпеданс изолированного сегмента правой бедренной и/или сонной артерии in situ, отводимых с помощью двух неполяризующихся хлорсеребряных внеклеточных электродов, расположенных на расстоянии 4 мм вдоль артерии. Активный, пассивный и промежуточный режимы пульсирования артериального сегмента определяли по фазовым отношениям между его электроимпедансом и АД, одновременно измеренным в симметричном участке соответствующей левой артерии для оценки давления в изучаемом артериальном сегменте. Исследовали влияние амплитуды (0.2-2.0 мА) зондирующего переменного тока (100 кГц), используемого для измерения электроимпеданса, на режим пульсирования артериального сегмента. При начальном минимальном токе 0.2 мА этот режим был пассивным, отличающимся противофазными колебаниями электроимпеданса и АД. При повышении амплитуды до максимальной величины 2 мА эти колебания становились синфазными, указывая на переход артериального сегмента в активный режим работы. Этот переход сопровождался появлением импульса артериального электропотенциала во время фронта АД и увеличением размаха колебаний электроимпеданса по медиане в 11 раз с децильным разбросом 7-15 (n=28). При умеренной амплитуде зондирующего тока (0.3-0.5 мА) артериальный сегмент пульсировал в промежуточном режиме, при котором на фоне нарастающего АД наблюдали запоздалую активную констрикцию, недостаточную для противодействия растущему АД. Влияние переменного тока на режим пульсирования артерий объяснено на модели возбудимой мембраны, предсказывающей ее гиперполяризацию при пропускании через клетку переменного тока. Обсуждены перспективы нейротропного и ангиотропного лечебных воздействий переменным электрическим током.
Ключевые слова: бедренная и сонная артерии, активное и пассивное пульсирование артерий, переменный электрический ток, потенциал покоя гладких мышц, крыса
Адрес для корреспонденции: s_revenko@mail.ru. Ревенко С.В.
Литература
1.            Каталымов Л.Л. Возбудимость нервного ствола и одиночного перехвата Ранвье нервных волокон лягушки // Изв. АН СССР. Сер. Биол. 1978. № 2. С. 245-258.
2.            Мелькумянц А.М., Балашов С.А. Механочувствительность артериального эпителия. Тверь, 2005.
3.            Нестеров А.В., Гаврилов И.Ю., Селектор Л.Я., Мудрая И.С., Ревенко С.В. Фурье-анализ вариаций биоимпеданса пальца человека // Бюл. экспер. биол. 2010. Т. 150, № 7. С. 31-37.
4.            Ревенко С.В., Тихомирова Л.Н., Нестеров А.В., Тараканов И.А. Бимодальные электрические свойства сегмента магистральной артерии крысы in situ // Бюл. экспер. биол. 2017. Т. 164, № 12. С. 665-670.
5.            Смиешко В., Хаютин В.М., Герова М., Геро Я., Рогоза А.Н. Чувствительность малой артерии мышечного типа к скорости кровотока: реакция самоприспособления просвета артерии // Физиол. журн. СССР. 1979. Т. 65, № 2. С. 291-298.
6.            Ходоров Б.И. Общая физиология возбудимых мембран. М
., 1975.
7.            Ahn H.S., Vasylyev D.V., Estacion M., Macala L.J., Shah P., Faber C.G., Merkies I.S., Dib-Hajj S.D., Waxman S.G. Differential effect of D623N variant and wild-type Na(v)1.7 sodium channels on resting potential and interspike membrane potential of dorsal root ganglion neurons // Brain Res. 2013. Vol. 1529. P. 165-177.
8.            Cole K.S. Membranes, Ions and Impulses. University of California Press, Berkeley, 1968.
9.            Firth A.L., Remillard C.V., Platoshyn O., Fantozzi I., Ko E.A., Yuan J.X. Functional ion channels in human pulmonary smooth muscle cells: Voltage-dependent cation channels // Pulm. Circ. 2011. Vol. 1, N 1. P. 48-71.
10.          Hille B. Ion Channels of Excitable Membranes. Sunderland, 2001.
11.          Mudraya I.S., Revenko S.V., Nesterov A.V., Gavrilov I.Yu., Kirpatovsky V.I. Bioimpedance harmonic analysis as a tool to simultaneously assess circulation and nervous control // Physiol. Meas. 2011. Vol. 32, N 7. P. 959-976.
12.          Murphy R.A. Mechanics of vascular smooth muscle // Compr. Physiol. 2011. Suppl. 7. P. 325-351.
13.          Rhodin J.A.G. Architecture of the vessel wall // Compr. Physiol. 2014. Suppl. 7. P. 1-31.
14.          Sperelakis N. Electrical Equivalent Circuit for VSM Cells // Cell Physiology Source Book, 4th ed / Ed. E.Kaneshiro. N.Y., 2012. P. 949-956.
15.          Toro L., González-Robles A., Stefani E. Electrical properties and morphology of single vascular smooth muscle cells in culture // Am. J. Physiol.
1986. Vol. 251, N 5, Pt 1. P. C763-C773.

Депо-управляемый вход кальция в кардиомиоцитах мыши
К.О.Гусев, В.В.Вигонт, Д.А.Грехнев, А.В.Шалыгин, Л.Н.Глушанкова, Е.В.Казначеева – 279
Лаборатория ионных каналов клеточных мембран (зав. — д-р биол. наук Е.В.Казначеева) ФБГУН Института цитологии РАН, Санкт-Петербург, РФ
         
С помощью флюоресцентного красителя fura-2 АМ зарегистрирована активация входа Ca2+ в ответ на снижение концентрации Ca2+ в эндоплазматическом ретикулуме. Измерения с помощью метода фиксации потенциала на мембране выявили токи ионов Ca2+ через селективные каналы с вольтамперной характеристикой, подобной классическим депо-управляемым CRAC-каналам, и с амплитудой 0.46±0.13 пА/пФ. Данные токи были чувствительны к ингибитору депо-управляемых каналов 2-APB в концентрации 50 мкМ. Полученные результаты позволяют предположить, что депо-управляемый вход Ca2+ присутствует во взрослых вентрикулярных клетках сердца. Патологические изменения депо-управляемого входа Ca2+ могут быть вовлечены в развитие заболеваний сердца.
Ключевые слова: депо-управляемый вход кальция, кардиомиоциты, CRAC-каналы
Адрес для корреспонденции: k.o.gusev@gmail.com. Гусев К.О.
Литература
1.           
Bers D.M. Calcium fluxes involved in control of cardiac myoycytes contraction // Circ. Res. 2000. Vol. 87, N 4. P. 275-281.
2.            Ben-Kasus Nissim T., Zhang X., Elazar A., Roy S., Stolwijk J.A., Zhou Y., Motiani R.K., Gueguinou M., Hempel N., Hershfinkel M., Gill D.L., Trebak M., Sekler I. Mitochondria control store-operated Ca2+ entry through Na+ and redox signals // EMBO J. 2017. Vol. 36, N 6. P. 797-815.
3.            Desai P.N., Zhang X., Wu S., Janoshazi A., Bolimuntha S., Putney J.W., Trebak M. Multiple types of calcium channels arising from alternative translation initiation of the Orai1 message // Sci. Signal. 2015. Vol. 8, N 387. ID ra74. doi: 10.1126/scisignal.aaa8323.
4.            Gusev K., Niggli E. Modulation of the local SR Ca2+ release by intracellular Mg2+ in cardiac myocytes // J. Gen. Physiol. 2008. Vol. 132, N 6. P. 721-730.
5.            Hulot J.S., Fauconnier J., Ramanujam D., Chaanine A., Aubart F., Sassi Y., Merkle S., Cazorla O., Ouillé A., Dupuis M., Hadri L., Jeong D., Mühlstedt S., Schmitt J., Braun A., Bénard L., Saliba Y., Laggerbauer B., Nieswandt B., Lacampagne A., Hajjar R.J., Lompré A.M., Engelhardt S. Critical role for stromal interaction molecule 1 in cardiac hypertrophy // Circulation. 2011. Vol. 124, N 7. P. 796-805.
6.            Hunton D.L., Zou L., Pang Y., Marchase R.B. Adult rat cardiomyocytes exhibit capacitative calcium entry // Am. J. Physiol. Circ. Physiol. 2004. Vol. 286, N 3. P. H1124-H1132.
7.            Kojima A., Kitagawa H., Omatsu-Kanbe M., Matsuura H., Nosaka S. Presence of store-operated Ca2+ entry in C57BL/6J mouse ventricular myocytes and its suppression by sevoflurane // Br. J. Anaesth. 2012. Vol. 109, N 3. P. 352-360.
8.            Rousseau E., Meissner G. Single cardiac sarcoplasmic reticulum Ca2+-release channel: activation by caffeine // Am. J. Physiol. 1989. Vol. 256, N 2, Pt 2. P. H328-H333.
9.            Vigont V., Nekrasov E., Shalygin A., Gusev K., Klushnikov S., Illarioshkin S., Lagarkova M., Kiselev S.L., Kaznacheyeva E. Patient-specific iPSC-based models of Huntington's disease as a tool to study store-operated calcium entry drug targeting // Front. Pharmacol. 2018. Vol. 9. ID 696. doi: 10.3389/fphar.2018.00696.
10.          Zhao G., Li T., Brochet D.X., Rosenberg P.B., Lederer W.J. STIM1 enhances SR Ca2+ content through binding phospholamban in rat ventricular myocytes // Proc.
Natl Acad. Sci. 2015. Vol. 112, N 34. P. E4792-E4801.

Общая патология и патологическая физиология
Урокиназный рецептор регулирует адгезию прогениторных клеток сердца к витронектину
К.В.Дергилев1, З.И.Цоколаева1, И.Б.Белоглазова1, Е.С.Зубкова1, Е.И.Ратнер1, Ю.Д.Молокотина1, Е.В.Парфенова1,2 283
1Лаборатория ангиогенеза Института экспериментальной кардиологии ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва; 2Лаборатория постгеномных технологий в медицине факультета фундаментальной медицины МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
         
Белок внеклеточного матрикса витронектин играет важную роль в эмбриональном развитии, а также репарации органов и тканей. Уникальной особенностью витронектина является его способность специфически связывать различные биологические молекулы, включая урокиназный рецептор (uPAR), компоненты внеклеточного матрикса, рецепторы адгезии, ростовые факторы, обеспечивая модуляцию поведения клеток. Показано, что витронектин практически отсутствует в неповрежденном миокарде, и его количество значительной возрастает после инфаркта, что коррелирует с аккумуляцией uPAR+ прогениторных клеток сердца в зоне повреждения. Клетки, полученные из сердца мышей дикого типа, проявляли более выраженную способность к адгезии на витронектин, чем прогениторные клетки сердца из миокарда мышей, нокаутных по гену uPAR. Кроме того, ингибирование урокиназного рецептора специфическими антителами на поверхности прогениторных клеток сердца мышей дикого типа приводило к снижению их способности к адгезии и распластыванию на витронектиновом матриксе, что может быть важным для их распределения в постинфарктном миокарде и реализации репаративных функций.
Ключевые слова: урокиназный рецептор, витронектин, прогениторные клетки сердца, адгезия
Адрес для корреспонденции: doctorkote@gmail.com. Дергилев К.В.
Литература
1.            Дергилев К.В., Цоколаева З.И., Белоглазова И.Б., Зубкова Е.С., Болдырева М., Ратнер Е.И., Дыйканов Д.Т., Меньшиков М.Ю., Парфенова Е.В. Интрамиокардиальное введение резидентных c-kit+-прогениторных клеток сердца вызывает активацию прогениторных клеток эпикарда и стимулирует васкуляризацию миокарда после инфаркта // Гены и клетки.
2018. Т. 13, № 1. P. 75-81.
2.            Deng G., Curriden S.A., Wang S., Rosenberg S., Loskutoff  D.J. Is plasminogen activator inhibitor-1 the molecular switch that governs urokinase receptor-mediated cell adhesion and release? // J. Cell Biol. 1996. Vol. 134, N 6. P. 1563-1571.
3.            Dergilev K.V., Makarevich P.I., Tsokolaeva Z.I., Boldyreva M.A., Beloglazova I.B., Zubkova E.S., Menshikov M.Y., Parfyonova Y.V. Comparison of cardiac stem cell sheets detached by Versene solution and from thermoresponsive dishes reveals similar properties of constructs // Tissue Cell. 2017. Vol. 49, N 1. P. 64-71.
4.            Dergilev K.V., Rubina K.A., Parfenova E.V. Resident cardiac stem cells // Kardiologiia. 2011. Vol. 51, N 4. P. 84-92.
5.            Dergilev K.V., Rubina K.A., Tsokolaeva Z.I., Sysoeva V.Iu., Gmyzina A.I., Kalinina N.I., Beliavskaia T.M., Akchurin R.S., Parfenova E.V., Tkachuk V.A. Left ventricular heart aneurism — a new source of resident cardiac stem cells // Tsitologiia. 2010. Vol. 52, N 11. P. 921-930.
6.            Dergilev K., Tsokolaeva Z., Beloglazova I., Zubkova E., Parfyonova Ye. Urokinase expression is induced in healing myocardial infarcts and may regulate cardiac stem cell proliferation // FEBS Open Bio. 2018. Vol. 8, Suppl. S1. P. 156-157.
7.            Dergilev K., Tsokolaeva Z., Makarevich P., Beloglazova I., Zubkova E., Boldyreva M., Ratner E., Dyikanov D., Menshikov M., Ovchinnikov A., Ageev F., Parfyonova Y. C-kit cardiac progenitor cell based cell sheet improves vascularization and attenuates cardiac remodeling following myocardial infarction in rats // Biomed. Res. Int. 2018. Vol. 2018. ID 3536854. doi: 10.1155/2018/3536854.
8.            Dergilev K.V., Tsokolaeva Z.I., Rubina K.A., Sysoeva V.Y., Makarevich P.I., Boldyreva M.A., Beloglazova I.B., Zubkova E.S., Sharonov G.V., Akchurin R.S., Parfyonova Y.V. Isolation and characterization of cardiac progenitor cells obtaining from myocardial right atrial appendage tissue // Tsitologiia. 2016. Vol. 58, N 5. P. 340-348.
9.            Ferraris G.M., Schulte C., Buttiglione V., De Lorenzi V., Piontini A., Galluzzi M., Podestà A., Madsen C.D., Sidenius N. The interaction between uPAR and vitronectin triggers ligand-independent adhesion signalling by integrins // EMBO J. 2014. Vol. 33, N 21. P. 2458-2472.
10.          Hynes R.O. Integrins: versatility, modulation, and signaling in cell adhesion // Cell. 1992. Vol. 69, N 1. P. 11-25.
11.          Kjøller L., Hall A. Rac mediates cytoskeletal rearrangements and increased cell motility induced by urokinase-type plasminogen activator receptor binding to vitronectin // J. Cell Biol. 2001. Vol. 152, N 6. P. 1145-1157.
12.          Madsen C.D., Ferraris G.M., Andolfo A., Cunningham O., Sidenius N. uPAR-induced cell adhesion and migration: vitronectin provides the key // J. Cell Biol. 2007. Vol. 177, N 5. P. 927-939.
13.          Montuori N., Pesapane A., Rossi F.W., Giudice V., De Paulis A., Selleri C., Ragno P. Urokinase type plasminogen activator receptor (uPAR) as a new therapeutic target in cancer // Transl. Med. UniSa. 2016. Vol. 15. P. 15-21.
14.          Myöhänen H.T., Stephens R.W., Hedman K., Tapiovaara H., Rønne E., Høyer-Hansen G., Danø K., Vaheri A. Distribution and lateral mobility of the urokinase-receptor complex at the cell surface // J. Histochem. Cytochem. 1993. Vol. 41, N 9. P. 1291-301.
15.          Wei Y., Waltz D.A., Rao N., Drummond R.J., Rosenberg S., Chapman H.A. Identification of the urokinase receptor as an adhesion receptor for vitronectin // J. Biol.
Chem. 1994. Vol. 269, N 51. P. 32 380-32 388.

Магнитно-резонансная томография в оценке ремоделирования миокарда при экспериментальной артериальной гипертензии крыс
И.Г.Агафонова1, В.Н.Котельников2, Б.И.Гельцер2288
1ФГБУН Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б.Елякова ДВО РАН, Владивосток, РФ; 2ФГАОУ ВО Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, РФ
         
Методом магнитно-резонансной томографии исследовали морфофункциональный статус миокарда крыс Вистар с многофакторной кардиовазоренальной моделью артериальной гипертензии. Установлено, что через 3 мес от начала эксперимента у животных развивалась выраженная гипертрофия миокарда левого желудочка, главным образом за счет утолщения задней и боковой стенки на фоне относительно стабильных показателей толщины межжелудочковой перегородки. При этом резко увеличивался конечный систолический объем и умеренно — диастолический. Для более точной оценки типа ремоделирования отдельных структур миокарда левого желудочка были использованы общепринятые расчетные показатели. Показано, что при мультифакторной артериальной гипертензии доминировал гипертрофический вариант ремоделирования миокарда левого желудочка, а концентрический встречался в 2.5 раза реже. Наиболее заметные изменения фиксировались в задней и боковой стенке левого желудочка, что может быть обусловлено гемодинамическими эффектами гиперволемической артериальной гипертензии.
Ключевые слова: магнитно-резонансная томография, артериальная гипертензия, ремоделирование миокарда, крысы
Адрес для корреспонденции: agafonova@piboc.dvo.ru. Агафонова И.Г.
Литература
1.            Агафонова И.Г., Богданович Р.Н., Колосова Н.Г. Оценка нефропротективного потенциала гистохрома в условиях индуцированной артериальной гипертензии // Бюл. экпер. биол. 2015. Т. 160, № 8. С. 187-191.
2.            Гельцер Б.И., Котельников В.Н., Агафонова И.Г., Лукьянов Л.А., Антонюк М.В., Новгородцева Т.П. Особенности вазомоторной функции сосудов церебрального бассейна при артериальной гипертензии // Бюл. экпер. биол. 2007. Т. 144, № 7. С. 36-38.
3.            Ларина О.М., Мершина Е.А., Синицын В.Е., Андреев Д.А. Магнитно-резонансная томография сердца в диагностике острого миокардита: клинический случай и обзор литературы // Вестн. рентген. радиол. 2014. № 5. С. 54-59.
4.            Мареев В.Ю., Фомин И.В., Агеев Ф.Т., Арутюнов Г.П., Беграмбекова Ю.Л., Беленков Ю.Н., Васюк Ю.А., Галявич А.С., Гарганеева А.А., Гендлин Г.Е., Гиляревский С.Р., Глезер М.Г., Драпкина О.М., Дупляков Д.В., Кобалава Ж.Д., Козиолова Н.А., Лопатин Ю.М., Мареев Ю.В., Моисеев В.С., Недошивин А.О., Перепеч Н.Б., Ситникова М.Ю., Скибицкий В.В., Тарловская Е.И., Чесникова А.И., Шляхто Е.В. Хроническая сердечная недостаточность (ХСН) // Журн. серд. недостаточность. 2017. Т. 18, № 1. С. 3-40.
5.            Новгородцева Т.П., Антонюк М.В., Караман Ю.К., Котельников В.Н., Гвозденко Т.А., Королев И.Б., Агафонова И.Г. Моделирование кардиовазоренальной артериальной гипертензии у крыс // Пат. физиол. и экспер. тер. 2008. № 4. С. 34-36.
6.            Подзолков В.И., Брагина А.Е., Брагина Г.И., Мурашко Н.А. Состояние нитроксидпродуцирующей функции эндотелия и гипертрофия левого желудочка у больных гипертонической болезнью // Кардиоваск. терап. профил. 2017. Т. 16, № 4. С. 11-17.
7.            Терегулов Ю.Э., Терегулов А.Э. Жесткость артериальной системы, как фактор риска сердечно-сосудистых осложнений: методы оценки // Практ. мед. 2011.
№ 4. С. 133-137.
8.            Agafonova I.G., Stonik V.A., Kotelnikov V.N., Geltcer B.I., Kolosova N.G. The morpho-functional characteristics of cerebral and renal arteries after induced arterial hypertension in rats using magnetic resonance imaging // Appl. Magn. Res. 2017. Vol. 48, N 9.
Р. 911-919.
9.            Agafonova I.G., Stonik V.A., Kotelnikov V.N., Geltser B.I., Kolosova N.G. Assessment of combined therapy of histochrome and nebivalol as angioprotectors on the background of experimental hypertension by magnetic resonance angiography // Appl. Magn. Res. 2018. Vol. 49, N 2.
Р. 217-225.
10.          Aronsen J.M., Espe E.K.S., Skårdal K., Hasic A., Zhang L., Sjaastad I. Noninvasive stratification of postinfarction rats based on the degree of cardiac dysfunction using magnetic resonance imaging and echocardiography // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2017. Vol. 312, N 5. P. H932-H942.
11.          Ku M.C., Huelnhagen T., Niendorf T., Pohlmann A. Cardiac MRI in Small Animals // Methods Mol. Biol. 2018. Vol. 1718. P. 269-284.
12.          Lang R.M., Badano L.P., Mor-Avi V., Afilalo J., Armstrong A., Ernande L., Flachskampf F.A., Foster E., Goldstein S.A., Kuznetsova T., Lancellotti P., Muraru D., Picard M.H., Rietzschel E.R., Rudski L., Spencer K.T., Tsang W., Voigt J.U. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging // J. Am. Soc. Echocardiogr. 2015. Vol. 28, N 1. P. 1-39.e14. doi: 10.1016/j.echo. 2014.10.003.
13.          Sekerci R., Acar N., Tepekoy F., Ustunel I., Keles-Celik N. Apelin/APJ expression in the heart and kidneys of hypertensive rats // Acta Histochem. 2018. Vol. 120, N 3. P. 196-204.
14.          Talman V., Ruskoaho H. Cardiac fibrosis in myocardial infarction-from repair and remodeling to regeneration // Cell. Tissue Res. 2016. Vol. 365, N 3. P. 563-581.
15.          Tran N., Giannakidis A., Gullberg G.T., Seo Y. Quantitative analysis of hypertrophic myocardium using diffusion tensor magnetic resonance imaging // J. Med.
Imaging (Bellingham). 2016. Vol. 3, N 4. 046001.

Взаимосвязи между композитным составом тела и уровнями гормонов поджелудочной железы, желудочно-кишечного тракта и жировой ткани в плазме крови у мышей линии db/db — модели сахарного диабета 2-го типа
А.И.Корбут1, В.В.Климонтов1, Н.Б.Орлов1, А.С.Хоцкина2, Е.Л.Завьялов2294
1НИИ клинической и экспериментальной лимфологии — филиал ФГБНУ ФИЦ Института цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, РФ; 2ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, РФ
         
Оценивали взаимосвязи между параметрами композитного состава тела и концентрациями в плазме крови гормонов поджелудочной железы, ЖКТ и жировой ткани, регулирующих энергетический баланс и метаболизм глюкозы, у мышей db/db (BKS.Cg-Dock7m+/+Leprdb/J) с сахарным диабетом. Параметры композитного состава тела оценивали на 8, 12 и 16-й неделе жизни с помощью магнитно-резонансной спектроскопии. Уровни инсулина, глюкагона, грелина, глюкагоноподобного пептида 1-го типа, глюкозозависимого иммунотропного полипептида, лептина, резистина и активатора плазминогена-1 определяли на 8-й и 16-й неделе методом мультиплексного анализа. По сравнению с контролем у мышей db/db была бóльшая масса жировой ткани и меньшая — безжировая масса и масса воды. У мышей db/db увеличивался уровень лептина (p<0.001), инсулина (p<0.01), глюкагоноподобного пептида 1-го типа (p<0.05) и снижался уровень грелина (p<0.05) на 8-й и 16-й неделе жизни. Масса тела и масса жировой ткани положительно коррелировали с концентрацией лептина, инсулина, глюкагоноподобного полипептида 1-го типа и активатора плазминогена-1 и отрицательно — с концентрацией грелина. Полученные результаты дополняют характеристику мышей db/db, широко используемой модели ожирения и сахарного диабета 2-го типа.
Ключевые слова: сахарный диабет, ожирение, мыши db/db, композитный состав тела, гормоны
Адрес для корреспонденции: anton.korbut@gmail.com. Корбут А.И.
Литература
1.           
Burke S.J., Batdorf H.M., Burk D.H., Noland R.C., Eder A.E., Boulos M.S., Karlstad M.D., Collier J.J. db/db Mice Exhibit Features of Human Type 2 Diabetes That Are Not Present in Weight-Matched C57BL/6J Mice Fed a Western Diet // J. Diabetes Res. 2017. Vol. 2017. doi: 10.1155/2017/8503754.
2.            Flak J.N., Myers M.G. Jr. Minireview: CNS Mechanisms of Leptin Action // Mol. Endocrinol. 2016. Vol. 30, N 1. P. 3-12.
3.            Harris R.B. Direct and indirect effects of leptin on adipocyte metabolism // Biochim. Biophys. Acta. 2014. Vol. 1842, N 3. P. 414-423.
4.            Hussain Z., Khan J.A. Food intake regulation by leptin: Mechanisms mediating gluconeogenesis and energy expenditure // Asian Pac. J. Trop. Med. 2017. Vol. 10, N 10. P. 940-944.
5.            Liu Z., Kim W., Chen Z., Shin Y.K., Carlson O.D., Fiori J.L., Xin L., Napora J.K., Short R., Odetunde J.O., Lao Q., Egan J.M. Insulin and glucagon regulate pancreatic
a-cell proliferation // PLoS One. 2011. Vol. 6, N 1. e16096. doi: 10.1371/journal.pone.0016096.
6.            Michurina S.V., Ishenko I.J., Klimontov V.V., Archipov S.A., Myakina N.E., Cherepanova M.A., Zavjalov E.L., Koncevaya G.V., Konenkov V.I. Linagliptin alleviates fatty liver disease in diabetic db/db mice // World J. Diabetes. 2016. Vol. 7, N 19. P. 534-546.
7.            Morioka T., Asilmaz E., Hu J., Dishinger J.F., Kurpad A.J., Elias C.F., Li H., Elmquist J.K., Kennedy R.T., Kulkarni R.N. Disruption of leptin receptor expression in the pancreas directly affects beta cell growth and function in mice // J. Clin. Invest. 2007. Vol. 117, N 10. P. 2860-2868.
8.            Petry S.F., Sun L.M., Knapp A., Reinl S., Linn T. Distinct Shift in Beta-Cell Glutaredoxin 5 Expression Is Mediated by Hypoxia and Lipotoxicity Both In Vivo and In Vitro // Front. Endocrinol. (Lausanne). 2018. Vol. 9. doi: 10.3389/fendo.2018.00084.
9.            Rodríguez A. Novel molecular aspects of ghrelin and leptin in the control of adipobiology and the cardiovascular system // Obes. Facts. 2014. Vol. 7, N 2. P. 82-95.
10.          Ronveaux C.C., Tomé D., Raybould H.E. Glucagon-like peptide 1 interacts with ghrelin and leptin to regulate glucose metabolism and food intake through vagal afferent neuron signaling // J. Nutr. 2015. Vol. 145, N 4. P. 672-680.
11.          Schneider D.J., Sobel B.E. PAI-1 and diabetes: a journey from the bench to the bedside // Diabetes Care. 2012, Vol. 35, N 10. P. 1961-1967.
12.          Soedling H., Hodson D.J., Adrianssens A.E., Gribble F.M., Reimann F., Trapp S., Rutter G.A. Limited impact on glucose homeostasis of leptin receptor deletion from insulin- or proglucagon-expressing cells // Mol. Metab. 2015. Vol. 4, N 9. P. 619-630.
13.          van der Stouwe J.G., Aeschbacher S., Krisai P., Schoen T., Meyre P., Todd J., Estis J., Risch M., Risch L., Conen D. Plasma levels of glucagon-like peptide 1 and markers of obesity among young and healthy adults // Clin. Endocrinol. (Oxf). 2015. Vol. 83, N 5. P. 636-642.
14.          Wu Y.J., Guo X., Li C.J., Li D.Q., Zhang J., Yang Y., Kong Y., Guo H., Liu D.M., Chen L.M. Dipeptidyl peptidase-4 inhibitor, vildagliptin, inhibits pancreatic beta cell apoptosis in association with its effects suppressing endoplasmic reticulum stress in db/db mice // Metabolism. 2015. Vol. 64, N 2. P. 226-235.
15.          Zhang S., Zhang Q., Zhang L., Li C., Jiang H. Expression of ghrelin and leptin during the development of type 2 diabetes mellitus in a rat model // Mol. Med.
Rep. 2013. Vol. 7, N 1. P. 223-228.

Биофизика и биохимия
Дифференциальная диагностика активного прогрессирующего рассеянного склероза с использованием флюоресцентного биомаркера с резонансным переносом энергии
Я.А.Ломакин1,2, А.А.Кудряева1, Н.Н.Костин1, С.С.Терехов1, А.Н.Каминская1, М.Н.Захарова3, М.В.Иванова3, Т.О.Симанив3, А.Г.Габибов1,4, А.А.Белогуров1,4 299
1ФГБУН Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва, РФ; 2Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Республика Татарстан, РФ; 3Отделение нейрореабилитации Научного центра неврологии, Москва, РФ; 4МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
         
Ранее мы показали, что миелинреактивные аутоантитела у пациентов с рассеянным склерозом и у мышей с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом проявляют способность распознавать и гидролизовать различные фрагменты основного белка миелина (ОБМ). Кроме того, опосредованное антителом расщепление энцефалитогенного фрагмента ОБМ81-103, фланкированного двумя флюоресцентными белками, может служить в качестве нового биомаркера рассеянного склероза. В данной работе описано создание следующего поколения этого биомаркера на основе антителозависимой деградации нового химически синтезированного флюоресцентного субстрата с резонансным переносом энергии, содержащего флюорофор Cy5 и тушитель QXL680, разделенные пептидом ОБМ81-99: Cy5-ОБМ81-99-QXL680. Этот субстрат подвергается деградации при инкубации с очищенными антителами и с В-клетками пациентов с рассеянным склерозом, но не здоровых доноров.
Ключевые слова: антитела, иммуноглобулины, В-клетки, основной белок миелина
Адрес для корреспонденции: belogurov@mx.ibch.ru. Белогуров А.А.
Литература
1.            Belogurov A.A.Jr, Kurkova I.N., Friboulet A., Thomas D., Misikov V.K., Zakharova M.Y., Suchkov S.V., Kotov S.V., Alehin A.I., Avalle B., Souslova E.A., Morse H.C.3rd, Gabibov A.G., Ponomarenko N.A. Recognition and degradation of myelin basic protein peptides by serum autoantibodies: novel biomarker for multiple sclerosis // J. Immunol. 2008. Vol. 180, N 2. P. 1258-1267.
2.            Blauth K., Owens G.P., Bennett J.L. The ins and outs of B cells in multiple sclerosis // Front. Immunol. 2015. Vol. 6. ID 565. doi: 10.3389/fimmu.2015.00565.
3.            Katz Sand I., Krieger S., Farrell C., Miller A.E. Diagnostic uncertainty during the transition to secondary progressive multiple sclerosis // Mult. Scler. 2014. Vol. 20, N 12. P. 1654-1657.
4.            Kurtzke J.F. Rating neurologic impairment in multiple sclerosis: an expanded disability status scale (EDSS) // Neurology. 1983. Vol. 33, N 11. P. 1444-1452.
5.            Lacroix-Desmazes S., Bayry J., Kaveri S.V., Hayon-Sonsino D., Thorenoor N., Charpentier J., Luyt C.E., Mira J.P., Nagaraja V., Kazatchkine M.D., Dhainaut J.F., Mallet V.O. High levels of catalytic antibodies correlate with favorable outcome in sepsis // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2005. Vol. 102, N 11. P. 4109-4113.
6.            Lublin F.D., Reingold S.C., Cohen J.A., Cutter G.R., Sørensen P.S., Thompson A.J., Wolinsky J.S., Balcer L.J., Banwell B., Barkhof F., Bebo B.Jr, Calabresi P.A., Clanet M., Comi G., Fox R.J., Freedman M.S., Goodman A.D., Inglese M., Kappos L., Kieseier B.C., Lincoln J.A., Lubetzki C., Miller A.E., Montalban X., O'Connor P.W., Petkau J., Pozzilli C., Rudick R.A., Sormani M.P., Stüve O., Waubant E., Polman C.H. Defining the clinical course of multiple sclerosis: the 2013 revisions // Neurology. 2014. Vol. 83, N 3. P. 278-286.
7.            Mizoguchi A., Mizoguchi E., Takedatsu H., Blumberg R.S., Bhan A.K. Chronic intestinal inflammatory condition generates IL-10-producing regulatory B cell subset characterized by CD1d upregulation // Immunity. 2002. Vol. 16, N 2. P. 219-230.
8.            Ponomarenko N.A., Durova O.M., Vorobiev I.I., Aleksandrova E.S., Telegin G.B., Chamborant O.G., Sidorik L.L., Suchkov S.V., Alekberova Z.S., Gnuchev N.V., Gabibov A.G. Catalytic antibodies in clinical and experimental pathology: human and mouse models // J. Immunol. Methods. 2002. Vol. 269, N 1-2. P. 197-211.
9.            Ponomarenko N.A., Durova O.M., Vorobiev I.I., Belogurov A.A.Jr, Kurkova I.N., Petrenko A.G., Telegin G.B., Suchkov S.V., Kiselev S.L., Lagarkova M.A., Govorun V.M., Serebryakova M.V., Avalle B., Tornatore P., Karavanov A., Morse H.C.3rd, Thomas D., Friboulet A., Gabibov A.G. Autoantibodies to myelin basic protein catalyze site-specific degradation of their antigen // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2006. Vol. 103, N 2. P. 281-286.
10.          Ponomarenko N.A., Durova O.M., Vorobiev I.I., Belogurov A.A., Telegin G.B., Suchkov S.V., Misikov V.K., Morse H.C.3rd, Gabibov A.G. Catalytic activity of autoantibodies toward myelin basic protein correlates with the scores on the multiple sclerosis expanded disability status scale // Immunol. Lett. 2006. Vol. 103, N 1. P. 45-50.
11.          Pulendran B., Ahmed R. Immunological mechanisms of vaccination // Nat. Immunol. 2011. Vol. 12, N 6. P. 509-517.
12.          Shuster A.M., Gololobov G.V., Kvashuk O.A., Bogomolova A.E., Smirnov I.V., Gabibov A.G. DNA hydrolyzing autoantibodies // Science. 1992. Vol. 256. P. 665-667.
13.          von Büdingen H.C., Palanichamy A., Lehmann-Horn K., Michel B.A., Zamvil S.S. Update on the autoimmune pathology of multiple sclerosis: B-cells as disease-drivers and therapeutic targets // Eur. Neurol. 2015. Vol. 73, N 3-4. P. 238-246.
14.          Yang Y.H., Chang C.J., Chuang Y.H., Hsu H.Y., Chen P.P., Chiang B.L. Identification of anti-prothrombin antibodies in the anti-phospholipid syndrome that display the prothrombinase activity // Rheumatology (Oxford).
2010. Vol. 49, N 1. P. 34-42.

Получение рекомбинантного трансферрина человека в эукариотической системе экспрессии Pichia pastoris
Т.В.Бобик1, Р.Ю.Попов1, Т.К.Алиев1, Ю.А.Мокрушина1, О.Г.Шамборант1, Е.Н.Хурс2, В.Д.Кнорре1, И.В.Смирнов1, А.Г.Габибов1306
1ФГБУН Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва, РФ; 2ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта РАН, Москва, РФ
         
Одной из важнейших отраслей биотехнологии является разработка и производство бессывороточных культуральных сред, позволяющих значительно снизить стоимость получаемых препаратов и обеспечивающих стандартизацию биотехнологического производства. Замена белковых составляющих в бессывороточных питательных средах рекомбинантными аналогами позволит избавиться от риска контаминации различными инфекционными агентами. В качестве одного из белковых составляющих бессывороточных сред, отвечающего за транспорт ионов Fe3+ внутрь клетки, используют трансферрин человека. Нами получен штамм-продуцент P. pastoris, секретирующий трансферрин человека в культуральную среду. Показано, что максимальный уровень экспрессии трансферрина 20 мг/л достигается при использовании конститутивного GAP-промотора и поддержании рН среды на уровне 6.5.
Ключевые слова: трансферрин человека, бессывороточные среды, система экспрессии Pichia pastoris
Адрес для корреспонденции: bobik_tanya@mail.ru. Бобик Т.В.
Литература
1.            Barnes D., Sato G. Serum-free cell culture: a unifying approach // Cell. 1980. Vol. 22, N 3.
Р. 649-655.
2.            Cregg J.M., Cereghino J.L., Shi J., Higgins D.R. Recombinant protein expression in Pichia pastoris // Mol. Biotechnol. 2000. Vol. 16, N 1.
Р. 23-52.
3.            Finnis C.J., Payne T., Hay J., Dodsworth N., Wilkinson D., Morton P., Saxton M.J., Tooth D.J., Evans R.W., Goldenberg H., Scheiber-Mojdehkar B., Ternes N., Sleep D. High-level production of animal-free recombinant transferrin from Saccharomyces cerevisiae // Microb. Cell Fact. 2010. N 9. ID 87. doi: 10.1186/1475-2859-9-87.
4.            Keenan J., Pearson D., Clynes M. The role of recombinant proteins in the development of serum-free media // Cytotechnology. 2006. Vol. 50, N 1-2.
Р. 49-56.
5.            Mason A.B., Miller M.K., Funk W.D., Banfield D.K., Savage K.J., Oliver R.W., Green B.N., MacGillivray R.T., Woodworth R.C. Expression of glycosylated and nonglycosylated human transferrin in mammalian cells. Characterization of the recombinant proteins with comparison to three commercially available transferrins // Biochemistry. 1993. Vol. 32, N 20.
Р. 5472-5479.
6.            Merten O.W. Development of serum-free media for cell growth and production of viruses/viral vaccines — safety issues of animal products used in serum-free media // Dev. Biol. (Basel). 2002. Vol. 111.
Р. 233-257.
7.            Mizutani K., Hashimoto K., Takahashi N., Hirose M., Aibara S., Mikami B. Structural and functional characterization of recombinant human serum transferrin secreted from Pichia pastoris // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2010. Vol. 74, N 2.
Р. 309-315.
8.            Sargent P.J., Farnaud S., Cammack R., Zoller H.M., Evans R.W. Characterisation of recombinant unglycosylated human serum transferrin purified from Saccharomyces cerevisiae // Biometals. 2006. Vol. 19, N 5.
Р. 513-519.
9.            Vassileva A., Chugh D.A., Swaminathan S., Khanna N. Effect of copy number on the expression levels of hepatitis B surface antigen in the methylotrophic yeast Pichia pastoris // Protein Expr. Purif. 2001. Vol. 21, N 1. P. 71-80.
10.          Wurm F.M. Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells // Nat. Biotechnol. 2004. Vol. 11, N 22.
Р. 1393-1398.
11.          Zhang D., Nandi S., Bryan P., Pettit S., Nguyen D., Santos M.A., Huang N. Expression, purification, and characterization of recombinant human transferrin from rice (Oryza sativa L.) // Protein Expr. Purif. 2010. Vol. 74, N 1.
Р. 69-79.
12.          Zlobin A., Mokrushina Y., Terekhov S., Zalevsky A., Bobik T., Stepanova A., Aliseychik M., Kartseva O., Panteleev S., Golovin A., Belogurov A.Jr, Gabibov A., Smirnov I. QM/MM description of newly selected catalytic bioscavengers against organophosphorus compounds revealed reactivation stimulus mediated by histidine residue in the acyl-binding loop // Front. Pharmacol. 2018. Vol. 9. ID 834. doi: 10.3389/fphar.2018.00834.

Активность ферментов антиоксидантной системы и содержание восстановленного глутатиона в клетках in vivo лекарственно-устойчивых штаммов лейкоза P388 мышей
А.А.Балакина1,3, Т.А.Раевская1, В.С.Павлов1,2, В.А.Мумятова1,3, С.А.Гончарова1, А.А.Терентьев1,2,3310
1ФГБУН Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка, Московская область, РФ; 2МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; 3НОЦ “Медицинская химия” ГОУ ВО Московского государственного областного университета, Мытищи, Московская обл., РФ
         
Изучена активность СОД и каталазы, а также содержание восстановленного глутатиона в клетках лекарственно-устойчивых штаммов лейкоза Р388 мышей без воздействия и при введении противоопухолевых препаратов. Показано отсутствие существенных различий в активности ферментов в клетках исходного штамма, а также штаммов, резистентных к циклофосфану, цисплатину и рубомицину, без воздействия химиотерапевтических препаратов. Соединения, к которым была выработана резистентность, не оказывали значительного влияния на активность ферментов в клетках лекарственно-устойчивых штаммов, в то время как соединения, не являющиеся индукторами устойчивости, существенно снижали активность ферментов в клетках, устойчивых к цисплатину и рубомицину. Было обнаружено статистически значимое различие в содержании восстановленного глутатиона в клетках штаммов, резистентных к цисплатину и циклофосфану, по сравнению с исходным штаммом. Кроме того, установлено, что концентрация восстановленного глутатиона в клетках штамма, устойчивого к циклофосфану, значительно уменьшалась при введении препарата, оказывающего терапевтическое действие. Полученные данные позволяют предположить, что механизм резистентности клеток полученного in vivo, устойчивого к циклофосфану штамма связан с повышенным уровнем восстановленного глутатиона и активностью его метаболизма.
Ключевые слова: лейкоз P388, механизм резистентности, антиоксидантная система
Адрес для корреспонденции: balakina@icp.ac.ru. Балакина А.А.
Литература
1.            Гончарова С.А., Раевская Т.А., Якущенко Т.Н., Блохина С.В., Коновалова Н.П., Сень В.Д. Синергический противоопухолевый эффект цисплатина и нитроксильного комплекса платины(IV) ВС118 и развитие резистентности к их комбинированному действию // Известия АН. Сер. химическая. 2011. № 9. С. 1911-1914.
2.            Мумятова В.А., Балакина А.А., Филатова Н.В., Сень В.Д., Корепин А.Г., Терентьев А.А. Влияние цитотоксических соединений на активность ферментов антиоксидантной системы в клетках MCF-7 и H1299 // Клет. технол. в биол. и мед. 2016. № 1. С. 45-49.
3.            Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под общ. ред. А.Н.Миронова. М., 2012.
4.            Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К., Андронова Н.В., Гарин А.М. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общ. ред. Р
.У.Хабриева. М., 2005. С. 637-651.
5.            Byun S.S., Kim S.W., Choi H., Lee C., Lee E. Augmentation of cisplatin sensitivity in cisplatin resistant human bladder cancer cells by modulating glutathione concentrations and glutathione related enzyme activities // BJU Int. 2005. Vol. 95, N 7. P. 1086-1090.
6.            Cook J.A., Gius D., Wink D.A., Krishna M.C., Russo A., Mitchell J.B. Oxidative stress, redox, and the tumor microenvironment // Semin. Radiat. Oncol. 2004. Vol. 14, N 3, P. 259-266.
7.            Furusawa S., Kimura E., Kisara S., Nakano S., Murata R., Tanaka Y., Sakaguchi S., Takayanagi M., Takayanagi Y., Sasaki K. Mechanism of resistance to oxidative stress in doxorubicin resistant cells // Biol. Pharm. Bull. 2001. Vol. 24, N 5, P. 474-479.
8.            Gibellini L., Pinti M., Nasi M., De Biasi S., Roat E., Bertoncelli L., Cossarizza A. Interfering with ROS metabolism in cancer cells: the potential role of quercetin // Cancers. 2010. Vol. 2, N 2. P. 1288-1311.
9.            Lien E.C., Lyssiotis C.A., Juvekar A., Hu H., Asara J.M., Cantley L.C., Toker A. Glutathione biosynthesis is a metabolic vulnerability in PI(3)K/Akt-driven breast cancer // Nat. Cell Biol. 2016. Vol. 18, N 5. P. 572-578.
10.          Mehta K., Fok J., Miller F.R., Koul D., Sahin A.A. Prognostic significance of tissue transglutaminase in drug resistant and metastatic breast cancer // Clin. Cancer Res. 2004. Vol. 10, N 23. P. 8068-8076.
11.          Tsuruo T., Naito M., Tomida A., Fujita N., Mashima T., Sakamoto H., Haga N. Molecular targeting therapy of cancer: drug resistance, apoptosis and survival signal // Cancer Sci. 2003.
Vol. 94, N 1. P. 15-21.

Взаимосвязь между нарушением обмена полиненасыщенных жирных кислот и развитием окислительного стресса на фоне сахарного диабета в эксперименте
Н.П.Микаелян, А.С.Дворников, А.А.Микаелян, Н.В.Смирнова – 315
ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, Москва
         
Исследовали влияние стрептозотоцинового диабета на уровень гликемии и некоторых показателей липидного обмена, в том числе жирных кислот и ПОЛ, в разные сроки развития сахарного диабета у крыс. Уже в ранние сроки развития диабета у крыс наряду с гипертриглицеридемией и гиперхолестеринемией отмечались изменения в составе жирных кислот крови за счет группы w3 и w6 жирных кислот, сохранявшиеся в течение всего периода наблюдения. Повышение интенсивности ПОЛ на фоне снижения активности ферментов-антиоксидантов и уровня w3-жирных кислот свидетельствует о развитии окислительного стресса. Полученные результаты указывают на антиоксидантное свойство w3-жирных кислот, о чем свидетельствуют прямые корреляционные связи между w3-жирными кислотами и активностью ферментов-антиоксидантов.
Ключевые слова: сахарный диабет, жирные кислоты, стрептозотоцин, антиоксиданты, w3-жирные кислоты
Адрес для корреспонденции: ninmik@yandex.ru. Микаелян Н.П.
Литература
1.            Апухтин А.Ф., Стаценко М.Е., Инина Л.И. Сахароснижающий эффект
w3-полиненасыщенных жирных кислот у больных сахарным диабетом // Профилактическая медицина. 2012. Т. 15, № 6. С. 50-56.
2.            Акмурзина В.А., Петряйкина Е.Е., Савельев С.В., Селищева А.А. Профиль неэтерифицированных жирных кислот плазмы детей с разными сроками сахарного диабета 1 типа // Биомед. химия. 2016. Т. 62, № 2. С. 206-211.
3.            Древаль А.В. Лечение сахарного диабета и сопутствующих заболеваний. М., 2010.
4.            Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело. 1988. № 1.С. 16-19.
5.            Микаелян Н.П., Кулаева И.О., Гурина А.Е., Терентьев А.А., Сайфуллин Р.Ф., Микаелян К.А. Активность процесса перекисного окисления липидов и состояние системы антиоксидантной защиты у больных сахарным дабетом 2-го типа // Вопросы биол., мед. и фармацевт. химии. 2013. № 4. С. 64-68.
6.            Микаелян Н.П., Нгуен Х.З., Терентьев А.А. Метаболические нарушения в мембранах эритроцитов и гомогенатах печеночной ткани при сахарном диабете в эксперименте // Бюл. экспер. биол. 2015. Т. 159, № 2. С. 154-157.
7.            Folch J., Lees M., Sloane Stanley G.H. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. Vol. 226, N 1. P. 497-509.
8.            Harris W.S., Miller M., Tighe A.P., Davidson M.H., Schaefer E.J. Omega-3 fatty acids and coronary heart disease risk: clinical and mechanistic perspectives // Atherosclerosis. 2008. Vol. 197, N 1. P. 12-24.
9.            Ichihara K., Fukubayashi Y. Preparation of fatty acid methyl esters for gas-liquid chromatography // J. Lipid Res. 2010. Vol. 51, N 3. P. 635-640.
10.          Inzucchi S.E., Bergenstal R.M., Buse J.B., Diamant M., Ferrannini E., Nauck M., Peters A.L., Tsapas A., Wender R., Matthews D.R.; American Diabetes Association (ADA); European Association for the Study of Diabetes (EASD). Management of hyperglycemia in type 2 diabetes: a patient-centered approach position statement of the American Diabetes Association (ADA) and the European Association for the Study of Diabetes (EASD) // Diabetes Care. 2012. Vol. 35, N 6. P. 1364-1379.
11.          Lee Y., Wang M.Y., Du X.Q., Charron M.J., Unger RH. Glucagon receptor knockout prevents insulin-deficient type 1 diabetes in mice // Diabetes. 2011. Vol. 60, N 2. P. 391-397.
12.          Prentki M., Madiraju S.R. Glycerolipid/free fatty acid cycle and islet
b-cell function in health, obesity and diabetes // Mol. Cell. Endocrinol. 2012. Vol. 353, N 1-2. P.88-100.
13.          Rodríguez-Carrizalez A.D., Castellanos-González J.A., Martínez-Romero E.C., Miller-Arrevillaga G., Villa-Hernández D., Hernández-Godínez P.P., Ortiz G.G., Pacheco-Moisés F.P., Cardona-Muñoz E.G., Miranda-Díaz A.G. Oxidants, antioxidantsandmitochondrialfunctioninnon-proliferativediabeticretinopathy // J. Diabetes. 2014. Vol. 6, N 2. P. 167-175.
14.          Yagi K. A simple fluorometric assay for lipoperoxide in blood plasma // Biochem. Med. 1976. Vol. 15, N 2. P. 212-216.
15.          Ziegler D., Sohr C.G., Nourooz-Zadeh J. Oxidative stress and antioxidant defense in relation to the severity of diabetic polyneuropathy and cardiovascular autonomic neuropathy // Diabetes Care. 2004.
Vol. 27, N 9. P. 2178-2183.

Влияние клеточно-проникающего аргининового пептида на взаимодействие с опухолевыми клетками фотосенсибилизатора хлорина е6, включенного в фосфолипидные наночастицы
Л.В.Кострюкова, Е.И.Короткевич, Г.Е.Морозевич, Е.Ф.Колесанова, М.В.Мельникова, Ю.В.Филатова, Т.И.Торховская, В.Н.Прозоровский, Е.Г.Тихонова, О.М.Ипатова – 319
ФГБНУ Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва, РФ
         
Исследована возможность повышения эффективности фотодинамической терапии путем усиления доставки в клетку фотосенсибилизатора хлорина е6. Ранее показано, что включение хлорина е6 в фосфолипидные наночастицы размером до 20 нм способствует снижению его фототоксичности за счет ускоренного выведения из органов [8]. Был синтезирован и добавлен к такой композиции гептапептид R7 и показана повышенная интернализация хлорина е6 в клетки HepG2 под влиянием такой системы по сравнению с действием исходных наночастиц без пептида. Oбсуждаются возможные пути показанного влияния R7 — за счет активации эндоцитоза или/и макропиноцитоза, с учетом взаимодействия аргинина с карбоксильными группами е6. Отмечается также перспективность развития такой транспортной системы для фотодинамической терапии онкологических заболеваний.
Ключевые слова: фосфолипидные наночастицы, хлорин е6, олигоаргинины, R7, интернализация
Адрес для корреспонденции: torti@mail.ru. Торховская Т.И.
Литература
1.            Bendifallah N., Rasmussen F.W., Zachar V., Ebbesen P., Nielsen P.E., Koppelhus U. Evaluation of cell-penetrating peptides (CPPs) as vehicles for intracellular delivery of antisense peptide nucleic acid (PNA) // Bioconjug. Chem. 2006. Vol. 17, N 3. P. 750-758.
2.            Bisland S.K., Singh D., Gariépy J. Potentiation of chlorin e6 photodynamic activity in vitro with peptide-based intracellular vehicles // Bioconjug. Chem. 1999. Vol. 10, N 6. P. 982-992.
3.            Choi Y., McCarthy J.R., Weissleder R., Tung C.H. Conjugation of a photosensitizer to an oligoarginine-based cell-penetrating peptide increases the efficacy of photodynamic therapy // ChemMedChem. 2006. Vol. 1, N 4. P. 458-463.
4.            Futaki S. Oligoarginine vectors for intracellular delivery: design and cellular-uptake mechanisms // Biopolymers. 2006. Vol. 84, N 3. P. 241-249.
5.            Heitz F., Morris M.C., Divita G. Twenty years of cell-penetrating peptides: from molecular mechanisms to therapeutics // Br. J. Pharmacol. 2009. Vol. 157, N 2. P. 195-206.
6.            Ji Y., Zhao J., Chu C.C. Biodegradable nanocomplex from hyaluronic acid and arginine based poly(ester amide)s as the delivery vehicles for improved photodynamic therapy of multidrug resistant tumor cells: An in vitro study of the performance of chlorin e6 photosensitizer // J. Biomed. Mater. Res. A. 2017. Vol. 105, N 5. P. 1487-1499.
7.            Kolesanova E.F., Sanzhakov M.A., Kharybin O.N. Development of the schedule for multiple parallel “difficult” Peptide synthesis on pins // Int. J. Pept. 2013. Vol. 2013. ID 197317. doi: 10.1155/2013/197317.
8.            Kostryukova L.V., Prozorovskiy V.N., Medvedeva N.V., Ipatova O.M. Comparison of a new nanoform of the photosensitizer chlorin e6, based on plant phospholipids, with its free form // FEBS Open Bio. 2018. Vol. 8, N 2. P. 201-210.
9.            Mojzisova H., Bonneau S., Vever-Bizet C., Brault D. The pH-dependent distribution of the photosensitizer chlorin e6 among plasma proteins and membranes: a physico-chemical approach // Biochim. Biophys. Acta. 2007. Vol. 1768, N 2. P. 366-374.
10.          Murayama T., Masuda T., Afonin S., Kawano K., Takatani-Nakase T., Ida H., Takahashi Y., Fukuma T., Ulrich A.S., Futaki S. Loosening of lipid packing promotes oligoarginine entry into cells // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2017. Vol. 56, N 26. P. 7644-7647.
11.          Parihar A., Dube A., Gupta P.K. Conjugation of chlorin p(6) to histamine enhances its cellular uptake and phototoxicity in oral cancer cells // Cancer Chemother. Pharmacol. 2011. Vol. 68, N 2. P. 359-369.
12.          Peng P.C., Hong R.L., Tsai Y.J., Li P.T., Tsai T., Chen C.T. Dual-effect liposomes encapsulated with doxorubicin and chlorin e6 augment the therapeutic effect of tumor treatment // Lasers Surg. Med. 2015. Vol. 47, N 1. P. 77-87.
13.          Sheldon K., Liu D., Ferguson J., Gariépy J. Loligomers: design of de novo peptide-based intracellular vehicles // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. Vol. 92, N 6. P. 2056-2060.
14.          Zavadova Z., Zavada J. Carbonic anhydrase IX (CA IX) mediates tumor cell interactions with microenvironment // Oncol. Rep. 2005. Vol. 13, N 5. P. 977-982.
15.          Zhang D., Wu M., Zeng Y., Wu L., Wang Q., Han X., Liu X., Liu J. Chlorin e6 conjugated Poly(dopamine) nanospheres as PDT/PTT dual-modal therapeutic agents for enhanced cancer therapy // ACS Appl.
Mater. Interfaces. 2015. Vol. 7, N 15. P. 8176-8187.

Интраназально вводимый С-пептид проинсулина усиливает стимуляцию инсулином активности инсулиновой системы в гипоталамусе диабетических крыс
К.В.Деркач, А.А.Перминова, Д.М.Бузанаков, А.О.Шпаков – 324
Лаборатория молекулярной эндокринологии и нейрохимии (зав. — докт. биол. наук А.О.Шпаков) ФГБУН Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН, Санкт-Петербург, РФ
         
При сахарном диабете 1-го типа уровни инсулина и С-пептида снижаются на периферии и в ЦНС. При этом С-пептид усиливает регуляторные эффекты инсулина. Исследовали влияние С-пептида и инсулина на активность Akt-киназы и киназы-3b гликогенсинтетазы (GSK3b), компонентов 3-фосфоинозитидного пути, в гипоталамусе интактных крыс и крыс со стрептозотоциновым мягким диабетом 1-го типа при однократном и продолжительном (7 сут) совместном и раздельном интраназальном введении в дозах 10 мкг сут (С-пептид) и 20 мкг/сут (инсулин). Оценивали фосфорилирование Akt-киназы по Thr308 и Ser473 (стимуляция) и GSK3b по Ser9 (ингибирование). При диабете снижалось фосфорилирование Akt-киназы и в меньшей степени GSK3b. Однократное введение инсулина или С-пептида и инсулина его повышало. Длительное лечение С-пептидом и инсулином крыс с диабетом нормализовало активность Akt-киназы и GSK3b, причем совместное введение веществ было эффективнее, чем отдельное введение инсулина. Монотерапия С-пептидом была неэффективной. Совместное интраназальное введение С-пептида и инсулина эффективно стимулирует инсулиновую систему в гипоталамусе, ослабленную при сахарном диабете 1-го типа, что может быть использовано при терапии данного заболевания.
Ключевые слова: С-пептид проинсулина, инсулин, интраназальное введение, гипоталамус, 3-фосфоинозитидный путь
Адрес для корреспонденции: alex_shpakov@list.ru. Шпаков А.О.
Литература
1.            Шпаков А.О. Механизмы действия и терапевтический потенциал С-пептида проинсулина // Журн. эволюц. биохим. физиол.
2017. Т. 53, № 3. C. 161-169.
2.            Benzler J., Ganjam G.K., Krüger M., Pinkenburg O., Kutschke M., Stöhr S., Steger J., Koch C.E., Ölkrug R., Schwartz M.W., Shepherd P.R., Grattan D.R., Tups A. Hypothalamic glycogen synthase kinase 3
b has a central role in the regulation of food intake and glucose metabolism // Biochem. J. 2012. Vol. 447, N 1. P. 175-184.
3.            Derkach K.V., Bogush I.V., Shpakov A.O., Berstein L.M. The influence of intranasal insulin on hypothalamic-pituitary-thyroid axis in normal and diabetic rats // Horm. Metab. Res. 2015. Vol. 47, N 12. P. 916-924.
4.            Derkach K.V., Sukhov I.B., Bondareva V.M., Shpakov A.O. The effect of Metformin on metabolic parameters and hypothalamic signaling systems in rats with obesity induced by a high-carbohydrate/high-fat diet // Adv. Gerontol. 2018. Vol. 8, N 2. P. 139-146.
5.            Jolivalt C.G., Lee C.A., Beiswenger K.K., Smith J.L., Orlov M., Torrance M.A., Masliah E. Defective insulin signaling pathway and increased glycogen synthase kinase-3 activity in the brain of diabetic mice: parallels with Alzheimer’s disease and correction by insulin // J. Neurosci. Res. 2008. Vol. 86, N 15. P. 3265-3274.
6.            King M.R., Anderson N.J., Liu C., Law E., Cundiff M., Mixcoatl-Zecuatl T.M., Jolivalt C.G. Activation of the insulin-signaling pathway in sciatic nerve and hippocampus of type 1 diabetic rats // Neuroscience. 2015. Vol. 303. P. 220-228.
7.            Kolar G.R., Grote S.M., Yosten G.L. Targeting orphan G protein-coupled receptors for the treatment of diabetes and its complications: C-peptide and GPR146 // J. Intern. Med. 2017. Vol. 281, N 1. P. 25-40.
8.            Landreh M., Johansson J., Jörnvall H. C-peptide: a molecule balancing insulin states in secretion and diabetes-associated depository conditions // Horm. Metab. Res. 2013. Vol. 45, N 11. P. 769-773.
9.            Lin S.Y., Cui H., Yusta B., Belsham D.D. IGF-I signaling prevents dehydroepiandrosterone (DHEA)-induced apoptosis in hypothalamic neurons // Mol. Cell. Endocrinol. 2004. Vol. 214, N 1-2. P. 127-135.
10.          Majewska E., Szeliga M. AKT/GSK3
b signaling in glioblastoma // Neurochem. Res. 2017. Vol. 42, N 3. P. 918-924.
11.          Santos R.X., Correia S.C., Alves M.G., Oliveira P.F., Cardoso S., Carvalho C., Duarte A.I., Santos M.S., Moreira P.I. Insulin therapy modulates mitochondrial dynamics and biogenesis, autophagy and tau protein phosphorylation in the brain of type 1 diabetic rats // Biochim. Biophys. Acta. 2014. Vol. 1842, N 7. P. 1154-1166.
12.          Sima A.A., Li Z.G. The effect of C-peptide on cognitive dysfunction and hippocampal apoptosis in type 1 diabetic rats // Diabetes. 2005. Vol. 54, N 5. P. 1497-1505.

13.          Sima A.A., Zhang W., Muzik O., Kreipke C.W., Rafols J.A., Hoffman W.H. Sequential abnormalities in type 1 diabetic encephalopathy and the effects of C-peptide // Rev. Diabet. Stud. 2009. Vol. 6, N 3. P. 211-222.
14.          Wahren J., Kallas A., Sima A.A. The clinical potential of C-peptide replacement in type 1 diabetes // Diabetes. 2012. Vol. 61, N 4. P. 761-772.
15.          Wang G., Fang H., Zhen Y., Xu G., Tian J., Zhang Y., Zhang D., Zhang G., Xu J., Zhang Z., Qiu M., Ma Y., Zhang H., Zhang X. Sulforaphane prevents neuronal apoptosis and memory impairment in diabetic rats // Cell.
Physiol. Biochem. 2016. Vol. 39, N 3. P. 901-907.

Фармакология и токсикология
Экспериментальная и клиническая фармакокинетика флуоксетина и амитриптилина: сравнительный анализ и возможные методы экстраполяции
С.Н.Кондратенко1, М.И.Савельева2, В.Г.Кукес1, Е.В.Ших1, Е.Т.Гнеушев3 330
1Кафедра клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней (зав. — проф. Е.В.Ших) ФГАОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва; 2кафедра клинической фармакологии и терапии (зав. — проф. Д.А.Сычев) ФГБОУ ДПО Российской медицинской академии непрерывного профессионального образования Минздрава России, Москва; 3лаборатория лекарственной токсикологии (зав. — проф. Е.В.Арзамасцев) ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва
         
Изучена фармакокинетика двух капсулированных препаратов флуоксетина и двух таблетированных препаратов амитриптилина у собак и практически здоровых людей после однократного перорального приема. Установлены высокие достоверные корреляции между концентрациями в плазме крови собак и добровольцев флуоксетина (r=0.96, p<0.00001, n=11) и амитриптилина (r=0.78, p<0.0224, n=8). Также выявлена средняя недостоверная корреляция — между концентрациями нортриптилина (r=0.69, p<0.199, n=5) в плазме крови собак и добровольцев. Параметры относительной биодоступности воспроизведенных препаратов у собак и практически здоровых людей достоверно не различаются. У добровольцев по сравнению с животными наблюдаются аналогичные тенденции изменения фармакокинетических параметров флуоксетина и амитриптилина. Предложены и обоснованы методы экстраполяции на человека экспериментальной фармакокинетики флуоксетина и амитриптилина.
Ключевые слова: флуоксетин, амитриптилин, нортриптилин, фармакокинетика, экстраполяция
Адрес для корреспонденции: snko@mail.ru. Кондратенко С.Н.
Литература
1.            Бицадзе Н.О. Диагностика депрессивных расстройств у пациентов пожилого возраста в общемедицинской практике // Клин. геронтол. 2002. Т. 8, № 6. С. 11-14.
2.            Гуськова Т.А. Доклинические токсикологические исследования лекарственных средств как основа их безопасного применения в клинике // Клин. исслед. лекарст. средств в России. 2004. № 3-4. С. 8-15.
3.            Каркищенко Н.Н. Основы биомоделирования. М., 2004.
4.            Клиническая фармакогенетика / Под ред. В.Г.Кукеса, Н.П.Бочкова. М., 2007.
5.            Клиническая фармакология по Гудману и Гилману. В 4 т. / Под ред. А.Г.Гилмана. М., 2006.
6.            Кукес В.Г., Грачев С.В., Сычев Д.А., Раменская Г.В. Метаболизм лекарственных средств. Научные основы персонализированной медицины: руководство для врачей. М., 2008. С. 240-253.
7.            Кукес В.Г., Раменская Г.В., Кучумов Р.С., Астаев О.Н., Сычев Д.А., Румянцев А.С. Значение генотипирования полиморфных “медленных” аллелей цитохрома Р-4502D6 для индивидуализированной оценки фармакокинетики амитриптилина в московской популяции // Клин. исслед. лекарст. средств в России. 2002. № 3-4. С. 40-46.
8.            Ларина С.Н., Игнатьев И.В., Чебышев Н.В., Раменская Г.В., Пасхина О.Е. Оптимизация моделирования биотрансформации лекарственных средств цитохромами CYP-системы // Биомедицина. 2007. № 6. С. 48-56.
9.            Мосолов С.Н. Клиническая диагностика и фармакотерапия депрессий в соматической практике // Тер. арх. 1999. Т. 71, № 10. С. 70-76.
10.          Оценка биоэквивалентности лекарственных средств. Методические указания. М., 2008. С. 18-21.
11.          Психофармакологические и противоэпилептические препараты, разрешенные к применению в России / Под ред. С.Н. Мосолова. М., 2004.
12.          Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских исследованиях / Под ред. Н.Н. Каркищенко, С.В. Грачева. М., 2010.
13.          Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. М., 2012.
14.          Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М
., 2000. С. 105-113.
15.          Linden R., Antunes M.V., Ziulkoski A.L., Wingert M., Tonello P., Tzvetkov M., Souto A.A. Determination of Amitriptyline and its Main Metabolites in Human Plasma Samples using HPLC-DAD: Application to the Determination of Metabolic Ratios after Single Oral Dose of Amitriptyline // J. Braz.
Chem. Soc. 2008. Vol. 19, N 1. P. 35-41.

Роль монооксида углерода в механизмах действия внеклеточного АТФ на сократительную активность сосудистых гладкомышечных клеток
Л.В.Смаглий, Ю.О.Ярцева, В.С.Рыдченко, Ю.Г.Бирулина, С.В.Гусакова, И.В.Ковалев, И.В.Петрова, А.В.Носарев – 338
ФГБОУ ВО Сибирский государственный медицинский университет Минздрава России, Томск
         
Исследовали роль монооксида углерода (СО) в действии агониста P2X и P2Y рецепторов АТФ на тонус сегментов аорты крысы с интактным эндотелием. АТФ (1-1000 мкМ) и агонист P2X-рецепторов a,b-MeATP (100 мкМ) расслабляли сегменты, предсокращенные фенилэфрином (10 мкМ), а УТФ (100-1000 мкМ) увеличивал амплитуду фенилэфрининдуцированного сокращения. Релаксирующее действие АТФ усиливалось CORM II (100 мкМ), ингибитором NO-синтазы L-NAME и ингибитором гуанилатциклазы ODQ и ослаблялось ZnPP IX (100 мкМ). Констрикторное действие УТФ ослаблялось CORM II (100 мкМ), но не изменялось при действии ZnPP IX (100 мкМ). ZnPP IX (100 мкМ) уменьшал расслабление в ответ на a,b-MeATP. Таким образом, АТФ вовлекает СО-зависимый сигнальный каскад через P2X-рецепторы.
Ключевые слова: сосудистые гладкомышечные клетки, пуринергические рецепторы, монооксид углерода, оксид азота
Адрес для корреспонденции: lud.smagly@yandex.ru. Смаглий Л.В.
Литература
1.            Bodin P., Burnstock G. ATP-stimulated release of ATP by human endothelial cells // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1996. Vol. 27, N 6. P. 872-875.
2.            Bolognesi M., Sacerdoti D., Piva A., Di Pascoli M., Zampieri F., Quarta S., Motterlini R., Angeli P., Merkel C., Gatta A. Carbon monoxide-mediated activation of large-conductance calcium-activated potassium channels contributes to mesenteric vasodilatation in cirrhotic rats // J. Pharmacol. Exper. Ther. 2007. Vol. 321, N 1. P. 187-194.
3.            Gil V., Gallego D., Grasa L., Martín M.T., Jiménez M. Purinergic and nitrergic neuromuscular transmission mediates spontaneous neuronal activity in the rat colon // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2010. Vol. 299, N 1. P. G158-G169.
4.            Heinemann S.H., Hoshi T., Westerhausen M., Schiller A. Carbon monoxide — physiology, detection and controlled release // Chem. Commun (Camb). 2014. Vol. 50, N 28. P. 3644-3660.
5.            Kaide J.I., Zhang F., Wei Y., Jiang H., Yu C., Wang W.H., Balazy M., Abraham N.G., Nasjletti A. Carbon monoxide of vascular origin attenuates the sensitivity of renal arterial vessels to vasoconstrictors // J. Clin. Invest. 2001. Vol. 107, N 9. P. 1163-1171.
6.            Kennedy C., McLaren G.J., Westfall T.D., Sneddon P. ATP as a co-transmitter with noradrenaline in sympathetic nerves — function and fate // Ciba Found. Symp. 1996. Vol. 198. P. 223-235.
7.            Maines M.D. The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1997. Vol. 37. P. 517-554.
8.            Morikawa T., Kajimura M., Nakamura T., Hishiki T., Nakanishi T., Yukutake Y., Nagahata Y., Ishikawa M., Hattori K., Takenouchi T., Takahashi T., Ishii I., Matsubara K., Kabe Y., Uchiyama S., Nagata E., Gadalla M.M., Snyder S.H., Suematsu M. Hypoxic regulation of the cerebral microcirculation is mediated by a carbon monoxide-sensitive hydrogen sulfide pathway // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2012. Vol. 109, N 4. P. 1293-1298.
9.            Ralevic V., Burnstock G. Receptors for purines and pyrimidines // Pharmacol. Rev. 1998. Vol. 50, N 3. P. 413-492.
10.          Sikora J., Orlov S.N., Furuya K., Grygorczyk R. Hemolysis is a primary ATP-release mechanism in human erythrocytes // Blood. 2014. Vol. 124, N 13. P. 2150-2157.
11.          Steidle J., Diener M. Effects of carbon monoxide on ion transport across rat distal colon // Am. J. Physiol.
Gastrointest. Liver Physiol. 2011. Vol. 300, N 2. P. G207-G216.

Иммунология и микробиология
Кинетика цитокинов в сыворотке крови мышей при введении культуральных супернатантов стрептококка группы А
Т.А.Данилова, Г.А.Данилина, А.А.Аджиева, А.Г.Минко – 342
Лаборатория индикации и ультраструктурного анализа микроорганизмов (зав. — канд. мед. наук В.Г.Жуховицкий) ФГБУ Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи Минздрава России, Москва
         
Изучен профиль цитокинов в сыворотке крови мышей линии СВА через 1, 5 и 24 ч после внутрибрюшинного введения супернатантов бульонной культуры стрептококка группы А типов 1М, 3М, а также штамма Dochez NY 5 типа 10М. Уровень цитокинов в крови повышался при введении супернатантов всех трех типов, однако наибольшие значения регистрировались при использовании супернатанта Dochez NY 5. Наиболее значительно по сравнению с контролем повышался уровень ИЛ-2 (в 51 раз), и ИЛ-5 (в 8.9 раза). Уровень ИЛ-2 повышался также при введении супернатантов 1М и 3М типов, но в меньшей степени (в 5 и 2.3 раза соответственно). Содержание провоспалительных цитокинов ИЛ-1b, ФНО-a и ИФН-g в крови мышей повышалось значительно меньше при введении всех трех супернатантов.
Ключевые слова: цитокины, стрептококк группы А, супернатант, суперантигены
Адрес для корреспонденции: dansen@inbox.ru. Данилова Т.А.
Литература
1.            Данилова Т.А. Инвазивная инфекция, вызываемая стрептококками группы А, и синдром стрептококкового токсического шока// Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 2001. № 3. С. 99-105.
2.            Данилова Т.А. Суперантигены стрептококков группы А // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 2002. № 2. С. 94-102.
3.            Данилова Т.А., Аджиева А.А., Данилина Г.А., Лунин В.Г., Грабко В.И., Минко А.Г. Изменение профиля цитокинов в сыворотке крови мышей при введении культуры стрептококка группы А // Бюл. экспер. биол.
2015. Т. 159, № 1. С. 75-78.
4.            Baldassari L.E., Rose J.W. Daclizumab: Development, Clinical Trials, and Practical Aspects of Use in Multiple Sclerosis // Neurotherapeutics. 2017. Vol. 14, N 4. P. 842-858.
5.            Cavaillon J.M. Exotoxins and endotoxins: Inducers of inflammatory cytokines // Toxicon. 2018. Vol. 149. P. 45-53.
6.            Clark I.A., Vissel B. The meteorology of cytokine storms, and the clinical usefulness of this knowledge // Semin. Immunopathol. 2017. Vol. 39, N 5. P. 505-516.
7.            Cusumano V., Fera M.T., Carbone M., Anzani Ciliberti F., Bellantoni A., Cusumano V. Synergic activities of streptococcal pyrogenic exotoxin A and lipoteichoic acid in cytokine induction // New Microbiol. 2000. Vol. 23, N 1. P. 37-45.
8.            Fieber C., Kovarik P. Responses of innate immune cells to group A Streptococcus // Front. Cell. Infect. Microbiol. 2014. Vol. 4. P. 140. doi: 10.3389/fcimb.2014.00140.
9.            Gerlach H. Agents to reduce cytokine storm // F1000Res. 2016. Vol. 5. P. 2909. doi: 10.12688/f1000research. 9092.1.
10.          Proft T., Schrage B., Fraser J.D. The cytokine response to streptococcal superantigens varies between individual toxins and between individuals: implications for the pathogenesis of group A streptococcal diseases // J. Interferon Cytokine Res. 2007. Vol. 27, N 7. P. 553-557.
11.          Schulte W., Bernhagen J., Bucala R. Cytokines in Sepsis: Potent Immunoregulators and Potential Therapeutic Targets — An Updated View // Mediators of Inflammation. 2013. Vol. 2013. ID 165974. http://dx.doi.org/10.1155/2013/165974.
12.          Wang S.M., Lu I.H., Lin Y.L., Lin Y.S., Wu J.J., Chuang W.J., Lin M.T., Liu C.C. The severity of Streptococcus pyogenes infections in children is significantly associated with plasma levels of inflammatory cytokines // Diagn.
Microbiol. Infect. Dis. 2008. Vol. 61, N 2. P. 165-169.

Композиция мурамилпептидов грамотрицательных бактерий корригирует гематологические и иммунологические расстройства, индуцированные циклофосфамидом
М.В.Киселевский1, Н.Ю.Анисимова1, С.М.Ситдикова1, Ф.В.Доненко1, С.Ф.Попилюк2, В.Л.Львов3, О.В.Калюжин4346
1Лаборатория клеточного иммунитета (зав. — д-р мед. наук, проф. М.В.Киселевский) ФГБУ НМИЦ онкологии им. Н.Н.Блохина Минздрава России, Москва; 2ООО “КорусФарма”, резидент кластера “Биомедицинские технологии” Фонда “Сколково”, Московская обл., РФ; 3Лаборатория № 16 препаративной биохимии антигенов (зав. — канд. мед. наук В.Л.Львов) ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России, Москва; 4Кафедра клинической иммунологии и аллергологии (зав. — акад. РАН, д-р мед. наук, проф. А.В.Караулов) ФГАОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва
         
Изучено влияние композиции трех природных мурамилпептидов, содержащих остаток мезо-диаминопимелиновой кислоты (полимурамил), на субпопуляционный состав циркулирующих Т-лимфоцитов, морфологию селезенки и число лейкоцитов в крови мышей линии C57Bl/6 с иммуносупрессией, индуцированной циклофосфамидом. Внутрибрюшинное введение циклофосфамида в дозе 100 мг/кг на 1, 3, 5 и 7-е сутки эксперимента снижало число лейкоцитов и относительное количество CD4+Т-лимфоцитов крови, а также обедняло клеточный состав белой пульпы селезенки на 10-е сутки исследования. Подкожные инъекции полимурамила в дозе 200 мкг/мышь на 8-е и 9-е сутки практически полностью восстанавливали число лейкоцитов в крови, а также морфологию белой пульпы селезенки. Кроме того, введение полимурамила сопровождалось выраженной тенденцией к увеличению относительного числа CD4+Т-лимфоцитов крови и индекса CD4/CD8 у мышей с циклофосфамидиндуцированной иммуносупрессией.
Ключевые слова: мурамилпептиды, полимурамил, циклофосфамид, иммуносупрессия, иммунокоррекция
Адрес для корреспонденции: kisele@inbox.ru. Киселевский М.В.
Литература
1.            Караулов А.В., Калюжин О.В. Сфера применения мурамилпептидов в рамках основных подходов к иммунотерапии/иммунопрофилактике инфекционных болезней // Физиол. и патол. иммун. системы. 2013. Т. 17, № 5. С. 3-15.
2.            Лебединская Е.А., Лебединская О.В., Годовалов А.П., Прокудин В.С. Иммуноморфологические особенности тимуса крыс на фоне введения цитостатика в эксперименте // Саратовск. науч.-мед. журн. 2016. Т. 12, № 1. С. 12-14.
3.            Лебединская Е.А., Лосева Л.Ф., Лебединская О.В., Ахматова Н.К., Семенова И.Б., Годовалов А.П., Киселевский М.В. Коррекция изменений цитотокинового профиля мышей с индуцированной иммуносупрессией // Цитокины и воспаление. 2011. T. 10, № 3. C. 108-112.
4.            Патент РФ № 2441906. Применение композиции, состоящей из низкомолекулярных фрагментов пептидогликана грамотрицательных бактерий, для лечения и профилактики заболеваний человека / В.Л.Львов, Б.В.Пинегин, Р.М.Хаитов, М.В.Пащенков // Бюл. № 4. Опубликовано
10.02.2012.
5.            Fukuoka M., Takada M., Takifuji N., Sakai N., Ryu S., Masuda N., Matsui K., Negoro S., Kusunoki Y., Tubura E. Restorative effect of muroctasin on leukopenia caused by anticancer chemotherapy in lung cancer. Comparative study by envelope method // Arzneimittelforschung. 1989. Vol. 39, N 1. P. 90-93.
6.            Kelleher F.C., O'Sullivan H. Monocytes, macrophages, and osteoclasts in osteosarcoma // J. Adolesc. Young Adult Oncol. 2017. Vol. 6, N 3. P. 396-405.
7.            Meyers P.A., Chou A.J. Muramyl tripeptide-phosphatidyl ethanolamine encapsulated in liposomes (L-MTP-PE) in the treatment of osteosarcoma // Adv. Exp. Med. Biol. 2014. Vol. 804. P. 307-321.
8.            Roberts S.S., Chou A.J., Cheung N.K. Immunotherapy of Childhood Sarcomas // Front. Oncol. 2015. Vol. 5. ID 181. doi: 10.3389/fonc.2015.00181.
9.            Wuest B., Wachsmuth E.D. Stimulatory effect of N-acetyl muramyl dipeptide in vivo: proliferation of bone marrow progenitor cells in mice // Infect.
Immun. 1982. Vol. 37, N 2. P. 452-462.

Влияние гетерологичной экспрессии хемотаксисных белков бактерий рода Thermotoga на кинетику роста клеток Escherichia coli
Д.В.Гришин1, В.А.Самойленко2, Ю.А.Гладилина1, Д.Д.Жданов1, М.В.Покровская1, С.С.Александрова1, В.С.Покровский1, Н.Н.Соколов1351
1ФГБНУ Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва, РФ; 2ФГБУН Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К.Скрябина РАН, Пущино, Московская обл., РФ
         
В процессе оптимизации гетерологичной экспрессии термостабильных хемотаксисных белков CheW и CheY в качестве промышленно ценных полипептидов наблюдалось их непосредственное влияние на кинетику роста клеток E. coli и их морфологию. CheW и CheY бактерий рода Thermotoga, экспрессированные в рекомбинантном виде в клетках E. coli, включаются в соответствующие сигнальные пути данных мезофильных микроорганизмов. При этом эффекты такого вовлечения в метаболизм клеток “хозяина” чрезвычайно разнообразны: от быстрого старения культуры до увеличения продолжительности стационарной фазы роста. Рассмотрены механизмы влияния гетерологичных хемотаксисных белков на клетки, их положительные и отрицательные эффекты, а также потенциальные области применения в промышленности и биомедицине.
Ключевые слова: хемотаксисные белки, рекомбинантные полипептиды, кинетика роста, экспрессия в E. coli
Адрес для корреспонденции: molbiol_ibm@inbox.ru. Гришин Д.В.
Литература
1.            Гришин Д.В., Жданов Д.Д., Гладилина Ю.А., Подобед О.В., Покровский В.С., Покровская М.В., Александрова С.С., Соколов Н.Н. Термостабильные рекомбинантные полипептиды как источник L-аминокислот в составе культуральных сред // Бюл. экспер. биол. 2018. Т. 165, № 4. С. 452-456.
2.            Гришин Д.В., Жданов Д.Д., Гладилина Ю.А., Покровский В.С., Подобед О.В., Покровская М.В., Александрова С.С., Милюшкина А.Л., Виговский М.А., Соколов Н.Н. Получение и характеристика рекомбинантного мутантного гомолога белка CheW из гипертермофильного микроорганизма Thermotoga petrophila RKU-1 // Биомед. химия.
2018. Т. 64, № 1. С. 53-60.
3.            Alexandre G., Zhulin I.B. Different evolutionary constraints on chemotaxis proteins CheW and CheY revealed by heterologous expression studies and protein sequence analysis // J. Bacteriol. 2003. Vol. 185, N 2. P. 544-552.
4.            Boukhvalova M.S., Dahlquist F.W., Stewart R.C. CheW binding interactions with CheA and Tar: importance for chemotaxis signaling in Escherichia coli // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277, N 25. P. 22 251-22 259.
5.            Drury L. Transformation of bacteria by electroporation. // Methods Mol. Biol. 1996. Vol. 58. P. 249-256.
6.            Gibson D.G. Enzymatic assembly of overlapping DNA fragments // Methods Enzymol. 2011. Vol. 498. P. 349-361.
7.            Lee S.Y., Cho H.S., Pelton J.G., Yan D., Henderson R.K., King D.S., Huang L., Kustu S., Berry E.A., Wemmer D.E. Crystal structure of an activated response regulator bound to its target // Nat. Struct. Biol. 2001. Vol. 8, N 1. P. 52-56.
8.            Oleskin A.V., Botvinko I.V., Tsavkelova E.A. Colonial organization and intercellular communication in microorganisms // Mikrobiologiia. 2000. Vol. 69, N 3. P. 309-327.
9.            Silversmith R.E., Smith J.G., Guanga G.P., Les J.T., Bourret R.B. Alteration of a nonconserved active site residue in the chemotaxis response regulator CheY affects phosphorylation and interaction with CheZ // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276, N 21. P. 18 478-18 484.
10.          Sourjik V., Berg H.C. Localization of components of the chemotaxis machinery of Escherichia coli using fluorescent protein fusions // Mol. Microbiol. 2000. Vol. 37, N 4. P. 740-751.
11.          Zhao R., Collins E.J., Bourret R.B., Silversmith R.E. Structure and catalytic mechanism of the E. coli chemotaxis phosphatase CheZ // Nat.
Struct. Biol. 2002. Vol. 9, N 8. P. 570-575.

Генетика
Селективное преимущество гетерозиготных носителей мутации с.-23+1G>A гена GJB2, приводящей к аутосомно-рецессивной глухоте типа 1А
А.В.Соловьев1,2, Н.А.Барашков1,2, Ф.М.Терютин1,2, В.Г.Пшенникова1,2, Г.П.Романов1,2, А.М.Рафаилов1, Н.Н.Сазонов1, Л.У.Джемилева3, М.И.Томский2, О.Л.Посух4, Э.К.Хуснутдинова3,5, С.А.Федорова1,2356
1Институт естественных наук ФГАОУ ВО Северо-Восточного федерального университета им. М.К.Аммосова, Якутск, РФ; 2ФГБНУ Якутский научный центр комплексных медицинских проблем, Якутск, РФ; 3ФГБНУ Институт биохимии и генетики Уфимского федерального исследовательского центра РАН, Уфа, РФ; 4ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, РФ; 5ФГБОУ ВО Башкирский государственный университет, Уфа, РФ
         
В работе представлены результаты проведенного анализа толщины эпидермиса кожи у людей с рецессивной мутацией c.-23+1G>A гена GJB2 по сравнению с пациентами без данной мутации, проживающих в Восточной Сибири (якуты). Исследуемая выборка состояла из 152 человек с разными GJB2-генотипами по мутации c.-23+1G>A. Утолщенный по сравнению с людьми без этой мутации (0.193 мм) слой эпидермиса был обнаружен как у гомозиготных (0.245 мм), так и у гетерозиготных носителей мутации c.-23+1G>A (0.269 мм) (p<0.05). Полученные данные свидетельствуют в пользу гипотезы о селективном преимуществе гетерозиготных носителей мутантных аллелей гена GJB2, что может объяснять экстремально высокую частоту гетерозиготного носительства (10.3%) мутации c.-23+1G>A в популяции якутов.
Ключевые слова: ген GJB2, мутация c.-23+1G>A, толщина эпидермиса, селективное преимущество гетерозигот, Восточная Сибирь
Адрес для корреспонденции: nelloann@mail.ru. Соловьев А.В.
Литература
1.           
Barashkov N.A., Solovyev A.V., Teryutin F.M., Pshennikova V.G., Klarov L.A., Romanov G.P., Nakhodkin S.S., Savvinova K.E., Gotovtsev N.N., Solovyeva N.A., Kozhevnikov A.A., Vasilyeva L.M., Fedotova E.E., Pak M.V., Lekhanova S.N., Zakharova E.V., Rafailov A.M., Luginov N.V., Alexeev A.N., Posukh O.L., Dzhemileva L.U., Khusnutdinova E.K., Fedorova S.A. Extremely High Carrier Frequency of the GJB2 Splice Site IVS1+1G>A Mutation in Eastern Siberia is Comparable to the Carrier Frequency of the Sickle Cell Anemia in Africa // J. Genet. Genome Res. 2014. Vol. 1, N 1. doi: 10.23937/2378-3648/1410001.
2.            Common J.E., Di W.L., Davies D., Kelsell D.P. Further evidence for heterozygote advantage of GJB2 deafness mutations: a link with cell survival // J. Med. Genet. 2004. Vol. 41, N 7. P. 573-575.
3.            D'Adamo P., Guerci V.I., Fabretto A., Faletra F., Grasso D.L., Ronfani L., Montico M., Morgutti M., Guastalla P., Gasparini P. Does epidermal thickening explain GJB2 high carrier frequency and heterozygote advantage? // Eur. J. Hum. Genet. 2009. Vol. 17, N 3. P. 284-286.
4.            Guastalla P., Guerci V.I., Fabretto A., Faletra F., Grasso D.L., Zocconi E., Stefanidou D., D'Adamo P., Ronfani L., Montico M., Morgutti M., Gasparini P. Detection of epidermal thickening in GJB2 carriers with epidermal US // Radiology. 2009. Vol. 251, N 1. P. 280-286.
5             Kelley P.M., Harris D.J., Comer B.C., Askew J.W., Fowler T., Smith S.D., Kimberling W.J. Novel mutations in the connexin 26 gene (GJB2) that cause autosomal recessive (DFNB1) hearing loss // Am. J. Hum. Genet. 1998. Vol. 62, N 4. P. 792-799.
6.            Krawczak M., Zschocke J. A role for overdominant selection in phenylketonuria? Evidence from molecular data // Hum. Mutat. 2003. Vol. 21, N 4. P. 394-397.
7.            Labarthe M.P., Bosco D., Saurat J.H., Meda P., Salomon D. Upregulation of connexin 26 between keratinocytes of psoriatic lesions // J. Invest. Dermatol. 1998. Vol. 111, N 1. P. 72-76.
8.            Man Y.K., Trolove C., Tattersall D., Thomas A.C., Papakonstantinopoulou A., Patel D., Scott C., Chong J., Jagger D.J., O’Toole E.A., Navsaria H., Curtis M.A., Kelsell D.P. A deafness-associated mutant human connexin 26 improves the epithelial barrier in vitro // J. Membr. Biol. 2007. Vol. 218, N 1-3. P. 29-37.
9.            Meyer C.G., Amedofu G.K., Brandner J.M., Pohland D., Timmann C., Horstmann R.D. Selection for deafness? // Nat. Med. 2002. Vol. 8, N 12. P. 1332-1333.
10.          Nance W.E. The genetics of deafness // Ment. Retard. Dev. Disabil. Res. Rev. 2003. Vol. 9, N 2. P. 109-119.
11.          Piel F.B., Patil A.P., Howes R.E., Nyangiri O.A., Gething P.W., Williams T.N., Weatherall D.J., Hay S.I. Global distribution of the sickle cell gene and geographical confirmation of the malaria hypothesis // Nat. Commun. 2010. Vol. 1. P. 104.
12.          Sirmaci A., Akcayoz-Duman D., Tekin M. The c.IVS1+1G>A mutation in the GJB2 gene is prevalent and large deletions involving the GJB6 gene are not present in the Turkish population // J. Genet. 2006. Vol. 85, N 3. P. 213-216.
13.          Vuckovic D., Dallapiccola B., Franz
и A., Mauri L., Perrone M.D., Gasparini P. Connexin 26 variant carriers have a better gastrointestinal health: is this the heterozygote advantage? // Eur. J. Hum. Genet. 2015. Vol. 23, N 5. P. 563-564.
14.          Williams T.N., Wambua S., Uyoga S., Macharia A., Mwacharo J.K., Newton C.R., Maitland K. Both heterozygous and homozygous alpha+ thalassemias protect against severe and fatal Plasmodium falciparum malaria on the coast of Kenya // Blood. 2005. Vol. 106, N 1. P. 368-371.
15.          Wiuf C. Do delta F508 heterozygotes have a selective advantage? // Genet.
Res. 2001. Vol. 78, N 1. P. 41-47.

Экспериментальное изучение констелляции генов холодоадаптированных доноров аттенуации живой гриппозной вакцины типа В
Е.В.Крутикова, Е.А.Степанова, И.В.Киселева, Л.Г.Руденко – 360
Отдел вирусологии им. А.А.Смородинцева ФГБНУ Института экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, РФ
         
Проведено экспериментальное изучение констелляции полимеразных генов доноров аттенуации отечественной живой гриппозной вакцины типа В. Получали реассортанты резервного донора аттенуации В/Ленинград/14/17/55 с донором аттенуации В/СССР/60/69, использующимся для подготовки штаммов сезонной живой гриппозной вакцины. Большая часть реассортантов, полученных методом классической реассортации, унаследовала все гены от вируса В/Ленинград/14/17/55, за исключением гена, кодирующего субъединицу PB1 полимеразного комплекса. Для дальнейшего изучения роли гена PB1 был выбран один из реассортантов. Оценка аттенуированности штамма для экспериментальных животных показала его бóльшую аттенуированность по сравнению с исходными штаммами. Это говорит о высокой степени констелляции генов холодоадаптированных доноров аттенуации, а также о важной компенсирующей роли аминокислотных замен в белке РВ1 донора В/Ленинград/14/17/55 для предупреждения гиператтенуации вируса.
Ключевые слова: вирус гриппа В, доноры аттенуации, живая гриппозная вакцина, аттенуация, констелляция генов
Адрес для корреспонденции: krutikova.iem@mail.ru. Крутикова Е.В.
Литература
1.            Патент РФ № 2068271. Аттенуированный холодоадаптированный штамм вируса гриппа В/Ленинград/14/17/55 для получения штаммов живой гриппозной вакцины / Г.И.Александрова. Опубликовано 27.10.1996.
2.            Патент РФ № 2084525. Аттенуированный холодоадаптированный штамм вируса гриппа В СССР(69)Е для получения живой интраназальной гриппозной вакцин / Г.И.Александрова, А.Ю.Егоров. Опубликовано 20.07.1997.
3.            Дорошенко Е.М., Григорьева Е.П. Безопасность, иммуногенность и эффективность живых гриппозных аттенуированных интраназальных вакцин — опыт многолетнего применения в различных возрастных группах // Эпидемиол. и вакцинопроф. 2013. № 4. С. 67-73.
4.            Крутикова Е.В., Киселева И.В., Федорова Е.А., Дубровина И.А., Большунова Е.А., Руденко Л.Г. Холодоадаптированныи вирус В/Ленинград/14/17/55 — альтернативный донор аттенуации живой гриппозной вакцины для детей младшего возраста // Мед. акад. журн. 2016. Т. 16, № 4. C. 156-157.
5.            СП 2.2.1.3218-14 “Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)”. Москва
, 2014.
6.            Chen Z., Aspelund A., Kemble G., Jin H. Genetic mapping of the cold-adapted phenotype of B/Ann Arbor/1/66, the master donor virus for live attenuated influenza vaccines (FluMist) // Virology. 2006. Vol. 345, N 2. P. 416-423.
7.            Fulvini A.A., Ramanunninair M., Le J., Pokorny B.A., Arroyo J.M., Silverman J., Devis R., Bucher D. Gene constellation of influenza A virus reassortants with high growth phenotype prepared as seed candidates for vaccine production // PLoS One. 2011. Vol. 6, N 6. e20823. doi: 10.1371/journal.pone.0020823.
8.            Hoffmann E., Mahmood K., Chen Z., Yang C.F., Spaete J., Greenberg H.B., Herlocher M.L., Jin H., Kemble G. Multiple gene segments control the temperature sensitivity and attenuation phenotypes of ca B/Ann Arbor/1/66 // J. Virol. 2005. Vol. 79, N 17. P. 11 014-11 021.
9.            Isakova-Sivak I., Chen L.M., Matsuoka Y., Voeten J.T., Kiseleva I., Heldens J.G., den Bosch Hv., Klimov A., Rudenko L., Cox N.J., Donis R.O. Genetic bases of the temperature-sensitive phenotype of a master donor virus used in live attenuated influenza vaccines: A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) // Virology. 2011. Vol. 412, N 2. P. 297-305.
10.          Jin H., Lu B., Zhou H., Ma C., Zhao J., Yang C.F., Kemble G., Greenberg H. Multiple amino acid residues confer temperature sensitivity to human influenza virus vaccine strains (FluMist) derived from cold-adapted A/Ann Arbor/6/60 // Virology. 2003. Vol. 306, N 1. P. 18-24.
11.          Kiseleva I.V., Voeten J.T., Teley L.C., Larionova N.V., Drieszen-van der Cruijsen S.K., Basten S.M., Heldens J.G., van den Bosch H., Rudenko L.G. PB2 and PA genes control the expression of the temperature-sensitive phenotype of cold-adapted B/USSR/60/69 influenza master donor virus // J. Gen. Virol. 2010. Vol. 91, Pt 4. P. 931-937.
12.          Larionova N., Kiseleva I., Dubrovina I., Bazhenova E., Rudenko L. Peculiarities of reassortment of a cold-adapted influenzaA master donor virus with influenza A virusescontaining hemagglutinin and neuraminidase of avianH5N1 origin // Influenza and other Respiratory Viruses. 2011. Vol. 5, Suppl. 1. P. 346-349.
13.          Noda T., Kawaoka Y. Structure of influenza virus ribonucleoprotein complexes and their packaging into virions // Rev. Med. Virol. 2010. Vol. 20, N 6. P. 380-391.
14.          Reich S., Guilligay D., Pflug A., Malet H., Berger I., Crépin T., Hart D., Lunardi T., Nanao M., Ruigrok R.W., Cusack S. Structural insight into cap-snatching and RNA synthesis by influenza polymerase // Nature.
2014. Vol. 516. P. 361-366.

Онкология
Молекула, повреждающая почки (KIM-1), в плазме крови больных светлоклеточным почечно-клеточным раком
Н.Е.Кушлинский1, Е.С.Герштейн1, Д.С.Набережнов1, М.А.Таипов2, С.Д.Бежанова1, Д.Ю.Пушкарь2, В.Б.Матвеев1, И.С.Стилиди1364
1ФГБУ НМИЦ онкологии им. Н.Н.Блохина Минздрава России, Москва; 2ФГБОУ ВО МГМСУ им. А.И.Евдокимова Минздрава России, Москва
         
Содержание KIM-1 (kidney injury molecule — молекула, повреждающая почку) определяли в плазме крови 99 больных светлоклеточным раком и 14 пациентов с доброкачественными опухолями почки с помощью стандартного набора для прямого ИФА (Human Serum TIM-1/KIM-1/HAVCR Quantikine ELISA). В контрольную группу вошли 15 практически здоровых мужчин и 14 женщин. Содержание KIM-1 в плазме крови больных раком и доброкачественными опухолями почки достоверно повышено по сравнению с контролем (p<0.00001 и p<0.01 соответственно), при этом показатели пациентов с доброкачественными новообразованиями высокодостоверно ниже, чем у больных раком (p<0.0001). Уровень KIM-1 высокодостоверно возрастает с увеличением стадии заболевания (p<0.0001) и уже на I стадии достоверно превышает значения в группе контроля (p<0.0001) и у пациентов с доброкачественными опухолями (p<0.01). Наилучшее соотношение чувствительности и специфичности для выявления рака I стадии (81 и 83% соответственно) достигается при пороговом уровне 77 пг/мл, чувствительность выявления II-IV стадий при этом составляет 97%. Уровень маркера в плазме достоверно возрастает с увеличением размера и распространенности первичной опухоли (T), выше у больных с метастазами в регионарных лимфатических узлах независимо от их количества (N1 или N2), чем у больных без регионарных метастазов (N0), повышен при наличии отдаленных метастазов (М+), а также в 7 раз выше при опухолях III-IV степени злокачественности по сравнению с I-II степенью (p<0.0001). Таким образом, KIM-1 может стать высокочувствительным маркером раннего выявления почечно-клеточного рака.
Ключевые слова: молекула, повреждающая почки (KIM-1); светлоклеточный рак почки; плазма крови; ранняя диагностика
Адрес для корреспонденции: kne31.08@gmail.com. Кушлинский Н.Е.
Литература
1.            Abassi Z., Shalabi A., Sohotnik R., Nativ O., Awad H., Bishara B., Frajewicki V., Sukhotnik I., Abbasi A., Nativ O. Urinary NGAL and KIM-1: biomarkers for assessment of acute ischemic kidney injury following nephron sparing surgery // J. Urol. 2013. Vol. 189, N 4. P. 1559-1566.
2.            Bailly V., Zhang Z., Meier W., Cate R., Sanicola M., Bonventre J.V. Shedding of kidney injury molecule-1, a putative adhesion protein involved in renal regeneration // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277, N 42. P. 39 739-39 748.
3.            Carvalho Pedrosa D., Macedo de Oliveira Neves F., Cavalcante Meneses G., Pinheiro Gomes Wirtzbiki G., da Costa Moraes C.A., Costa Martins A.M., Braga Libório A. Urinary KIM-1 in children undergoing nephrotoxic antineoplastic treatment: a prospective cohort study // Pediatr. Nephrol. 2015. Vol. 30, N 12. P. 2207-2213.
4.            Cuadros T., Trilla E., Sarró E., Vilà M.R., Vilardell J., de Torres I., Salcedo M., López-Hellin J., Sánchez A., Ramón y Cajal S., Itarte E., Morote J., Meseguer A. HAVCR/KIM-1 activates the IL-6/STAT-3 pathway in clear cell renal cell carcinoma and determines tumor progression and patient outcome // Cancer Res. 2014. Vol. 74, N 5. P. 1416-1428.
5.            Fufaa G.D., Weil E.J., Nelson R.G., Hanson R.L., Bonventre J.V., Sabbisetti V., Waikar S.S., Mifflin T.E., Zhang X., Xie D., Hsu C.Y., Feldman H.I., Coresh J., Vasan R.S., Kimmel P.L., Liu K.D.; Chronic Kidney Disease Biomarkers Consortium Investigators. Association of urinary KIM-1, L-FABP, NAG and NGAL with incident end-stage renal disease and mortality in American Indians with type 2 diabetes mellitus // Diabetologia. 2015. Vol. 58, N 1. P. 188-198.
6.            Han W.K., Bailly V., Abichandani R., Thadhani R., Bonventre J.V. Kidney Injury Molecule-1 (KIM-1): a novel biomarker for human renal proximal tubule injury // Kidney Int. 2002. Vol. 62, N 1. P. 237-244.
7.            Ichimura T., Asseldonk E.J., Humphreys B.D., Gunaratnam L., Duffield J.S., Bonventre J.V. Kidney injury molecule-1 is a phosphatidylserine receptor that confers a phagocytic phenotype on epithelial cells // J. Clin. Invest. 2008. Vol. 118, N 5. P. 1657-1668.
8.            Maeda A., Ando H., Ura T., Muro K., Aoki M., Saito K., Kondo E., Takahashi S., Ito Y., Mizuno Y., Fujimura A. Differences in urinary renal failure biomarkers in cancer patients initially treated with cisplatin // Anticancer Res. 2017. Vol. 37, N 9. P. 5235-5239.
9.            McWilliam S.J., Antoine D.J., Sabbisetti V., Pearce R.E., Jorgensen A.L., Lin Y., Leeder J.S., Bonventre J.V., Smyth R.L., Pirmohamed M. Reference intervals for urinary renal injury biomarkers KIM-1 and NGAL in healthy children // Biomark. Med. 2014. Vol. 8, N 10. P. 1189-1197.
10.          Morrissey J.J., London A.N., Lambert M.C., Kharasch E.D. Sensitivity and specificity of urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin and kidney injury molecule-1 for the diagnosis of renal cell carcinoma // Am. J. Nephrol. 2011. Vol. 34, N 5. P. 391-398.
11.          Sabbisetti V.S., Waikar S.S., Antoine D.J., Smiles A., Wang C., Ravisankar A., Ito K., Sharma S., Ramadesikan S., Lee M., Briskin R., De Jager P.L., Ngo T.T., Radlinski M., Dear J.W., Park K.B., Betensky R., Krolewski A.S., Bonventre J.V. Blood kidney injury molecule-1 is a biomarker of acute and chronic kidney injury and predicts progression to ESRD in type I diabetes // J. Am. Soc. Nephrol. 2014. Vol. 25, N 10. P. 2177-2186.
12.          Scelo G., Muller D.C., Riboli E., Johansson M., Cross A.J., Vineis P., Tsilidis K.K., Brennan P., Boeing H., Peeters P.H.M., Vermeulen R.C.H., Overvad K., Bueno-de-Mesquita H.B., Severi G., Perduca V., Kvaskoff M., Trichopoulou A., La Vecchia C., Karakatsani A., Palli D., Sieri S., Panico S., Weiderpass E., Sandanger T.M., Nøst T.H., Agudo A., Quirós J.R., Rodríguez-Barranco M., Chirlaque M.D., Key T.J., Khanna P., Bonventre J.V., Sabbisetti V.S., Bhatt R.S. KIM-1 as a blood-based marker for early detection of kidney cancer: a prospective nested case-control study // Clin. Cancer Res. 2018. Vol. 24, N 22. P. 5594-5601.
13.          Shalabi A., Abassi Z., Awad H., Halachmi S., Moskovitz B., Kluger Y., Nativ O. Urinary NGAL and KIM-1: potential association with histopathologic features in patients with renal cell carcinoma // World J. Urol. 2013. Vol. 31, N 6. P. 1541-1545.
14.          Waanders F., van Timmeren M.M., Stegeman C.A., Bakker S.J., van Goor H. Kidney injury molecule-1 in renal disease // J. Pathol. 2010. Vol. 220, N 1. P. 7-16.
15.          Zhang P.L., Mashni J.W., Sabbisetti V.S., Schworer C.M., Wilson G.D., Wolforth S.C., Kernen K.M., Seifman B.D., Amin M.B., Geddes T.J., Lin F., Bonventre J.V., Hafron J.M. Urine kidney injury molecule-1: a potential non-invasive biomarker for patients with renal cell carcinoma // Int.
Urol. Nephrol. 2014. Vol. 46, N 2. P. 379-388.

Аденилатциклаза-ассоциированный протеин 1 и кофилин в прогрессии немелкоклеточного рака легкого
Е.С.Колегова1, Г.В.Какурина1, И.В.Кондакова1, А.Ю.Добродеев1, Д.Н.Костромицкий2, Л.Д.Жуйкова1369
1ФГБНУ Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН, Томск, РФ; 2ОГАУЗ Томский областной онкологический диспансер, Томск, РФ
         
Исследовали экспрессию мРНК и уровень белков САР1 (аденилатциклаза-ассоциированный протеин 1) и кофилина в тканях больных немелкоклеточным раком легкого. Экспрессия мРНК и уровень САР1 в опухолевой ткани увеличивается при распространении первичной опухоли и ее метастазировании. Показано, что при росте первичной опухоли содержание кофилина в ее тканях снижается на фоне повышения экспрессии его мРНК, а при регионарном метастазировании содержание белка и экспрессия мРНК кофилина возрастает. Установлено, что увеличение уровня изучаемых белков в ткани опухоли повышает риск возникновения метастазов.
Ключевые слова: аденилатциклаза-ассоциированный протеин 1 (CAP1), кофилин, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), опухолевая прогрессия
Адрес для корреспонденции: elenakolegova@oncology.tomsk.ru. Колегова Е.С.
Литература
1.            Бочкарева Н.В., Кондакова И.В., Коломиец Л.А. Роль актинсвязывающих белков в клеточном движении в норме и при опухолевом росте // Мол. мед. 2011.
№ 6. C. 14-18.
2.            Hsouna A., Kim Y.S., VanBerkum M.F. Abelson tyrosine kinase is required to transduce midline repulsive cues // J. Neurobiol. 2003. Vol. 57, N 1. P. 15-30.
3.            Hua M., Yan S., Deng Y., Xi Q., Liu R., Yang S., Liu J., Tang C., Wang Y., Zhong J. CAP1 is overexpressed in human epithelial ovarian cancer and promotes cell proliferation // Int. J. Mol. Med. 2015. Vol. 35, N 4. P. 941-949.
4.            Kakurina G.V., Kolegova E.S., Kondakova I.V. Adenylyl Cyclase-Associated Protein 1: Structure, Regulation, and Participation in Cellular Processes // Biochemistry (Mosc). 2018. Vol. 83, N 1. P. 45-53.
5.            Kondakova I.V., Yunusova N.V., Spirina L.V., Kolomiets L.A., Villert A.B. Association between intracellular proteinase activities and the content of locomotor proteins in tissues of primary tumors and metastases of ovarian cancer // Rus. J. Bioorgan. Chem. 2014. Vol. 40, N 6. P. 681-687.
6             Larsen A.K., Lametsch R., Elce J., Larsen J.K., Thomsen B., Larsen M.R., Lawson M.A., Greer P.A., Ertbjerg P. Genetic disruption of calpain correlates with loss of membrane blebbing and differential expression of RhoGDI-1, cofilin and tropomyosin // Biochem. J. 2008. Vol. 411, N 3. P. 657-666.
7.            Li D., Wang H., Song H., Xu H., Zhao B., Wu C., Hu J., Wu T., Xie D., Zhao J., Shen Q., Fang L. The microRNAs miR-200b-3p and miR-429-5p target the LIMK1/CFL1 pathway to inhibit growth and motility of breast cancer cells // Oncotarget. 2017. Vol. 8, N 49. P. 85 276-85 289.
8.            Makkonen M., Bertling E., Chebotareva N.A., Baum J., Lappalainen P. Mammalian and malaria parasite cyclase-associated proteins catalyze nucleotide exchange on G-actin through a conserved mechanism // J. Biol. Chem. 2013. Vol. 288, N 2. P. :984-994.
9.            Tian X., Wei Z., Wang J., Liu P., Qin Y., Zhong M. MicroRNA-429 inhibits the migration and invasion of colon cancer cells by targeting PAK6/cofilin signaling // Oncol. Rep. 2015. Vol. 34, N 2. P. 707-714.
10.          Torre L.A., Siegel R.L., Ward E.M., Jemal A. Global Cancer Incidence and Mortality Rates and Trends—An Update // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2016. Vol. 25, N 1. P. 16-27.
11.          Wang C., Zhou G.L., Vedantam S., Li P., Field J. Mitochondrial shuttling of CAP1 promotes actin- and cofilin-dependent apoptosis // J. Cell. Sci. 2008. Vol. 121, Pt 17. P. 2913-2920.
12.          Zhou G.L., Zhang H., Field J. Mammalian CAP (Cyclase-associated protein) in the world of cell migration: Roles in actin filament dynamics and beyond // Cell Adh.
Migr. 2014. Vol. 8, N 1. P. 55-59.

Биотехнологии
Реакция иммунокомпетентных клеток небных миндалин в условиях хронического тонзиллита на ирригацию крипт суспензией наночастиц диоксида кремния
С.Г.Журавский1,2, А.Э.Шахназаров1, Г.Ю.Юкина1, И.А.Самусенко3, Е.А.Крыжановская1372
1Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург; 2Институт экспериментальной медицины ФГБНУ НМИЦ им. В.А.Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург; 3Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М.Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург
         
Изучена реакция нейтрофилов, макрофагов и тучных клеток на местное применение медицинского диоксида кремния в виде наночастиц размером 10-20 нм. Проведено гистологическое исследование послеоперационного материала небных миндалин 6 пациентов (24-44 лет) с декомпенсированной формой хронического тонзиллита. Перед двусторонней тонзиллэктомией в течение 5 сут выполняли промывание лакун: справа — суспензией сорбента “Полисорб МП” (1 г/л), слева — физиологическим раствором. Контакт наночастиц со слизистой оболочкой сокращал количество клеток, экспрессирующих миелопероксидазу (р=0.02), не изменял число тучных клеток и вызывал прирост CD68+-клеток (р=0.04). Местное применение медицинского сорбента на основе наночастиц диоксида кремния вызывает клеточные изменения, объясняемые их тканевой резорбцией. Выявленный в лимфоидной ткани небных миндалин положительный хемотаксис CD68+-макрофагов свидетельствует о стимуляции неспецифического и индуктивной фазы специфического иммунитета. Сделано предположение о том, что интернализация резидентными фагоцитами слизистой оболочки медицинских наночастиц может обеспечить целевое биораспределение фармакологических препаратов в небных миндалинах.
Ключевые слова: хронический тонзиллит, направленная лекарственная доставка, макрофаги, наночастицы диоксида кремния, “Полисорб МП”
Адрес для корреспонденции: s.jour@mail.ru. Журавский С.Г.
Литература
1.            Медицинская химия и клиническое применение диоксида кремния / Под. ред. А.А.Чуйко. Киев, 2003.
2.            Ющук Н.Д., Крюков А.И., Туровский А.Б., Попова И.А., Савостикова М.В. Значение персистирующей вирусной инфекции семейств Herpes viridae и Papilloma viridae при хронических воспалительных заболеваниях глотки // Вестник оториноларингол.
2017. Т. 82, № 4. С. 25-28.
3.            Batrakova E.V., Gendelman H.E., Kabanov A.V. Cell-mediated drug delivery // Expert Opin. Drug Deliv. 2011. Vol. 8, N 4. P. 415-433.
4.            Ghaffarian R., Muro S. Models and methods to evaluate transport of drug delivery systems across cellular barriers // J. Vis. Exp. 2013. Vol. 80. ID e50638. doi: 10.3791/50638.
5.            Jain N.K., Mishra V., Mehra N.K. Targeted drug delivery to macrophages // Expert Opin. Drug Deliv. 2013. Vol. 10, N 3. P. 353-367.
6.            Pepić I., Lovrić J., Filipović-Grčić J. How do polymeric micelles cross epithelial barriers? // Eur. J. Pharm. Sci. 2013. Vol. 50, N 1. P. 42-55.
7.            Sahin F., Gerceker D., Karasartova D., Ozsan T.M. Detection of herpes simplex virus type 1 in addition to Epstein-Bar virus in tonsils using a new multiplex polymerase chain reaction assay // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2007. Vol. 57, N 1. P. 47-51.
8.            Shkurupy V.A., Nadeev A.P., Karpov M.A., Bugrimova Y.S. Experimental cytomorphological studies of the reaction of mononuclear phagocyte system in granulomatosis of mixed (silicotic and tuberculous) etiology // Bull. Exp. Biol. Med. 2010. Vol. 149, N 4. P. 462-465.
9.            Synthetic Amorphous Silica (CAS No. 7631-86-9) JACC No. 51. European Centre for Ecotoxicology and Toxicology of Chemicals. Brussels, Sept. 2006. URL: http://www.ecetoc.org/wp-content/uploads/2014/08/JACC-051.pdf.
10.          Zhuravskii S., Yukina G., Kulikova O., Panevin A., Tomson V., Korolev D., Galagudza M. Mast cell accumulation precedes tissue fibrosis induced by intravenously administered amorphous silica nanoparticles // Toxicol. Mech. Methods. 2016. Vol. 26, N 4. P. 260-269. 
11.          Yang M., Jing L., Wang J., Yu Y., Cao L., Zhang L., Zhou X., Sun Z. Macrophages participate in local and systemic inflammation induced by amorphous silica nanoparticles through intratracheal instillation // Int. J. Nanomedicine.
2016.Vol. 11. P. 6217-6228.

Экспериментальная оценка свойств 3D-пористого материала на основе фосфата кальция на модели монокортикального диафизарного дефекта бедренной кости крысы
В.Э.Дубров1, Е.С.Климашина2,3, И.М.Щербаков1, Г.А.Шипунов1, В.И.Путляев2,3, П.В.Евдокимов2,3, А.А.Тихонов2, Д.А.Зюзин1, Н.В.Данилова1, П.Г.Мальков1377
1Факультет фундаментальной медицины, 2факультет наук о материалах, 3химический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
         
Исследован in vivo новый аллопластический высокопроницаемый материал на основе трикальциевого фосфата с архитектоникой Кельвина, созданной с помощью стереолитографической 3D-печати. У крыс моделировали монокортикальный дефект бедренной кости и имплантировали материал в зону дефекта. Через 24 нед животных выводили из эксперимента и проводили гистологическое исследование зоны дефекта. Зафиксировано по одному перелому бедренной кости с миграцией фиксатора при использовании исследуемого материала и синтетического материала сравнения chronOS®. Изучаемый материал по сравнению с традиционным костнопластическим материалом обладал лучшими остеокондуктивными свойствами, о чем свидетельствует большее количество костных трабекул и их площадь в зоне замещения дефекта.
Ключевые слова: костнозамещающие материалы, 3D-печать, архитектура Кельвина, дефекты кости
Адрес для корреспонденции: vduort@gmail.com. Дубров В.Э.
Литература
1.            Бартов М.С., Громов А.В., Попонова М.С., Савина Д.М., Никитин К.Е., Грунина Т.М., Манских В.Н., Гра О.А., Лунин В.Г., Карягина А.С., Гинцбург А.Л. Современные подходы к исследованию новых остеогенных биоматериалов на модели регенерации краниальных дефектов критического размера у крыс // Бюл. экспер. биол. 2016. Т. 162, № 8. С. 242-246.
2.            Мигулева И.Ю., Савотченко А.М., Петухова М.Н., Папанинов А.С., Клюквин И.Ю., Кислицына О.С., Сластинин В.В. Две новые модели экспериментального дефекта кости на голени крысы для исследования регенерации костной ткани после пластики различными материалами // Вопросы реконструкт. и пласт. хирургии. 2015. Т. 18, № 2. С. 34-45.
3.            Олесова В.Н., Амхадова М.А., Симакова Т.Г., Миргазизов М.З., Пожарицкая М.М. Экспериментальное обоснование эффективности отечественного остеоиндуктивного материала “Gamalant-паста-ФОРТЕ Плюс” в хирургической стоматологии // Бюл. экспер. биол.
2016. Т. 162, № 11. С. 618-620.
4.            Dau M., Ganz C., Zaage F., Frerich B., Gerber T. Hydrogel-embedded nanocrystalline hydroxyapatite granules (elastic blocks) based on a cross-linked polyvinylpyrrolidone as bone grafting substitute in a rat tibia model // Int. J. Nanomedicine. 2017. Vol. 12. P. 7393-7404.
5.            Dimitriou R., Mataliotakis G.I., Angoules A.G., Kanakaris N.K., Giannoudis P.V. Complications following autologous bone graft harvesting from the iliac crest and using the RIA: a systematic review // Injury. 2011. Vol. 42, Suppl. 2. P. 3-15.
6.            Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council // Official Journal of the European Union. Retrieved April 17, 2016.
7.            Finkemeier C.G. Bone-grafting and bone-graft substitutes // J. Bone Joint Surg. Am. 2002. Vol. 84-A, N 3. P. 454-464.
8.            Gaertner D.J., Hallman T.M., Hankenson F.C., Batchelder M.A. Anesthesia and Analgesia in Rodents // Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals / Eds R.Fish, P.Danneman, M.Brown, A.Karas. Acadenic Press, 2008. P. 239-297.
9.            Kolk A., Handschel J., Drescher W., Rothamel D., Kloss F., Blessmann M., Heiland M., Wolff K.D., Smeets R. Current trends and future perspectives of bone substitute materials — from space holders to innovative biomaterials // J. Craniomaxillofac. Surg. 2012. Vol. 40, N 8. P. 706-718.
10.          Leary S., Underwood W., Anthony R., Cartner S., Corey D., Grandin T., Greenacre C.B., Gwaltney-Bran S., McCrackin M.A., Meyer R. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals. Schaumburg, 2013.
11.          Maus U., Andereya S., Gravius S., Ohnsorge J.A., Niedhart C., Siebert C.H. BMP-2 incorporated in a tricalcium phosphate bone substitute enhances bone remodeling in sheep // J. Biomater. Appl. 2008. Vol. 22, N 6. P. 559-576.
12.          Putlyaev V.I., Evdokimov P.V., Safronova T.V., Klimashina E.S., Orlov N.K. Fabrication of osteoconductive CA3-XM2X(PO4)2 (M=NA, K) calcium phosphate bioceramics by stereolithographic 3D printing // Inorganic Materials. 2017. Vol. 53, N 5. P. 529-535.
13.          Schindelin J., Arganda-Carreras I., Frise E., Kaynig V., Longair M., Pietzsch T., Preibisch S., Rueden C., Saalfeld S., Schmid B., Tinevez J.Y., White D.J., Hartenstein V., Eliceiri K., Tomancak P., Cardona A. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis // Nat.
Methods. 2012. Vol. 9, N 7. P. 676-682.

Морфология и патоморфология
Регуляция пролиферативных процессов в корковом веществе надпочечников крыс транскрипционным фактором PRH при воздействии эндокринного дисраптора ДДТ на развивающийся организм
Н.В.Яглова, Д.А.Цомартова, С.С.Обернихин, С.В.Назимова, В.В.Яглов – 381
Лаборатория развития эндокринологической системы (зав. лабораторией — д-р мед. наук Н.В.Яглова) ФГБНУ НИИ морфологии человека, Москва, РФ
Влияние эндокринных дисрапторов на транскрипционную регуляцию морфогенетических процессов изучено мало. Исследованы изменения экспрессии транскрипционного фактора PRH и пролиферативной активности кортикостероцитов в пубертатном и постпубертатном периодах у крыс, развивавшихся в условиях низкодозового воздействия эндокринного дисраптора ДДТ. У крыс, подвергавшихся воздействию ДДТ, экспрессия PRH и пролиферация клеток в пубертатном периоде отличались от контроля. Выраженность взаимосвязи между этими показателями в клубочковой и сетчатой зонах была уменьшена, а в пучковой зоне отсутствовала. Таким образом, воздействие ДДТ в пре- и постнатальном периодах нарушает регуляцию транскрипционным фактором PRH пролиферативных процессов во всех зонах коркового вещества надпочечников, что указывает на один из механизмов действия дисраптора.
Ключевые слова: PRH, надпочечник, пролиферация, ДДТ, эндокринный дисраптор
Адрес для корреспонденции: yaglova@mail.ru. Яглова Н.В.
Литература
1.            Технический регламент Таможенного союза ТР ТС 021/2011 “О безопасности пищевой продукции”. СПб., 2015.
2.            Цомартова Д.А., Яглова Н.В., Яглов В.В. Изменения активации канонического
b-катенин/Wnt-сигналинга в корковом веществе надпочечников крыс, подвергавшихся воздействию эндокринного дисраптора дихлордифенилтрихлорэтана (ДДТ) в пренатальном и постнатальном периоде онтогенеза // Бюл. экспер. биол. 2017. Т. 164, № 10. С. 495-499.
3.            Яглова Н.В., Обернихин С.С., Цомартова Д.А., Назимова С.В., Яглов В.В. Экспрессия транскрипционного фактора PRH/HHEX в хромаффинных клетках надпочечников в постнатальном развитии и его роль в регуляции пролиферативных процессов // Бюл. экспер. биол.
2018. Т. 165, № 4. С. 505-508.
4.            Cong R., Jiang X., Wilson C.M., Hunter M.P., Vasavada H., Bogue C.W. Hhex is a direct repressor of endothelial cell-specific molecule 1 (ESM-1) // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. Vol. 346, N 2. P. 535-545.
5.            Crompton M.R., Bartlett T.J., MacGregor A.D., Manfioletti G., Buratti E., Giancotti V., Goodwin G.H. Identification of a novel vertebrate homeobox gene expressed in haematopoietic cells // Nucleic Acids Res. 1992. Vol. 20, N 21. P. 5661-5567.
6.            Kershaw R.M., Roberts D., Wragg J., Shaaban A.M., Humphreys E., Halsall J., Price L., Bicknell R., Gaston K., Jayaraman P.S. Proline-Rich Homeodomain protein (PRH/HHEX) is a suppressor of breast tumour growth // Oncogenesis. 2017. Vol. 6, N 6. e346. doi: 10.1038/oncsis.2017.42.
7.            Kershaw R.M., Siddiqui Y.H., Roberts D., Jayaraman P.S., Gaston K. PRH/HHex inhibits the migration of breast and prostate epithelial cells through direct transcriptional regulation of Endoglin // Oncogene. 2014. Vol. 33, N 49. P. 5592-5600.
8.            Noy P., Williams H., Sawasdichai A., Gaston K., Jayaraman P.S. PRH/Hhex controls cell survival through coordinate transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor signaling // Mol. Cell. Biol. 2010. Vol. 30, N 9. P. 2120-2134. doi: 10.1128/MCB. 01511-09.
9.            Pignatelli D., Xiao F., Gouveia A.M., Ferreira J.G., Vinson G.P. Adrenarche in the rat // J. Endocrinol. 2006. Vol. 191, N 1. P. 301-308.
10.          Topisirovic I., Culjkovic B., Cohen N., Perez J.M., Skrabanek L., Borden K.L. The proline-rich homeodomain protein, PRH, is a tissue-specific inhibitor of eIF4E-dependent cyclin D1 mRNA transport and growth // EMBO J. 2003. Vol. 22, N 3. P. 689-703.
11.          Tyczewska M., Rucinski M., Ziolkowska A., Szyszka M., Trejter M., Hochol-Molenda A., Nowak K.W., Malendowicz L.K. Enucleation-induced rat adrenal gland regeneration: expression profile of selected genes involved in control of adrenocortical cell proliferation // Int. J. Endocrinol. 2014. Vol. 2014. 130359. doi: 10.1155/2014/130359.
12.          Yamazaki H., Takano R., Shimizu M., Murayama N., Kitajima M., Shono M. Human blood concentrations of dichlorodiphenyltrichloroethane (DDT) extrapolated from metabolism in rats and humans and physiologically based pharmacokinetic modeling // J. Health Sci. 2010.
Vol. 56, N 5. P. 566-575.

Совместное действие костного морфогенетического белка-2 и эритропоэтина на регенерацию краниальных дефектов костной ткани у мышей
А.В.Громов1, М.С.Бартов1, П.А.Орлова1, В.Н.Манских1,2, М.С.Кривозубов1, Т.М.Грунина1, М.С.Манухина1, Н.В.Струкова1, К.Е.Никитин1, В.Г.Лунин1,3, А.С.Карягина1,2,3, А.Л.Гинцбург1386
1ФГБУ НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи Минздрава России, Москва; 2НИИ физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; 3ФГБНУ Всеросийский НИИ сельскохозяйственной биотехнологии, Москва, РФ
         
На модели регенерации краниальных дефектов критического размера у мышей изучено совместное действие BMP-2 прокариотического происхождения в дозах 1 и 10 мкг и рекомбинантного эритропоэтина (“Эпостим”), вводимого подкожно в область дефекта в суммарной дозе 6000 МЕ/кг. Эритропоэтин существенно улучшал количественные и качественные характеристики костной ткани в зоне имплантации при совместном применении с BMP-2 как в дозе 1 мкг, так и 10 мкг.
Ключевые слова: BMP-2, эритропоэтин, эпостим, регенерация костной ткани, дефект критического размера
Адрес для корреспонденции: alexander.v.gromov@gmail.com. Громов А.В.
Литература
1.            Громов А.В., Никитин К.Е., Карпова Т.А., Бартов М.С., Мишина Д.М., Субботина М.Е., Шевлягина Н.В., Сергиенков М.А., Соболева Л.А., Котнова А.П., Шарапова Н.Е., Семихин А.С., Диденко Л.В., Карягина А.С., Лунин В.Г. Разработка методики получения деминерализованного костного матрикса с максимальным остаточным содержанием нативных факторов роста костной ткани // Биотехнология. 2012. № 5. С. 66-75.
2.            Шарапова Н.Е., Котнова А.П., Галушкина З.М., Лаврова Н.В., Полетаева Н.Н., Тухватуллин А.Э., Семихин А.С., Громов А.В., Соболева Л.А., Ершова А.С., Зайцев В.В., Сергиенко О.В., Лунин В.Г., Карягина А.С. Получение рекомбинантного костного морфогенетического белка 2 человека в клетках Escherichia coli и тестирование его биологической активности in vitro и in vivo // Мол. биол.
2010. Т. 44, № 6. С. 1036-1044.
3.            Bartov M.S., Gromov A.V., Manskih V.N., Makarova E.B., Rubshtein A.P., Poponova M.S., Savina D.M., Savin K.S., Nikitin K.E., Grunina T.M., Boksha I.S., Orlova P.A., Krivozubov M.S., Subbotina M.E., Lunin V.G., Karyagina A.S., Gintsburg A.L. Recombinant human Bone Morphogenetic Protein-2 (rhBMP-2) with additional protein domain synthesized in E. coli: in vivo osteoinductivity in experimental models on small and large laboratory animals // Bull. Exp. Biol. Med. 2017. Vol. 164, N 2. P. 148-151.
4.            Bartov M.S., Gromov A.V., Poponova M.S., Savina D.M., Nikitin K.E., Grunina T.M., Manskikh V.N., Gra O.A., Lunin V.G., Karyagina A.S., Gintsburg A.L. Modern approaches to studies of new osteogenic biomaterials on the model of regeneration of critical-size cranial defects in rats // Bull. Exp. Biol. Med. 2016. Vol. 162, N 2. P. 273-276.
5.            Carragee E.J., Hurwitz E.L., Weiner B.K. A critical review of recombinant human bone morphogenetic protein-2 trials in spinal surgery: emerging safety concerns and lessons learned // Spine J. 2011. Vol. 11, N 6. P. 471-491.
6.            Egan K.P., Brennan T.A., Pignolo R.J. Bone histomorphometry using free and commonly available software // Histopathology. 2012. Vol. 61, N 6. P. 1168-1173.
7.            Karyagina A.S., Boksha I.S., Grunina T.M., Demidenko A.V., Poponova M.S., Sergienko O.V., Lyashchuk A.M., Galushkina Z.M., Soboleva L.A., Osidak E.O., Bartov M.S., Gromov A.V., Lunin V.G. Two variants of recombinant human Bone Morphogenetic Protein-2 (rhBMP-2) with additional protein domains: synthesis in an Escherichia coli heterologous expression system // Biochemistry (Mosc). 2017. Vol. 82, N 5. P. 613-624.
8.            Li C., Shi C., Kim J., Chen Y., Ni S., Jiang L., Zheng C., Li D., Hou J., Taichman R.S., Sun H. Erythropoietin promotes bone formation through EphrinB2/EphB4 signaling // J. Dent. Res. 2015. Vol. 94, N 3. P. 455-463.
9.            Nair A.M., Tsai Y.T., Shah K.M., Shen J., Weng H., Zhou J., Sun X., Saxena R., Borrelli J.Jr, Tang L. The effect of erythropoietin on autologous stem cell-mediated bone regeneration // Biomaterials. 2013. Vol. 34, N 30. P. 7364-7371.
10.          Omlor G.W., Kleinschmidt K., Gantz S., Speicher A., Guehring T., Richter W. Increased bone formation in a rabbit long-bone defect model after single local and single systemic application of erythropoietin // Acta Orthop. 2016. Vol. 87, N 4. P. 425-431.
11.          Sun H., Jung Y., Shiozawa Y., Taichman R.S., Krebsbach P.H. Erythropoietin modulates the structure of bone morphogenetic protein 2-engineered cranial bone // Tissue Eng. Part A. 2012. Vol. 18, N 19-20. P. 2095-2105.
12.          Tierney E.G., McSorley K., Hastings C.L., Cryan S.A., O'Brien T., Murphy M.J., Barry F.P., O'Brien F.J., Duffy G.P. High levels of ephrinB2 over-expression increases the osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells and promotes enhanced cell mediated mineralisation in a polyethyleneimine-ephrinB2 gene-activated matrix // J. Control.
Release. 2013. Vol. 165, N 3. P. 173-182.

Методики
Совместное воздействие GDNF и HGF стимулирует рост аксонов, усиливая фосфорилирование ERK1/2
Ю.Д.Молокотина1, М.А.Болдырева1,2, Ю.С.Стафеев1,2, Е.В.Семина1,2, Е.К.Шевченко1,2, Е.С.Зубкова1,2, И.Б.Белоглазова1,2, Е.В.Парфенова1,2 391
1ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва; 2Факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
         
Установлен стимулирующий эффект комбинации HGF (фактора роста гепатоцитов) и GDNF (глиального нейротрофического фактора) на отрастание нейритов в модели спинальных ганглиев. Механизм усиления отрастания нейритов в модели спинальных ганглиев сопряжен с трансактивацией рецептора HGF c-met в присутствии как HGF, так и GDNF. В ответ на действие исследуемой комбинации факторов роста происходит значительная активация митогенного сигнального каскада, опосредуемого протеинкиназами ERK1/2, что может являться предполагаемым механизмом увеличения числа нейритов под влиянием комбинации HGF и GDNF. Полученные результаты могут быть использованы для разработки эффективных методов восстановления с использованием комбинации факторов GDNF и HGF нарушенной функции периферического нерва в результате травматического и ишемического повреждения.
Ключевые слова: фактор роста гепатоцитов, глиальный нейротрофический фактор, регенерация, повреждение периферического нерва
Адрес для корреспонденции: mboldyreva@inbox.ru. Молокотина Ю.Д.
Литература
1.            Allen S.J., Watson J.J., Shoemark D.K., Barua N.U., Patel N.K. GDNF, NGF and BDNF as therapeutic options for neurodegeneration // Pharmacol. Ther. 2013. Vol. 138, N 2. P. 155-175.
2.            Boldyreva M.
А., Bondar I.V., Stafeev I.S., Makarevich P.I., Beloglazova I.B., Zubkova E.S., Shevchenko E.K., Molokotina Y.D., Karagyaur M.N., Rаtner Е.I., Parfyonova Y.V. Plasmid-based gene therapy with hepatocyte growth factor stimulates peripheral nerve regeneration after traumatic injury // Biomed. Pharmacother. 2018. Vol. 101. P. :682-690.
3.            David M.D., Yeramian A., Duñach M., Llovera M., Cantí C., de Herreros A.G., Comella J.X., Herreros J. Signalling by neurotrophins and hepatocyte growth factor regulates axon morphogenesis by differential beta-catenin phosphorylation // J. Cell Sci. 2008. Vol. 121, Pt 16. P. 2718-2730.
4.            Deumens R., Bozkurt A., Meek M.F., Marcus M.A., Joosten E.A., Weis J., Brook G.A. Repairing injured peripheral nerves: bridging the gap // Prog. Neurobiol. 2010. Vol. 92, N 3. P. 245-276.
5.            Lee S.K., Wolfe S.W. Peripheral nerve injury and repair // J. Am. Acad. Orthop. Surg. 1999. Vol. 8, N 4. P. 243-252. doi: 10.1097/00006534-198804000-00086.
6.            Ma Q., Cai M., Shang J.W., Yang J., Gu X.Y., Liu W.B., Yang Q. In vitro neural differentiation of bone marrow stromal cells induced by hepatocyte growth factor and glial cell derived neurotrophic factor // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 2016. Vol. 20, N 22. P. 4654-4663.
7.            Makarevich P.I., Dergilev K.V., Tsokolaeva Z.I., Boldyreva M.A., Shevchenko E.K., Gluhanyuk E.V., Gallinger J.O., Menshikov M.Y., Parfyonova Y.V. Angiogenic and pleiotropic effects of VEGF165 and HGF combined gene therapy in a rat model of myocardial infarction // PLoS One. 2018. Vol. 13, N 5. ID e0197566. doi: 10.1371/journal.pone.0197566.
8.            Nakamura T., Sakai K., Nakamura T., Matsumoto K. Hepatocyte growth factor twenty years on: Much more than a growth factor // J. Gastroenterol. Hepatol. 2011. Vol. 26, Suppl. 1. P. 188-202.
9.            Navarro X., Vivó M., Valero-Cabré A. Neural plasticity after peripheral nerve injury and regeneration // Prog. Neurobiol. 2007. Vol. 82, N 4. P. 163-201.
10.          Popsueva A., Poteryaev D., Arighi E., Meng X., Angers-Loustau A., Kaplan D., Saarma M., Sariola H. GDNF promotes tubulogenesis of GFRa1-expressing MDCK cells by Src-mediated phosphorylation of Met receptor tyrosine kinase // J. Cell Biol. 2003. Vol. 161, N 1. P. 119-129.
11.          Reyes O., Sosa I., Kuffler D.P. Promoting neurological recovery following a traumatic peripheral nerve injury // P. R. Health Sci. J. 2005. Vol. 24, N 3. P. 215-223.
12.          Sariola H., Saarma M. Novel functions and signalling pathways for GDNF // J Cell Sci. 2003. Vol. 116, Pt 19. P. 3855-3862.
13.          Wang X., Wang Z., Yao Y., Li J., Zhang X., Li C., Cheng Y., Ding G., Liu L., Ding Z. Essential role of ERK activation in neurite outgrowth induced by
a-lipoic acid // Biochim. Biophys. Acta. 2011. Vol. 1813, N 5. P. 827-838.
14.          Young H.E., Black A.C. Pluripotent Stem Cells, Endogenous versus Reprogrammed // MOJ Orthop. Rheumatol. 2014. Vol. 1, N 3. ID 00019. doi: 10.15406/mojor. 2014.01.00019.
15.          Zhang W., Li Z. The effects of target skeletal muscle cells on dorsal root ganglion neuronal outgrowth and migration in vitro // PLoS One. 2013. Vol. 8, N 1. ID e52849. doi: 10.1371/journal.pone.0052849.